TRPC6 channels are required for proliferation, migration and invasion of breast cancer cell lines by modulation of Orai1 and Orai3 surface exposure

Abstract

Los canales potenciales receptores transitorios transmiten información de señalización de una serie de estímulos a una amplia variedad de funciones celulares, principalmente induciendo cambios en la concentración de Ca2+ citosólico. Se ha informado que diferentes miembros de las subfamilias TRPC, TRPM y TRPV juegan un papel en la tumorigénesis. Aquí mostramos que el receptor de estrógeno positivo y las líneas celulares de cáncer de mama triple negativo, MCF7 y MDA-MB-231, respectivamente, exhiben una mayor expresión del El canal TRPC6 comparado con la línea celular MCF10A no tumoral. Derribo in vitro de TRPC6 utilizando ARNhc deteriorado MCF7 y MDA-MB-231 proliferación, migración e invasión celular detectada por incorporación de BrdU, curación de heridas y ensayos de cámara Boyden, respectivamente. Usando el silenciamiento de TRPC6 mediado por el ARNi así como la sobreexpresión del mutante TRPC6 dominante-negativo muerto en el poro hemos encontrado que TRPC6 juega un papel relevante en la activación de la entrada de Ca2+ operada por el almacén en las líneas celulares de cáncer de mama pero no en las células de mama no tumorales. Por último, hemos descubierto que el TRPC6 interactúa con Orai1 y Orai3 en las células MCF7 y MDA-MB-231 y es necesario para la translocación de Orai1 y Orai3 a la membrana plasmática en las células MDA-MB-231 y MCF7, respectivamente, al agotarse el Ca2+. Estos hallazgos introducen un nuevo mecanismo para la modulación del influjo de Ca2+ y el desarrollo de diferentes características cancerígenas en las células del cáncer de mama.

Transient receptor potential channels convey signaling information from a number of stimuli to a wide variety of cellular functions, mainly by inducing changes in cytosolic Ca2+ concentration. Different members of the TRPC, TRPM and TRPV subfamilies have been reported to play a role in tumorigenesis. Here we show that the estrogen receptor positive and triple negative breast cancer cell lines, MCF7 and MDA-MB-231, respectively, exhibit enhanced expression of the TRPC6 channel as compared to the non-tumoral MCF10A cell line. In vitro TRPC6 knockdown using shRNA impaired MCF7 and MDA-MB-231 cell proliferation, migration and invasion detected by BrdU incorporation, wound healing and Boyden chamber assays, respectively. Using RNAi-mediated TRPC6 silencing as well as overexpression of the pore-dead dominant-negative TRPC6 mutant we have found that TRPC6 plays a relevant role in the activation of store-operated Ca2+ entry in the breast cancer cell lines but not in non-tumoral breast cells. Finally, we have found that TRPC6 interacts with Orai1 and Orai3 in MCF7 and MDA-MB-231 cells and is required for the translocation of Orai1 and Orai3 to the plasma membrane in MDA-MB-231 and MCF7 cells, respectively, upon Ca2+ store depletion. These findings introduce a novel mechanism for the modulation of Ca2+ influx and the development of different cancer hallmarks in breast cancer cells.