Aplicación de la técnica de análisis de secuencias repetitivas en tándem (MLVA) en la subtipificación y seguimiento epidemiológico de aislados de cepas verotoxigénicas y enterohemorrágicas de "Escherichia coli" de origen humano y animal

Abstract

Los “Escherichia coli” verotoxigénicos (ECVT) son importantes patógenos para los seres humanos, responsables de procesos patológicos graves como la colitis hemorrágica o el síndrome urémico hemolítico. La electroforesis en campo pulsante (PFGE) es la técnica de referencia para la subtipificación de esta bacteria y de otros enteropatógenos. La técnica de análisis de secuencias repetitivas en tándem (MLVA) ha sido empleada igualmente con éxito para el estudio de aislados ECVT. Sin embargo, se necesitan estudios con un mayor número de aislados y diferentes situaciones epidemiológicas que permitan demostrar su aplicabilidad. Por ello, se estudió la aplicabilidad de la técnica de MLVA empleando dos protocolos para la subtipificación de 181 aislados de “E. coli” O157:H7 y ECVT no‐O157 de los serogrupos O5, O91 y O146, obtenidos a partir de distintos orígenes con y sin información epidemiológica conocida. Ambos protocolos de la técnica de MLVA demostraron su aplicabilidad para la subtipificación de aislados de “E. coli” O157:H7. Además, el protocolo descrito por Noller “et al.” (2003), empleado en combinación con la técnica de PFGE, aumentó su poder de discriminación, mejorando la capacidad para diferenciar entre aislados con y sin relación epidemiológica. Sin embargo, el protocolo descrito por Lindstedt “et al.” (2007) empleado para la subtipificación de aislados ECVT no‐O157 de los serogrupos O5, O91 y O146 no permitió una discriminación apropiada para su aplicación sistemática. No obstante, la técnica ha permitido el seguimiento de aislados secuenciales temporales de los serogrupos O5, O91 y O146 procedentes de un mismo individuo.

Verotoxigenic “Escherichia coli” (VTEC) are important pathogens for humans, responsible for serious pathological processes such as haemorrhagic colitis or haemolytic uremic syndrome. The Pulsed‐Field Gel Electrophoresis (PFGE) is the current “gold standard” technique for the genotypic characterization of this bacterium and other enteropathogens. The Multiple‐Locus Variable number “tandem repeat Analysis” (MLVA) technique has also been successfully used for the study of VTEC isolates. However, studies with greater number of isolates and different epidemiological situations are needed to demonstrate its applicability. To address these needs, the applicability of the MLVA technique was studied using two protocols for the genotypic characterization of 181 isolates of “E. coli” O157:H7 and VTEC non‐O157 of serogroups O5, O91 and O146. Isolates were obtained from different origins and had known and unknown epidemiological information. Both MLVA protocols demonstrated its applicability for the genotypic characterization of “E. coli” O157:H7 isolates. Moreover, the MLVA protocol described by Noller et al. (2003), together with PFGE technique, increased its discriminative power, improving PFGE ability to differentiate among isolates with and without known epidemiological information. However, the MLVA protocol described by Lindstedt et al. (2007) for the genotypic characterization of VTEC isolates non‐O157 of serogroups O5, O91 and O146 did not allow an appropriate discrimination for its systematic application. However, the technique has allowed the monitoring over time isolates from serogroups O5, O91 and O146 belonging to the same animal.