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http://hdl.handle.net/10662/15313
Title: | Extracción de proteínas |
Authors: | Martínez Chacón, Guadalupe Fuentes Rodríguez, José Manuel Yakhine-Diop, Sokhna M. S. Rodríguez Arribas, Mario Paredes Barquero, Marta Alegre Cortés, Eva Canales Cortés, Saray Duque González, Gema Giménez Bejarano, Alberto Delgado Luceño, María Pura Uribe Carretero, Elisabet Niso Santano, Mireia González Polo, Rosa Ana |
Keywords: | Proteínas;Bioquímica;Aislamiento de proteínas;Proteins;Biochemistry;Protein isolation |
Issue Date: | 2021 |
Publisher: | Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones |
Abstract: | El estudio sobre la extracción de proteínas consiste en que, antes de usar, el reactivo A y reactivo B se complementaron con cóctel inhibidor de proteasa 10X (Sigma-Aldrich, P2714), ortovanadato de sodio al 0,5 M al 20 % (S6508, Sigma) y fluoruro de sodio al 0,1 M al 1 % (131675, Panreac). Las mitocondrias aisladas se lisaron en CHAPS al 2 % (C3023, Sigma). Las extracciones citosólicas y mitocondriales se analizaron mediante transferencia Western blotting. El protocolo B debe ser rápido, intentando no sobrepasar 30 segundos. Por otro lado, la adición de 1 μg/ml Leupeptina. 1 μg/ml Pepstatina. 1 μg/ml Aprotinina. 1 μg/ml Benzamidina. El PMSF se diluye en 1 ml de etanol absoluto filtrado. Si hay problemas con el método, probar modificando la concentración de digitonina. The protein extraction study consists of reagent A and reagent B supplemented with 10X protease inhibitor cocktail (Sigma-Aldrich, P2714), 0,5 M 20 % sodium orthovanadate (S6508, Sigma) and 0,1 M 1 % sodium fluoride (131675, Panreac) before use. Isolated mitochondria were lysed in 2 % CHAPS (C3023, Sigma). Cytosolic and mitochondrial extractions were analysed by Western blotting. Protocol B should be fast, trying not to exceed 30 seconds. On the other hand, the addition of 1 μg/ml Leupeptin. 1 μg/ml Pepstatin. 1 μg/ml Aprotinin. 1 μg/ml Benzamidine. PMSF is diluted in 1 ml of filtered absolute ethanol. If there are problems with the method, try modifying the digitonin concentration. |
URI: | http://hdl.handle.net/10662/15313 |
ISBN: | 978-84-09-30816-3 |
Appears in Collections: | DBYBM - Libros o capítulos de libros |
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