Store-operated calcium entry is dispensable for the activation of ERK1/2 pathway in prostate cancer cells

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Store-operated calcium entry is dispensable for the activation of ERK1/2 pathway in prostate cancer cells

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dc.contributor.author López Guerrero, Aida María
dc.contributor.author Pascual Caro, Carlos
dc.contributor.author Martin Romero, Francisco Javier
dc.contributor.author Pozo Guisado, Eulalia
dc.date.accessioned 2018-11-20T11:14:57Z
dc.date.available 2018-11-20T11:14:57Z
dc.date.issued 2017
dc.identifier.issn 0898-6568
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10662/8246
dc.description.abstract STIM1, el sensor de Ca2 + del retículo endoplásmico que modula la actividad de los canales de Ca2 + de la membrana plasmática, se fosforila en los sitios objetivo de ERK1 / 2 durante el agotamiento del almacenamiento de Ca2 + desencadenado por thapsigargin o factor de crecimiento epidérmico (EGF). Esta fosforilación dependiente de ERK1 / 2 regula la localización y disociación de STIM1 de los microtúbulos, y se sabe que mejora la unión a ORAI1, un canal de entrada de Ca2 + (SOCE) operado en el almacén, lo que lleva a la activación de esta vía de afluencia de Ca2 +. Sin embargo, quedaron algunas pruebas de un papel para SOCE en la activación de ERK1 / 2, y aquí evaluamos la contribución de SOCE a la activación de ERK1 / 2 generando una línea celular deficiente en STIM1 mediante la edición del genoma CRISPR / Cas9 del locus STIM1 En células de cáncer de próstata PC3. La modificación genómica consistió en una inserción de pares de 16 bases en el exón 5 de ambos alelos, anulando así la síntesis de STIM1. Las células STIM1-KO mostraron una disminución sorprendente en el flujo de Ca2 + en respuesta a thapsigargin o EGF, un resultado que demuestra que SOCE media la entrada de Ca2 + en las células PC3 durante la estimulación con EGF. Además, se encontraron niveles idénticos de ERK1 / 2 total en células STIM1-KO y en la línea celular parental, y la activación de ERK1 / 2 se activó completamente en células KO, tanto en presencia como en ausencia de Ca2 + extracelular, un resultado que apoya que STIM1 y SOCE no son necesarios para la activación de ERK1 / 2. Esta activación fue sensible a la inhibición de la Src quinasa, pero no a la inhibición de CAMKII ni a la PKC, un resultado que establece a STIM1 y SOCE como objetivos descendentes del eje Src-Raf-MEK-ERK, en lugar de reguladores ascendentes. es_ES
dc.description.abstract STIM1, the endoplasmic reticulum Ca2+ sensor that modulates the activity of plasma membrane Ca2+ channels, becomes phosphorylated at ERK1/2 target sites during Ca2+ store depletion triggered by thapsigargin or epidermal growth factor (EGF). This ERK1/2-dependent phosphorylation regulates STIM1 localization and dissociation from microtubules, and it is known that enhances the binding to ORAI1, a store-operated Ca2+ entry (SOCE) channel, leading to the activation of this Ca2+ influx pathway. However, there remained some evidence of a role for SOCE in the activation of ERK1/2, and here we assessed the contribution of SOCE to ERK1/2 activation by generating a STIM1-deficient cell line by CRISPR/Cas9 genome editing of the STIM1 locus in prostate cancer PC3 cells. The genomic modification consisted of a 16 base -pair insertion in exon 5 of both alleles, therefore abrogating STIM1 synthesis. STIM1-KO cells did show a striking decrease in Ca2+ influx in response to thapsigargin or EGF, a result that demonstrates that SOCE mediates Ca2+ entry in PC3 cells during stimulation with EGF. Moreover, identical levels of total ERK1/2 were found in STIM1-KO cells and the parental cell line, and ERK1/2 activation was fully activated in KO cells, both in the presence and in the absence of extracellular Ca2+, a result that supports that STIM1 and SOCE are not required for ERK1/2 activation. This activation was sensitive to Src kinase inhibition, but not to CAMKII nor PKC inhibition, a result that sets STIM1 and SOCE as downstream targets of the axis Src-Raf-MEK-ERK, rather than upstream regulators. es_ES
dc.description.sponsorship • Ministerio de Economía y Competitividad y Fondo Social Europeo. Beca BFU2014-52401-p (I+D+i), para Francisco Javier Martín Romero • Ministerio de Economía y Competitividad. Beca BES2012-052061, para Aida María López Guerrero • Ministerio de Educación, Cultura y Deporte. Beca FPU12/03430, para Carlos Pascual Caro es_ES
dc.format.extent 9 p. es_ES
dc.format.mimetype application/pdf en_US
dc.language.iso eng es_ES
dc.publisher Elsevier es_ES
dc.rights Atribución-NoComercial-CompartirIgual 3.0 España *
dc.rights.uri http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/es/ *
dc.subject Calcio es_ES
dc.subject CRISPR es_ES
dc.subject ERK1/2 es_ES
dc.subject SOCE es_ES
dc.subject Src es_ES
dc.subject STIM1 es_ES
dc.subject Calcium es_ES
dc.title Store-operated calcium entry is dispensable for the activation of ERK1/2 pathway in prostate cancer cells es_ES
dc.type article es_ES
dc.description.version peerReviewed es_ES
europeana.type TEXT en_US
dc.rights.accessRights openAccess es_ES
dc.subject.unesco 2407 Biología Celular es_ES
dc.subject.unesco 2302.04 Genética Bioquímica es_ES
europeana.dataProvider Universidad de Extremadura. España es_ES
dc.identifier.bibliographicCitation López Guerrero, A. M.; Pascual Caro, C.; Martin Romero, F. J.; Pozo Guisado, E. (2017). Store-operated calcium entry is dispensable for the activation of ERK1/2 pathway in prostate cancer cells. Cellular signalling, 40, 44-52. ESSN 1873-3913 es_ES
dc.type.version publishedVersion es_ES
dc.contributor.affiliation Universidad de Extremadura. Departamento de Anatomía, Biología Celular y Zoología es_ES
dc.contributor.affiliation Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética es_ES
dc.relation.publisherversion https://doi.org/10.1016/j.cellsig.2017.08.010 es_ES
dc.identifier.doi 10.1016/j.cellsig.2017.08.010
dc.identifier.publicationtitle Cellular signalling es_ES
dc.identifier.publicationfirstpage 44 es_ES
dc.identifier.publicationlastpage 52 es_ES
dc.identifier.publicationvolume 40 es_ES


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