Comparative analysis of cytokine transcript profiles within mediastinal lymph node compartments of pigs after infection with porcine reproductive and respiratory syndrome genotype 1 strains differing in pathogenicity

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Comparative analysis of cytokine transcript profiles within mediastinal lymph node compartments of pigs after infection with porcine reproductive and respiratory syndrome genotype 1 strains differing in pathogenicity

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Título: Comparative analysis of cytokine transcript profiles within mediastinal lymph node compartments of pigs after infection with porcine reproductive and respiratory syndrome genotype 1 strains differing in pathogenicity
Autor: García Nicolás, Obdulio; Rosales Santana, Rubén S.; Pallarés Rubio, Francisco J.; Risco Pérez, David; Quereda Torres, Juan José; Graham, Simon P.; Frossard, Jean-Pierre; Morgan, Sophie B.; Steinbach, Falko; Drew, Trevor W.; Strickland, Tony S.; Salguero Lamillar, Francisco José
Resumen: El virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) induce una respuesta inmune débil, permitiendo su persistencia en diferentes órganos de cerdos infectados. Esto se ha atribuido a la habilidad de PRRSV para influir en las respuestas inducidas por las citocinas. En este estudio, investigamos los perfiles transcripcionales de citocina en diferentes compartimentos de los ganglios linfáticos mediastínicos de cerdos infectados con tres cepas de diferentes de patogenicidad del genotipo 1 PRRSV: prototipo de baja virulencia del virus Lelystad (LV) y la cepa de campo británico 215-06 y el subtipo 3 altamente virulentas SU1-Bel aislar de Belarús. Hemos utilizado una combinación de micro-disección de captura láser (LCM) seguida por la PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR) e inmunohistoquímica (IHQ), a partir de la detección de marcadores de células inmunitarias (CD3, CD79a y MAC387) y la RT-qPCR para la cuantificación de PRRSV y los transcripciones de citocinas. Frente a un simulacro en cerdos infectados, encontramos una baja significativa en la regulación de TNF-α e IFN-α interfolicular y folicular y en las áreas de los ganglios linfáticos mediastínicos desde 3 días post-infección (ppp) en los animales infectados con cepas de los tres. Esto fue acompañado por una depleción transitoria de células B y células T y la infiltración de macrófagos en los folículos junto con la depleción de células T en lel área interfolicula. Una regulación retardada de IFN-γ e IL-23p19 se observó principalmente en los folículos. La carga de PRRSV fue superior en todas las áreas y puntos en el tiempo estudiado en los animales infectados con la cepa de Bel-SU1. Este trabajo describe la primera aplicación de LCM para estudiar la transcripción de citocinas y perfiles de distribución del virus en diferentes compartimentos del ganglio linfático de cerdos.Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) induces a weak immune response enabling it to persist in different organs of infected pigs. This has been attributed to the ability of PRRSV to influence the induction ofcytokine responses. In this study, we investigated the cytokine transcriptional profiles in different compartments ofthe mediastinal lymph node of pigs infected with three genotype 1 PRRSV strains of differing pathogenicity: the low virulence prototype Lelystad virus (LV), and UK field strain 215–06 and the highly virulent subtype 3 SU1-Bel isolate from Belarus. We have used a combination of laser capture micro-dissection (LCM) followed by real time quantitative PCR (RT-qPCR) and immunohistochemical (IHC) detection of immune cell markers (CD3, CD79a and MAC387) and RT-qPCR quantification of PRRSV and cytokine transcripts. Compared to mock infected pigs, we found a significant downregulation of TNF-α and IFN-α in follicular and interfollicular areas of the mediastinal lymph node from 3 days post-infection (dpi) in animals infected with all three strains. This was accompanied by a transient B cell depletion and T cell and macrophage infiltration in the follicles together with T cell depletion in the interfollicular areas. A delayed upregulation of IFN-γ and IL-23p19 was observed mainly in the follicles. The PRRSV load was higher in all areas and time-points studied in the animals infected with the SU1-Bel strain. This paper describes the first application of LCM to study the cytokine transcript profiles and virus distribution in different compartments of the lymph node of pigs.
URI: http://hdl.handle.net/10662/5639
Fecha: 2015


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