Preselección del sexo en caballos: identificación de factores limitantes

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Preselección del sexo en caballos: identificación de factores limitantes

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Title: Preselección del sexo en caballos: identificación de factores limitantes
Author: Silva, Carolina Maria Balão da
Abstract: El sexaje de espermatozoides por citometría de flujo es una técnica valorable en reproducción equina. Sin embargo, es probable que esté dañando el espermatozoide. Mientras que la tinción con H33342 durante 90 minutos afecta la motilidad y otros parámetros cinéticos, el proceso de sexaje afecta principalmente la membrana plasmática, incrementando su permeabilidad. Estas alteraciones causan la muerte celular precoz, además de relacionarse con un incremento en el estrés oxidativo. De hecho, se registró en el semen sexado un incremento en la cantidad de especies reactivas de oxigeno producidas, oxidación y fragmentación del ADN. También ocurrió un incremento en la subpopulación espermática con potencial de membrana mitocondrial reducido. En esta tecnología, el estrés oxidativo aparentemente daña el ADN, induciendo muerte celular. Además, se obtuvieron resultados semejantes tras la refrigeración de muestras teñidas durante 20h, antes del sexaje. Esto representa una nueva opción para el empleo de esta técnica, permitiendo el envío de semen refrigerado al centro de inseminación. Finalmente, ambas muestras de espermatozoides (control y sexadas) se unieron de forma igual a los ovocitos de porcino. Sin embargo, la reactividad del acrosoma se incrementó y los patrones de fosforilación cambiaron en las muestras de semen sexado. Estos datos apuntan para una mayor destabilización del plasmalema, posiblemente relacionada con la capacitación. La membrana del espermatozoide parece ser el orgánulo más afectado tras el sexaje, acelerando la muerte prematura por un aumento en el daño oxidativo y genómico. La prevención de este daño podrá incrementar el tiempo de vida de los espermatozoides sexados.Flow cytometric sex sorting is a valuable technique to use on equine reproduction. Nevertheless, the effects that it causes on the spermatozoon are not negligible. While staining with H33342 for 90 minutes affects total and progressive motility, and other kinematic parameters, the sorting procedure itself mostly damages the plasmalemma. These damages cause an increase in the permeability of the plasmatic membrane. Apart from inducing premature cell death, these membranary alterations are probably related to an increase in the oxidative stress. Indeed, total ROS production, genomic oxidation and fragmentation were increased in sex sorted semen. Also, an increase in the subpopulation of spermatozoa with lower mitochondrial membrane potential was also registered. In this technology, oxidative stress apparently induces DNA damage and cell death. Moreover, approximately the same results were obtained after 20h refrigeration of stained samples, prior to sorting. This provides a new option for the sorting procedure, allowing shipping of refrigerated stallion semen to the insemination centre. Finally, binding to porcine oocytes was approximately equal between sorted and unsorted samples. However, acrosomal reactivity was increased in sorted stallion spermatozoa, and tyrosine phosphorylation patterns were also altered after sorting. Both data account for an advanced status of membrane destabilization, possibly related to capacitation. The plasmalemma appears to be the most affected organelle after the sorting procedure. Destabilization of the membrane hastens premature death, probably through increased oxidative stress and genomic damage. Prevention of this damage should be considered, as it could increase the lifetime of sorted cells.
Description: Tesis doctoral con la Mención de "Doctor Internacional"
URI: http://hdl.handle.net/10662/2274
Date: 2014-11-26


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