Caracterización del fluido folicular y oviductal equino: aplicación a las técnicas de fecundación in vitro

Abstract

El desarrollo de las técnicas de fecundación in vitro nos ha permitido producir embriones en el laboratorio en diferentes especies domésticas. Sin embargo, para conseguir resultados exitosos es necesario conocer el ambiente en el que estos procesos suceden de manera fisiológica, para lo cual es imprescindible conocer la composición del fluido folicular y oviductal. En el caballo, estos estudios son escasos, en base a lo cual en la presente Tesis Doctoral. Nos propusimos estudiar la composición metabolómica del fluido folicular preovulatorio comparándola con medios comerciales. Analizar y comparar la proteómica del fluido oviductal pre- y post- ovulatorio. Estudiar el efecto de diferentes concentraciones de metabolitos oviductales sobre parámetros relacionados con la capacitación en espermatozoides equinos descongelados. Comprobar el efecto del fluido oviductal post-ovulatorio en la inducción de la fosforilación en tirosina en espermatozoides descongelados y en la fecundación in vitro convencional. En el primer trabajo de esta Tesis Doctoral encontramos diferencias entre los metabolitos presentes en el fluido folicular preovulatorio y en los medios comerciales. En el segundo trabajo demostramos que existen diferencias significativas en el proteoma periovulatorio. En el tercer trabajo valoramos el efecto de diferentes concentraciones de metabolitos encontrados en el fluido oviductal: mioinositol, lactato, glicina, ß-alanina e histamina, demostrando que estos metabolitos, a las concentraciones usadas, no ejercen efectos en los parámetros evaluados. Por último, demostramos que la adicción de fluido oviductal a una concentración de 0,125% (v/v) a un medio capacitante induce fosforilación en tirosina en los espermatozoides, pero no se asocia a una fecundación exitosa.

The development of in vitro fertilization techniques has allowed us to produce embryos in the laboratory in different domestic species. However, to achieve successful results it is necessary to know the environment in which these processes occur physiologically, for which it is essential to know the composition of the follicular and oviductal fluid. In the horse, these studies are uncommon, based on which in the present Doctoral Thesis we set out to study the metabolomic composition of preovulatory follicular fluid by comparing it with commercial media. Analyze and compare the proteomics of pre- and post-ovulatory oviductal fluid. To study the effect of different concentrations of oviductal metabolites on parameters related to capacitation in thawed equine spermatozoa. To test the effect of post-ovulatory oviductal fluid on the induction of tyrosine phosphorylation in thawed spermatozoa and in conventional in vitro fertilization. In the first work of this Doctoral Thesis, we found differences between the metabolites present in the preovulatory follicular fluid and in the commercial media. In the second work we demonstrated that there are significant differences in the periovulatory proteome. In the third work we evaluated the effect of different concentrations of metabolites found in the oviductal fluid: myoinositol, lactate, glycine, ß-alanine and histamine, demonstrating that these metabolites, at the concentrations used, do not exert effects on the parameters evaluated. Finally, we show that the addition of oviductal fluid at a concentration of 0.125% (v/v) to a capacitating medium induces tyrosine phosphorylation in spermatozoa, but is not associated with successful fertilization.