Stanniocalcin 2 regulates non-capacitative Ca2+ entry and aggregation in mouse platelets

Abstract

La estanniocalcina 2 (STC2) es una proteína de pescado que controla el metabolismo del Ca2+ y del fosfato en el cuerpo. La STC2 también ha sido descrita en mamíferos, y como la función de las plaquetas depende en gran medida del Ca2+ tanto extracelular como intracelular, hemos explorado su expresión y función en estas células. Los ratones STC2-/- exhiben un menor tiempo de sangrado de la cola que los ratones WT. Las plaquetas de los ratones con deficiencia de STC2 mostraron una mayor agregación, así como una mayor movilización de Ca2+ en respuesta a la trombina agonista fisiológica (Thr) y al análogo del diacilglicerol, OAG, un activador selectivo de los canales de entrada de Ca2+ no capacitativos. Curiosamente, las plaquetas de los ratones STC2-/- exhiben una interacción atenuada entre STIM1 y Orai1 en respuesta a Thr, lo que sugiere que la STC2 es necesaria para la interacción STIM1-Orai1 evocada por Thr y la subsiguiente entrada de Ca2+ en el almacén (SOCE). Hemos evaluado además los posibles cambios en la expresión de los canales más relevantes involucrados en la entrada no capacitiva de Ca2+ en las plaquetas. A continuación, se evaluó la expresión de la proteína Orai3, TRPC3 y TRPC6 mediante Western blotting, y los resultados revelaron que, si bien la expresión de Orai3 aumentó en los ratones con deficiencia de STC2, otras como TRPC3 y TRPC6 permanecen casi inalteradas. En resumen, nuestros resultados proporcionan por primera vez pruebas de un papel de STC2 en la fisiología plaquetaria a través de la regulación de la entrada de Ca2+ inducida por agonistas, que podría estar mediada por la regulación de la expresión del canal de Orai3.

Stanniocalcin 2 (STC2) is a fish protein that controls body Ca2+ and phosphate metabolism. STC2 has also been described in mammals, and as platelet function highly depends on both extracellular and intracellular Ca2+, we have explored its expression and function in these cells. STC2−/− mice exhibit shorter tail bleeding time than WT mice. Platelets from STC2-deficient mice showed enhanced aggregation, as well as enhanced Ca2+ mobilization in response to the physiological agonist thrombin (Thr) and the diacylglycerol analog, OAG, a selective activator of the non-capacitative Ca2+ entry channels. Interestingly, platelets from STC2−/− mice exhibit attenuated interaction between STIM1 and Orai1 in response to Thr, thus suggesting that STC2 is required for Thr-evoked STIM1-Orai1 interaction and the subsequent store-operated Ca2+ entry (SOCE). We have further assessed possible changes in the expression of the most relevant channels involved in non-capacitative Ca2+ entry in platelets. Then, protein expression of Orai3, TRPC3 and TRPC6 were evaluated by Western blotting, and the results revealed that while the expression of Orai3 was enhanced in the STC2-deficient mice, others like TRPC3 and TRPC6 remains almost unaltered. Summarizing, our results provide for the first time evidence for a role of STC2 in platelet physiology through the regulation of agonist-induced Ca2+ entry, which might be mediated by the regulation of Orai3 channel expression.