2024-03-28T20:05:57Zhttps://dehesa.unex.es:8443/oai/requestoai:dehesa.unex.es:10662/77672024-02-01T10:52:41Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27com_10662_58com_10662_70col_10662_158col_10662_145col_10662_285
Autophagy-related proteins are functionally active in human spermatozoa and may be involved in the regulation of cell survival and motility
Aparicio Donoso, Inés María
Espino Palma, Javier
Bejarano Hernando, Ignacio
Gallardo Soler, Alejandro
Campo Guinea, María Luisa
Salido Ruiz, G. M.
Pariente Llanos, José Antonio
Peña Vega, Fernando Juan
Tapia García, José Antonio
Universidad de Extremadura. Departamento de Fisiología
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Departamento de Medicina Animal
Autofagia
Mitofagia
Proteínas
Espermatozoides
Autophagy
Mitophagy
Proteins
Spermatozoa
La macroautofagia (en lo sucesivo denominado autofagia) es un proceso conservador de las células que participa alta y evolutivamente en el mantenimiento de la homeostasis intracelular a través de la degradación de proteínas más perdurables y de los orgánulos. La autofagia participa en algunos eventos reproductivos; sin embargo, no hay información sobre la función de la autofagia en la regulación de la fisiología del espermatozoide. Por lo tanto, el objetivo de este estudio es investigar si las proteínas en relación con la autofagía están presentes y son funcionalmente activas en espermatozoides humanos. Las proteínas relacionadas con la autofagia/proceso mitofágico (LC3, ATG5, ATG16, Beclin 1, p62, m-TOR, AMPKα 1/2 y PINK1) están presentes en espermatozoides humanos. El LC3 está colocalizado con la p62 en la parte central de los espermatozoides. La activación de la autofagia induce un aumento significativo de la motilidad y una disminución en el PINK1, en la proteína Tom20 y la activación de caspasa 3/7. Sin embargo, la inhibición de la autofagia causó una disminución de la motilidad, viabilidad, ATP y la concentración de calcio intracelular mientras PINK1, proteína Tom20, fosforilación AMPK y activación de la caspasa 3/7 aumentaron considerablemente. En conclusión nuestros resultados demuestran que la autofagia en relación con proteínas y reguladores upstream están presentes y activos en espermatozoides humanos. La modificación de proteínas mitocondriales después de la autofagia activación/inhibición puede estar indicando una forma especializada de la autofagia denominado mitofagía pueden estar regulando la función espermática como motilidad, su viabilidad y pueden estar cooperando con la apoptosis.
Macroautophagy (hereafter autophagy) is an evolutionarily highly conserved cellular process that participates in the maintenance of intracellular homeostasis through the degradation of most longlived proteins and entire organelles. Autophagy participates in some reproductive events; however, there are not reports regarding the role of autophagy in the regulation of sperm physiology. Hence, the aim of this study was to investigate whether autophagy-related proteins are present and functionally active in human spermatozoa. Proteins related to autophagy/mitophagy process (LC3, Atg5, Atg16, Beclin 1, p62, m-TOR, AMPKα 1/2, and PINK1) were present in human spermatozoa. LC3 colocalized with p62 in the middle piece of the spermatozoa. Autophagy activation induced a significant increase in motility and a decrease in PINK1, TOM20 expression and caspase 3/7 activation. In contrast, autophagy inhibition resulted in decreased motility, viability, ATP and intracellular calcium concentration whereas PINK1, TOM20 expression, AMPK phosphorylation and caspase 3/7 activation were significantly increased. In conclusion our results show that autophagy related proteins and upstream regulators are present and functional in human spermatozoa. Modification of mitochondrial proteins expression after autophagy activation/inhibition may be indicating that a specialized form of autophagy named mitophagy may be regulating sperm function such as motility and viability and may be cooperating with apoptosis.
2018-07-27T09:37:18Z
2018-07-27T09:37:18Z
2016
article
2045-2322
http://hdl.handle.net/10662/7767
Aparicio, I. M. et al. Autophagy-related proteins are functionally active in human spermatozoa and may be involved in the regulation of cell survival and motility. Sci. Rep. 6, 33647; doi: 10.1038/srep33647 (2016)
10.1038/srep33647
Scientific reports
33647, 1
33647, 19
6
0000-0002-1311-2947
eng
http://dx.doi.org/10.1038/srep33647
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
Nature
oai:dehesa.unex.es:10662/114072023-04-11T10:31:54Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Aryl hydrocarbon receptor promotes liver polyploidization and inhibits PI3K, ERK, and Wnt/beta-Catenin signaling
Moreno Marín, Nuria
Merino Fernández, Jaime María
Álvarez Barrientos, Alberto
Patel, Daxeshkumar P.
Takahashi, Shogo
González Sancho, José Manuel
Gandolfo Domínguez, Pablo
Ríos Sánchez, Rosa María
Muñoz Terol, Alberto
González, Frank J.
Fernández Salguero, Pedro María
Universidad de Extremadura. Servicio de Técnicas Aplicadas a las Biociencias
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
CSIC-Centro Andaluz de Biología Molecular y Medicina (Cabimer)
Instituto de Investigaciones
Biomédicas "Alberto Sols"-CSIC-Universidad Autónoma de
Madrid
Instituto de Salud Carlos III, CIBERONC -Centro de Investigación Biomédica en Red Cáncer
Biología del desarrollo
Biología de los sistemas de cáncer
Metabolómica
Developmental biology
Cancer systems biology
Metabolomics
La deficiencia del receptor de hidrocarburos arilo (AhR) altera la homeostasis del tejido. Sin embargo, la forma en que el AhR regula la maduración y diferenciación de los órganos sigue siendo en su mayor parte desconocida. La diferenciación hepática conlleva un proceso de poliploidización fundamental para el crecimiento celular, el metabolismo y las respuestas al estrés. Aquí, informamos que el AhR regula la poliploidización durante la maduración del hígado de los ratones antes del destete a la edad adulta. Los hígados AhR-nulos antes del destete (AhR--/--) tenían hepatocitos más pequeños, hipercelularidad, regulación del ciclo celular alterada y una mayor proliferación. Estos fenotipos persistieron en ratones adultos AhR--/-- y se correlacionaron con poliploidía comprometida, predominio de hepatocitos diploides y centrosomas agrandados. La fosfatidilinositol-3-fosfato cinasa (PI3K), la cinasa regulada por señales extracelulares (ERK) y la señalización de la Wnt/b-catenina se mantuvo regulada desde el destete hasta el hígado nulo de los adultos AhR, lo que probablemente aumentó el objetivo de los mamíferos de la activación de la rapamicina (mTOR). La metabolómica reveló la desregulación de los intermediarios de la fosforilación oxidativa mitocondrial succinato y fumarato en el hígado AhR--/--. Consistentemente, la inhibición de PI3K, ERK y Wnt/b-catenina rescató parcialmente la poliploidía en ratones AhR--/--. Por lo tanto, AhR puede integrar la supervivencia, la proliferación y el metabolismo para la poliploidización del hígado. Dado que las células tumorales tienden a ser poliploides, la modulación de AhR podría tener valor terapéutico en el hígado.
Aryl hydrocarbon receptor (AhR) deficiency alters tissue homeostasis. However, how AhR regulates organ maturation and differentiation remains mostly unknown. Liver differentiation entails a polyploidization process fundamental for cell growth, metabolism, and stress responses. Here, we report that AhR regulates polyploidization during the preweaning-to-adult mouse liver maturation. Preweaning AhR-null (AhR--/--) livers had smaller hepatocytes, hypercellularity, altered cell cycle regulation, and enhanced proliferation. Those phenotypes persisted in adult AhR--/-- mice and correlated with compromised polyploidy, predominance of diploid hepatocytes, and enlarged centrosomes. Phosphatidylinositol-3-phosphate kinase (PI3K), extracellular signal-regulated kinase (ERK), and Wnt/b-catenin signaling remained upregulated frompreweaning to adult AhR-null liver, likely increasing mammalian target of rapamycin (mTOR) activation.Metabolomics revealed the deregulation of mitocondrial oxidative phosphorylation intermediates succinate and fumarate in AhR--/-- liver. Consistently, PI3K, ERK, and Wnt/b-catenin inhibition partially rescued polyploidy in AhR--/-- mice. Thus, AhR may integrate survival, proliferation, and metabolism for liver polyploidization. Since tumor cells tend to be polyploid, AhR modulation could have therapeutic value in the liver.
2020-10-01T09:12:51Z
2020-10-01T09:12:51Z
2018
article
2589-0042
http://hdl.handle.net/10662/11407
Moreno Marín, N., Merino Fernández, J. M., Álvarez Barrientos, A., Patel, D. P., Takahashi, S., González Sancho, J. M., Gandolfo Domínguez, P. [et al.] (2018). Aryl hydrocarbon receptor promotes liver polyploidization and inhibits PI3K, ERK, and Wnt/beta-Catenin signaling. Iscience, 4, 44-63. ISSN 2589-0042. DOI: 10.1016/ j.isci.2018.05.006
10.1016/ j.isci.2018.05.006
Iscience
44
63
4
eng
https://www.cell.com/iscience/fulltext/S2589-0042(18)30061-0
https://doi.org/10.1016/j.isci.2018.05.006
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
CellPress
oai:dehesa.unex.es:10662/121702023-10-30T10:23:19Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Biodegradation of 5-(Hydroxymethyl)-furfural and furan derivatives
Igeño González, María Isabel
Sánchez Clemente, Rubén
Gómez Población, Ana Belén
Guijo Sánchez, María Isabel
Merchán Sorio, Faustino
Blasco Pla, Rafael
Universidad de Extremadura. Instituto de investigación de carne y productos cárnicos(IProCar)
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Pseudomonas
Derivados del furano
Biodegradación
Furan derivatives
Biodegradation
El furfural y el 5-hidroximetilfurfural (HMF) son productos de degradación de la lignocelulosa durante las operaciones de pretratamiento. Los compuestos de furfural son un grupo de compuestos químicos cuyo hilo conductor es un grupo aldehído unido a un anillo de furano, y constituyen un problema para el desarrollo de biocombustibles de segunda generación porque actúan como inhibidores de la fermentación de los hidrolizados de lignocelulosa. Hasta la fecha, se han descrito muy pocas bacterias capaces de eliminarlos. El objetivo de este trabajo fue aislar y caracterizar cepas bacterianas capaces de utilizar, como única fuente de carbono, el 5-(hidroximetil)-furfural (HMF) y los derivados del furano.
Furfural and 5-hydroxymethylfurfural (HMF) are degradation products of lignocellulose during pretreatment operations. Furfural compounds are a group of chemical compounds whose common thread is an aldehyde group attached to a furan ring, and they constitute a problem for the development of second-generation biofuels because they act as fermentation nhibitors of the lignocellulose hydrolysates. Up to date, very few bacteria have been described to be able to eliminate them. The objective of this work was to isolate and characterize bacterial strains able to use, as the sole carbon source, 5-(hydroxymethyl)-furfural (HMF) and furan derivatives
2021-06-08T09:20:16Z
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2018
article
2504-3900
http://hdl.handle.net/10662/12170
IGEÑO, María Isabel, SÁNCHEZ-CLEMENTE, Rubén, POBLACIÓN, Ana G., GUIJO, M. Isabel, MERCHÁN, Faustino and BLASCO, Rafael. Biodegradation of 5-(Hydroxymethyl)-furfural and Furan Derivatives. Proceedings [online]. 18 October 2018. Vol. 2, no. 20, p. 1283. DOI 10.3390/proceedings2201283
10.3390/proceedings2201283
Proceedings
20
1
4
2, 1283
eng
https://www.mdpi.com/2504-3900/2/20/1283
https://doi.org/10.3390/proceedings2201283
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
openAccess
Attribution 4.0 International
MDPI
oai:dehesa.unex.es:10662/137022022-03-15T01:11:43Zcom_10662_13582com_10662_97com_10662_28com_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_13583col_10662_158
Glucosa y glucosa 6-fosfato deshidrogenasas en hígado de tenca (Tinca tinca)
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Bautista, J.M.
Soler Grau, Germán
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Glucosa 6-fosfato deshidrogenasa
Glucosa deshidrogenasa
Isoenzimas
Hígado
Tinca tinca
Glucose 6-phosphate dehydrogenase
Glucose dehydrogenase
Isoenzymes
Liver
Usando tinción diferencial de geles PAGE, hemos identificado tres actividades de deshidrogenasa G6P en homogeneizados de hígado de tenca. Una de estas actividades enzimáticas tiene una amplia especificidad por glucosa, G6P, NAD• y NADp+, y ha sido considerada como una Glucosa deshidrogenasa. Las otras dos actividades son muy específicas para G6P y para una de las dos coenzimas consideradas como isoenzimas G6PD. Los estudios de inactivación térmica de las tres actividades deshidrogenasas están de acuerdo con los patrones electroforéticos. Por otro lado, las tres actividades son inhibidas por NADH y NADPH. Finalmente hemos realizado algunos estudios cinéticos y ensayado la actividad enzimática en función del pH.
Using differential staining of PAGE gels we have identified three G6P dehydrogenase activities on tench liver homogenates. One of these enzymatic activities has a wide specificity for glucose, G6P, NAD•, and NADp+, and has been considered as a Glucose dehydrogenase. The other two activities are very especific for G6P and for one of the two coenzymes being considered as G6PD isoenzymes. Studies of thennic inactivation of the three dehydrogenase activities are in agreement with the electrophoretic patterns. On the other hand all three activities are inhibited by NADH and NADPH. Finally we have carried out sorne kinetic studies and assay the enzyme activity as a function ofpH.
2022-02-15T11:40:37Z
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1987
article
0214-039X
http://hdl.handle.net/10662/13702
FUENTES RODRÍGUEZ, J.M. , BAUTISTA, J.M. y SOLER GRAU, G. (1987). Glucosa y glucosa 6-fosfato deshidrogenasas en hígado de tenca (Tinca tinca). Acta Veterinaria, 1, 19-27. ISSN 0217-039X
Acta Veterinaria
1
19
27
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
oai:dehesa.unex.es:10662/56142023-04-11T10:32:51Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Dioxin receptor regulates aldehyde dehydrogenase to block melanoma tumorigenesis and metastasis
Contador Troca, María
Álvarez Barrientos, Alberto
Merino Fernández, Jaime María
Morales Hernández, Antonio
Rodríguez Lara, María Isabel
Rey Barroso, Javier
Barrasa Ardila, Eva María
Cerezo Guisado, María Isabel
Catalina Fernández, Inmaculada
Sáenz Santamaría, Javier
Oliver Pozo, Francisco Javier
Fernández Salguero, Pedro María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Servicio de Técnicas Aplicadas a las Biociencias
Instituto de Parasitología y Biomedicina López Neyra, CSIC. Granada
Hospital Universitario Infanta Cristina. Badajoz
Receptor de dioxina
Aaldehído deshidrogenasa
Tumorigénesis
Metástasis
Cáncer de pulmón de células madre
Invasión
Dioxin receptor
Aldehyde dehydrogenase
Tumorigenesis
Lung metastasis
Cancer stem cells
Invasion
Antecedentes: la dioxina receptora (AhR) puede tener oncogénicos o actividades de supresor tumoral según el fenotipo de la célula diana. Hemos demostrado que AhR promueve el melanoma primario de la tumorigénesis y las metástasis pulmonar en el ratón y que los melanomas metastásicos AhR redujeron sus niveles con respecto a los nevos benignos.
Métodos: las células B16F10 del melanoma del ratón fueron diseñadas por transducción retroviral a la expresión establemente de AhR, Aldh1a1. Se caracterizan por la actividad, marcadores de células madre Aldh1a1 y la migración e invasión in vitro. Su tumorigénesis en vivo fue analizada utilizando xenoinjertos y metástasis pulmonar, así como ensayos de imagen in vivo.
Resultados: El agotamiento de aldehído deshidrogenasa 1A1 (Aldh1a1) deteriora los pro-tumorígenos y las ventajas de las células del melanoma metastásico AhR, que carece de expresión (sh-AhR). Así, Aldh1a1 en sh-AhR de células (sh-sh-AhR Aldh1a1) disminuyeron su migración e invasión potenciales y bloquean el crecimiento tumoral y la metástasis a los pulmones en pacientes inmunocompetentes AhR / ratones receptores. Sin embargo, la modulación hacia debajo de Aldh1a1 en AhR expresando las células B16F10 no afectó significativamente el crecimiento tumoral in vivo. El Aldh1a1 redujo los niveles elevados del CD133 /CD29/CD44 de las células, el tamaño del melanoma y la expresión de la pluripotencia SOX2 en celdas sh-AhR. Curiosamente, SOX2 aumentó la expresión Aldh1a1 en sh-AhR pero no en sh-sh-AhR Aldh1a1 de las células, lo que sugiere que la Aldh1a1 y SOX2 pueden ser regulados en las células de melanoma. La imagen in vivo revela que los ratones inoculados con AhR Aldh1a1 había reducido la carga tumoral y aumentada la supervivencia de aquellos que recibieron Aldh1a1 o sh-AhR.
Conclusiones: Aldh1a1 en una overactivacion de AhR, antecedente que reduce y mejora la progresión del melanoma. Desde protumoral AhR puede extremar los efectos de Aldh1a1 y el alto fenotipo Ah1a1Rlow-Aldh podría ser indicativo de mal pronóstico en el melanoma.
Background: The dioxin (AhR) receptor can have oncogenic or tumor suppressor activities depending on the phenotype of the target cell. We have shown that AhR knockdown promotes melanoma primary tumorigenesis and lung metastasis in the mouse and that human metastatic melanomas had reduced AhR levels with respect to benign nevi.
Methods: Mouse melanoma B16F10 cells were engineered by retroviral transduction to stably downregulate AhR expression, Aldh1a1 expression r both. They were characterized for Aldh1a1 activity, stem cell markers and migration and invasion in vitro. Their tumorigenicity in vivo was analyzed using xenografts and lung metastasis assays as well as in vivo imaging.
Results: Depletion of aldehyde dehydrogenase 1a1 (Aldh1a1) impairs the pro-tumorigenic and pro-metastatic advantage of melanoma cells lacking AhR expression (sh-AhR). Thus, Aldh1a1 knockdown in sh-AhR cells (sh-AhR + sh-Aldh1a1) diminished their migration and invasion potentials and blocked tumor growth and metastasis to the lungs in immunocompetent AhR+/+ recipient mice. However, Aldh1a1 downmodulation in AhR-expressing B16F10 cells did not significantly affect tumor growth in vivo. Aldh1a1 knockdown reduced the high levels of CD133+/CD29+/CD44+ cells, melanosphere size and the expression of the pluripotency marker Sox2 in sh-AhR cells. Interestingly, Sox2 increased Aldh1a1 expression in sh-AhR but not in sh-AhR + sh-Aldh1a1 cells, suggesting that Aldh1a1 and Sox2 may be co-regulated in melanoma cells. In vivo imaging revealed that mice inoculated with AhR + Aldh1a1 knockdown cells had reduced tumor burden and enhanced survival than those receiving Aldh1a1-expressing sh-AhR cells.
Conclusions: Aldh1a1 overactivation in an AhR-deficient background enhances melanoma progression. Since AhR may antagonize the protumoral effects of Aldh1a1, the AhRlow-Aldh1a1high phenotype could be indicative of bad outcome in melanoma.
2017-04-21T10:25:55Z
2017-04-21T10:25:55Z
2015
article
1476-4598
http://hdl.handle.net/10662/5614
Contador Troca, M.; Álvarez Barrientos, A.; Merino Fernández, J. M.; Morales Hernández, A.; Rodríguez Lara, M. I.; Rey Barroso, J.; Barrasa Ardila, A. M. et al. (2015). Dioxin receptor regulates aldehyde dehydrogenase to block melanoma tumorigenesis and metastasis. Molecular cáncer, 14, nº artículo 148, 2015. ISSN 1476-4598
10.1186/s12943-015-0419-9
Molecular cancer
148, 1
148,14
14
eng
https://molecular-cancer.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12943-015-0419-9
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/es/
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Atribución-NoComercial-CompartirIgual 3.0 España
BioMed Central
oai:dehesa.unex.es:10662/112842023-10-18T08:02:46Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27com_10662_75col_10662_158col_10662_151
ant(6)-I Genes encoding aminoglycoside O-Nucleotidyltransferases are widely spread among streptomycin resistant strains of campylobacter jejuni and campylobacter coli
Hormeño García, Lorena
Ugarte Ruiz, María
Palomo Guijarro, Gonzalo
Borge Rodríguez, Carmen
Flórez Cuadrado, Diego
Vadillo Machota, Santiago
Píriz Durán, Segundo
Domínguez Rodríguez, Lucas
Campos, Maria Jorge Geraldes
Quesada Molina, Alberto
Universidad Complutense de Madrid
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Departamento de Sanidad Animal
Universidad de Córdoba
Instituto Politécnico de Leiria. Portugal
Campylobacter coli
Campylobacter jejuni
Resistencia a la estreptomicina
Aminoglicósido adenilíco transferasas
ANT(6)-I
Streptomycin-resistance
Aminoglycoside adenylyl transferases
Las especies de Campylobacter termotolerantes C. jejuni y C. coli están reconocidas como el principal agente bacteriano responsable de la gastroenteritis transmitida por los alimentos. Los antimicrobianos más eficaces contra el Campylobacter son los macrólidos y algunos, pero no todos los aminoglucósidos. Entre ellos, la susceptibilidad a la estreptomicina se reduce por mutaciones en la proteína ribosómica RPSL o por la expresión de O-nucleotidiltransferasas del aminoglucósido ANT(6)-I. Se evaluó la presencia de genes de resistencia a la estreptomicina entre los Campylobacter resistentes a la estreptomicina aislados de seres humanos y animales mediante la utilización de la PCR con cebadores degenerados concebidos para distinguir los genes ant(6)-Ia, ant(6)-Ib y otros genes similares a los de las hormigas. Se encontraron genes que codificaban las enzimas ANT(6)-I en todas las combinaciones posibles con una fracción importante de los aislados portadores de un gen similar a la hormiga previamente descrito, relacionado a distancia y perteneciente a la nueva subfamilia ant(6)-Ie. Entre los aislamientos de Campylobacter, la hormiga(6)-Ie se encontró únicamente funcional en C. coli, como lo demuestra la transferencia de genes y la expresión del fenotipo en Escherichia coli, a diferencia de las secuencias codificantes detectadas en C. jejuni que fueron truncadas por un desplazamiento interno del marco asociado a las mutaciones de la RPSL en las cepas resistentes a la estreptomicina. Las relaciones genéticas de los aislamientos de C. coli con la ANT(6)-Ie revelaron un grupo de cepas presentadas en bovinos y humanos, lo que sugiere una vía de circulación de las cepas de Campylobacter al consumir carne de ternera contaminada por las bacterias que expresan este elemento de resistencia a la estreptomicina.
Thermotolerant Campylobacter species C. jejuni and C. coli are actually recognized as the major bacterial agent responsible for food-transmitted gastroenteritis. The most effective antimicrobials against Campylobacter are macrolides and some, but not all aminoglycosides. Among these, susceptibility to streptomycin is reduced by mutations in the ribosomal RPSL protein or by expression of ANT(6)-I aminoglycoside O-nucleotidyltransferases. The presence of streptomycin resistance genes was evaluated among streptomycin-resistant Campylobacter isolated from humans and animals by using PCR with degenerated primers devised to distinguish ant(6)-Ia, ant(6)-Ib and other ant-like genes. Genes encoding ANT(6)-I enzymes were found in all posible combinations with a major fraction of the isolates carrying a previously described antlike gene, distantly related and belonging to the new ant(6)-I sub-family ant(6)-Ie. Among Campylobacter isolates, ant(6)-Ie was uniquely found functional in C. coli, as shown by gene transfer and phenotype expression in Escherichia coli, unlike detected coding sequences in C. jejuni that were truncated by an internal frame shift associated to RPSL mutations in streptomycin resistant strains. The genetic relationships of C. coli isolates with ANT(6)-Ie revealed one cluster of strains presented in bovine and humans, suggesting a circulation pathway of Campylobacter strains by consuming contaminated calf meat by bacteria expressing this streptomycin resistance element.
2020-09-14T12:13:19Z
2020-09-14T12:13:19Z
2018
article
1664-302X
http://hdl.handle.net/10662/11284
Hormeño L, Ugarte-Ruiz M, Palomo G, Borge C, Florez-Cuadrado D, Vadillo S, Píriz S, Domínguez L, Campos MJ and Quesada A (2018) ant(6)-I Genes Encoding Aminoglycoside O-Nucleotidyltransferases Are Widely Spread Among Streptomycin Resistant Strains of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli. Front. Microbiol. 9:2515. doi: 10.3389/fmicb.2018.02515
10.3389/fmicb.2018.02515
Frontires in microbiology
1
8
9, 2515
eng
https://doi.org/10.3389/fmicb.2018.02515
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2018.02515/full
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
openAccess
Atribución 4.0 Internacional
Frontiers Media
oai:dehesa.unex.es:10662/114032024-03-21T08:07:02Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
AMPK Function in Mammalian Spermatozoa
Martín Hidalgo, David
Hurtado de Llera, Ana
Calle Guisado, Violeta
González Fernández, Lauro
García Marín, Luis Jesús
Bragado González, María Julia
Universidad de Extremadura. Departamento de Anatomía, Biología Celular y Zoología
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Proteína quinasa activada por AMP (AMPK)
Espermatozoides
Movilidad
Mitocondrias
Membranas
Señalización
Estrés
Técnicas de reproducción asistida
AMP-activated protein kinase (AMPK)
Spermatozoa
Motility
Mitochondria
Membranes
Signaling
Stress
Assisted reproduction techniques
La proteína cinasa activada por la AMPK regula la energía celular controlando el metabolismo mediante la inhibición de las vías anabólicas y la estimulación simultánea de las vías catabólicas. Dada su función reguladora central en el metabolismo celular, la actividad de la AMPK y su regulación han sido objeto de investigaciones pertinentes, aunque sólo unos pocos estudios se han centrado en la función de la AMPK en el control de la capacidad de fecundación de los espermatozoides. En el presente examen se resumen las funciones celulares conocidas de la AMPK que se han identificado en los espermatozoides de mamíferos. La participación de la actividad de la AMPK se describe en función de las principales funciones fisiológicas de los espermatozoides maduros, en particular en la regulación de la motilidad espermática adecuada adaptada al medio extracelular fluctuante, el mantenimiento de la integridad de las membranas espermáticas y el potencial de la membrana mitocondrial. Además, se examinan las vías de señalización intracelular que conducen a la activación de la AMPK en los espermatozoides de mamíferos. También se discute el papel de la AMPK en las técnicas de reproducción asistida, particularmente durante la criopreservación y preservación del semen (a 17º C). Por último, reforzamos la idea de la AMPK como una cinasa de señalización clave en los espermatozoides que actúa como un enlace/puente esencial entre la energía del metabolismo y la capacidad de los espermatozoides para fecundar.
AMP-activated protein kinase AMPK regulates cellular energy by controlling metabolism through the inhibition of anabolic pathways and the simultaneous stimulation of catabolic pathways. Given its central regulator role in cell metabolism, AMPK activity and its regulation have been the focus of relevant investigations, although only a few studies have focused on the AMPK function in the control of spermatozoa’s ability to fertilize. This review summarizes the known cellular roles of AMPK that have been identified in mammalian spermatozoa. The involvement of AMPK activity is described in terms of the main physiological functions of mature spermatozoa, particularly in the regulation of suitable sperm motility adapted to the fluctuating extracellular medium, maintenance of the integrity of sperm membranes, and the mitochondrial membrane potential. In addition, the intracellular signaling pathways leading to AMPK activation in mammalian spermatozoa are reviewed. We also discuss the role of AMPK in assisted reproduction techniques, particularly during semen cryopreservation and preservation (at 17º C). Finally, we reinforce the idea of AMPK as a key signaling kinase in spermatozoa that acts as an essential linker/bridge between metabolism energy and sperm’s ability to fertilize.
2020-09-30T11:28:43Z
2020-09-30T11:28:43Z
2018
article
1422-0067
http://hdl.handle.net/10662/11403
MARTIN-HIDALGO, David, HURTADO DE LLERA, Ana, CALLE-GUISADO, Violeta, GONZALEZ-FERNANDEZ, Lauro, GARCIA-MARIN, Luis and BRAGADO, M. AMPK Function in Mammalian Spermatozoa. International Journal of Molecular Sciences [online]. 23 October 2018. Vol. 19, no. 11, p. 3293. DOI 10.3390/ijms19113293
10.3390/ijms19113293
International journal of molecular sciences
11
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24
19, 3293
eng
https://doi.org/10.3390/ijms19113293
https://www.mdpi.com/1422-0067/19/11/3293
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Atribución 4.0 Internacional
MDPI
oai:dehesa.unex.es:10662/116742022-07-25T10:54:44Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Cytochrome b5 reductase is the component from neuronal synaptic plasma membrane vesicles that generates superoxide anion upon stimulation by cytochrome c
Samhan Arias, Alejandro Khalil
Fortalezas, Sofia Isabel Almeida
Cordas, Cristina Maria Grade Couto da
Moura, Isabel Maria Andrade Martins de Galhardas de
Moura, José João Glahardas de
Gutiérrez Merino, Carlos
Universidade NOVA de Lisboa. Portugal
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Citocromo c
Anión superóxido
NADH oxidasa
Citocromo b5 reductasa
Neuronas
Cytochrome c
Superoxide anion
NADH oxidase
Cytochrome b5 reductase
Neurons
En este trabajo, medimos el efecto del citocromo c en la producción de aniones superóxidos dependientes de la NADH por las vesículas de la membrana plasmática sináptica del cerebro de las ratas. En estas membranas, el citocromo c estimuló la producción de aniones superóxido dependientes de NADH, que fue inhibida por anticuerpos contra el citocromo b5 reductasa que vinculan la producción a esta enzima. La medición del radical del anión superóxido generado por el citocromo b5 reductasa recombinante soluble purificado y de membrana corrobora la producción del radical por diferentes isoformas enzimáticas. En presencia del citocromo c, se midió una explosión de anión superóxido así como la reducción del citocromo c por la citocromo b5 reductasa. La formación de complejos entre ambas proteínas sugiere que el citocromo b5 reductasa es uno de los principales socios del citocromo c al ser liberado de las mitocondrias al citosol durante la apoptosis. La producción de aniones superóxido y la reducción del citocromo c son las consecuencias del consumo estimulado de NADH por el citocromo b5 reductasa al formarse complejos con el citocromo c y sugieren un papel importante de esta enzima como proteína antiapoptótica durante la muerte celular.
In this work, we measured the effect of cytochrome c on the NADH-dependent superoxide anion production by synaptic plasma membrane vesicles from rat brain. In these membranes, the cytochrome c stimulated NADH-dependent superoxide anion production was inhibited by antibodies against cytochrome b5 reductase linking the production to this enzyme. Measurement of the superoxide anion radical generated by purified recombinant soluble and membrane cytochrome b5 reductase corroborates the production of the radical by different enzyme isoforms. In the presence of cytochrome c, a burst of superoxide anion as well as the reduction of cytochrome c by cytochrome b5 reductase was measured. Complex formation between both proteins suggests that cytochrome b5 reductase is one of the major partners of cytochrome c upon its release from mitochondria to the cytosol during apoptosis. Superoxide anion production and cytochrome c reduction are the consequences of the stimulated NADH consumption by cytochrome b5 reductase upon complex formation with cytochrome c and suggest a major role of this enzyme as an anti-apoptotic protein during cell death.
2020-12-22T13:29:39Z
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2018
article
2213-2317
http://hdl.handle.net/10662/11674
Samhan Arias, A. K. ; Fortalezas, S.; Cordas, C. M.; Moura, I.; Moura, J. J. G.; Gutiérrez Merino, C. (2018). Cytochrome b5 reductase is the component from neuronal synaptic plasma membrane vesicles that generates superoxide anion upon stimulation by cytochrome c. Redox biology, 15, 109-114. ISSN 2213-2317. DOI: 10.1016/j.redox.2017.11.021
10.1016/j.redox.2017.11.021
Redox biology
109
114
15
eng
https://doi.org/10.1016/j.redox.2017.11.021
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2213231717308005
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
Elsevier
oai:dehesa.unex.es:10662/114002021-12-16T11:33:45Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Methyl–cyclodextrin impairs the phosphorylation of the 2 subunit of L-type calcium channels and cytosolic calcium homeostasis in mature cerebellar granule neurons
Fortalezas, Sofia Isabel Almeida
Silva, Dorinda Marques da
Gutiérrez Merino, Carlos
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
β2 subunidad de los canales de calcio de tipo L
Reducción del colesterol
Balsas de lípidos ricos en caveolina-1
PKA
CaMK-II
Homeostasis del calcio citosólico
Neuronas de gránulos cerebelosos
β2 subunit of L-type calcium channels
Cholesterol depletion
Caveolin-1-rich lipid rafts
Cytosolic calcium homeostasis
Cerebellar granule neurons
La activación de los canales de calcio de tipo L (LTCC) impide que las neuronas de gránulos cerebelosos (CGN) entren en la apoptosis inducida por bajo K+. En trabajos anteriores, demostramos que los LTCC están en gran medida asociados con balsas de lípidos ricos en caveolina-1 en la membrana plasmática de las CGN. En este trabajo, mostramos que la proteína cinasa A (PKA) y la proteína cinasa dependiente de calmodulina II (CaMK-II) están asociadas con las balsas de lípidos ricos en caveolina-1 de los CGN maduros, y mostramos además que el tratamiento con el agente atrapador de colesterol y disruptor de balsa de lípidos metil- β -ciclodextrina disminuye el nivel de fosforilación de la subunidad β2 del CCLT y la concentración de calcio en estado estable en los somas neuronales ([Ca2+]i) a valores cercanos a los medidos en condiciones proapoptóticas de 5 mM KCl. Estos efectos se correlacionan con los efectos producidos por un tratamiento corto (15 min) de CGN con inhibidores H-89 y KN-93 de PKA y CaMK-II, respectivamente, en un medio de 25 mM KCl. Además, sólo una incubación de 15 min de CGN con H-89 produce alrededor de un 90% de inhibición de la entrada de calcio que normalmente ocurriría a través de los LTCC para aumentar [Ca2+]i al elevar el K+ extracelular de 5 a 25 mM, es decir, de condiciones proapoptóticas a condiciones de supervivencia. En conclusión, los resultados de este trabajo sugieren que las balsas de lípidos ricos en caveolina-1 desempeñan un papel importante en el control del nivel de fosforilación inducida por la PKA y el CaMK-II de la subunidad β2 del CCLT, evitando así que los CGN entren en apoptosis.
The activation of L-type calcium channels (LTCCs) prevents cerebellar granule neurons (CGNs) from entering low-K+-induced apoptosis. In previous works, we showed that LTCCs are largely associated with caveolin-1-rich lipid rafts in the CGN plasma membrane. In this work, we show that protein kinase A (PKA) and calmodulin-dependent protein kinase II (CaMK-II) are associated with caveolin-1-rich lipid rafts of mature CGNs, and we further show that treatment with the cholesterol-trapping and lipid raft-disrupting agent methyl- β -cyclodextrin decreases the phosphorylation level of the LTCC β2 subunit and the steady-state calcium concentration in neuronal somas ([Ca2+]i) to values close to those measured in 5 mM KCl proapoptotic conditions. These effects correlate with the effects produced by a short (15 min) treatment of CGNs with H-89 and KN-93—inhibitors of PKA and CaMK-II, respectively—in 25 mM KCl medium. Moreover, only a 15 min incubation of CGNs with H-89 produces about a 90% inhibition of the calcium entry that would normally occur through LTCCs to increase [Ca2+]i upon raising the extracellular K+ from 5 to 25 mM, i.e., from proapoptotic to survival conditions. In conclusion, the results of this work suggest that caveolin-1-rich lipid rafts play a major role in the control of the PKA- and CaMK-II-induced phosphorylation level of the LTCC β2 subunit, thus preventing CGNs from entering apoptosis.
2020-09-30T10:28:16Z
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2018
article
1422-0067
http://hdl.handle.net/10662/11400
Fortalezas, S.; Marques-da-Silva, D.; Gutierrez-Merino, C. Methyl-β-Cyclodextrin Impairs the Phosphorylation of the β2 Subunit of L-Type Calcium Channels and Cytosolic Calcium Homeostasis in Mature Cerebellar Granule Neurons. Int. J. Mol. Sci. 2018, 19, 3667. ISSN 1422-0067. DOI: 10.3390/ijms19113667
10.3390/ijms19113667
International journal of molecular sciences
11
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21
19, 3667
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https://doi.org/10.3390/ijms19113667
https://www.mdpi.com/1422-0067/19/11/3667
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Atribución 4.0 Internacional
MDPI
oai:dehesa.unex.es:10662/43232023-08-24T08:45:22Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Oxidative DNA damage is instrumental in hyperreplication stress-induced inviability of Escherichia coli
Charbon, Godefroid
Bjørn, Louise
Mendoza Chamizo, Belén
Frimodt Møller, Jakob
Løbner Olesen, Anders
Københavns Universitet. Denmark
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Escherichia coli
ATP
Crecimiento anaeróbico
Especies reactivas del oxígeno (ROS)
Lesiones de ADN
Tenedores de replicación
Replicación cromosómica
Anaerobic growth
Reactive oxygen species (ROS)
DNA lesions
Replication forks
Chromosome replication
En Escherichia coli, un aumento en la forma unida de ATP del iniciador de proteína DnaA da resultados en hiperiniciación e inviabilidad. Aquí, mostramos que dicha replicación de estrés es tolerada en el crecimiento anaeróbico. En las células de hiperiniciación, un cambio de la anaeróbica para crecimiento aeróbico dio como resultado la fragmentación aparente de cromosomas y una disminución en su concentración terminal, lo que conduce a un aumento dramático de la ratio ori/ter y el cese del crecimiento celular. La viabilidad aeróbica fue restaurada por reducir el nivel de especies reactivas del oxígeno (ROS) o por eliminación mutM (Fpg glicosilasa). Las roturas de la doble hélice observadas en las células de hiperiniciación resultan, por lo tanto, del encuentro entre los tenedores de replicación y las lesiones de ADN de una sola hélice generadas mientras se quitan bases oxidadas, principalmente 8-oxoG, a partir del ADN. Llegamos a la conclusión de que existe un delicado equilibrio entre la replicación cromosómica y el daño del ADN infligido a ROS por lo que el número de horquillas de replicación sólo puede aumentar cuando la formación de ROS se reduce o si la reparación pertinente se ve comprometida.
In Escherichia coli, an increase in the ATP bound form of the DnaA initiator protein results in hyperinitiation and inviability. Here, we show that such replication stress is tolerated during anaerobic growth. In hyperinitiating cells, a shift from anaerobic to aerobic growth resulted in appearance of fragmented chromosomes and a decrease in terminus concentration, leading to a dramatic increase in ori/ter ratio and cessation of cell growth. Aerobic viability was restored by reducing the level of reactive oxygen species (ROS) or by deleting mut M (Fpg glycosylase). The double-strand breaks observed in hyperinitiating cells therefore results from replication forks encountering single-stranded DNA lesions generated while removing oxidized bases, primarily 8-oxoG, from the DNA. We conclude that there is a delicate balance between chromosome replication and ROS inflicted DNA damage so the number of replication forks can only increase when ROS formation is reduced or when the pertinent repair is compromised.
2016-06-20T09:04:24Z
2016-06-20T09:04:24Z
2014-11
article
0305-1048
1368-4962
http://hdl.handle.net/10662/4323
Charbon, G., Bjørn, L., Mendoza Chamizo, B., Frimodt Møller, J. y Løbner Olesen, A. (2014). Oxidative DNA damage is instrumental in hyperreplication stress-induced inviability of Escherichia coli. Nucleic acids research, 42(21), 13228-13241. ISSN 0305-1048
10.1093/nar/gku1149
Nucleic acids research
21
13228
13241
42
eng
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
Oxford University Press
oai:dehesa.unex.es:10662/54992023-09-15T08:35:46Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Molecular bases of catalysis and ADP-ribose preference of human Mn2+-dependent ADP-ribose/CDP-alcohol diphosphatase and conversion by mutagenesis to a preferential cyclic ADP-ribose phosphohydrolase
Cabezas Martín, Alicia
Ribeiro, João Nuno Meireles da Silva Gonçalves
Rodrigues, Joaquim Rui de Castro
López Villamizar, Iralis Mercedes
Fernández González, Ascensión
Canales García, José
Pinto Corraliza, Rosa María
Costas Vázquez, María Jesús
Cameselle Viña, José Carlos
Instituto Politécnico de Leiria. Portugal
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Fosfatasas métalo-dependientes
ADPRibase-Mn-like
ADP-ribosa/CDP-alcohol diphosphatases
ADP-ribosa phosphohydrolases
CDP-alcoholes
Metallo-dependent phosphatases
CDP-alcohols
Entre las fosfatasas métalo-dependientes, ADP-ribosa/CDP-alcohol diphosphatases forman una familia de proteínas (ADPRibase-Mn-like) principalmente restringida, en eucariotas, vertebrados y plantas, con expresión preferencial, al menos en roedores, en células inmunológicas. La rata y el pez cebra, el único Ribase-Mn ADP bioquímicamente estudiados, son ADP-ribosa phosphohydrolases y algo menos eficiente, de CDP-alcoholes y 2',3'-cAMP. Además, la rata, pero no el pez cebra, muestra una única enzima con actividad ADP-ribosa phosphohydrolytic cíclica. La base molecular de tal especificidad es desconocida. Las ADPRibase-Mn de humanos mostraron actividades similares, incluyendo ADP-ribosa phosphohydrolase cíclica, lo que parece común a los mamíferos Ribase-Mn ADP. Acoplamiento del sustrato en un modelo de homología de ADPRibase-Mn de humanos sugiere posibles interacciones de ADP-ribosa con siete residuos ubicado, con una sola excepción (Cys253), ya sea dentro de la metalo-fosfatasas dependientes de la firma (Gln27, Asn110, Su111), o en regiones estructurales exclusivos de la familia ADPRibase-Mn: s2s3 (PHE37 y Arg43) y h7h8 (Phe210), alrededor de la entrada del sitio activo. Se construyeron mutantes y parámetros cinéticos para ADP-ribosa, CDP-colina, 2',3'-cAMP y cíclica de ADP-ribosa fueron determinadas. Phe37 fue necesaria para ADP-ribosa preferencia sin efecto catalítico, según lo indicado por el aumento de la ADP-ribosa Km y kcat invariable de F37A-ADPRibase-Mn Km, mientras que los valores para los otros sustratos apenas se vieron afectadas. Arg43 era esencial para la catálisis como indicado por la drástica pérdida de eficacia demostrada por R43A-ADPRibase-Mn. Inesperadamente, Cys253 obstaculizaba para cADPR phosphohydrolase, según lo indicado por las diez veces la ganancia de eficiencia de C253A-ADPRibase-Mn con ADP-ribosa cíclica. Esto permitió el diseño de un mutante triple (F37A L196F C253A) para que ADP-ribosa cíclica era el mejor sustrato, con una eficiencia catalítica de 3,5'104 M-1s-1 versus 4'103 M-1s-1 del tipo salvaje.
Among metallo-dependent phosphatases, ADP-ribose/CDP-alcohol diphosphatases form a protein family (ADPRibase-Mn-like) mainly restricted, in eukaryotes, to vertebrates and plants, with preferential expression, at least in rodents, in immune cells. Rat and zebrafish ADPRibase-Mn, the only biochemically studied, are phosphohydrolases of ADP-ribose and, somewhat less efficiently, of CDP-alcohols and 2´,3´-cAMP. Furthermore, the rat but not the zebrafish enzyme displays a unique phosphohydrolytic activity on cyclic ADP-ribose. The molecular basis of such specificity is unknown. Human ADPRibase-Mn showed similar activities, including cyclic ADP-ribose phosphohydrolase, which seems thus common to mammalian ADPRibase-Mn. Substrate docking on a homology model of human ADPRibase-Mn suggested possible interactions of ADP-ribose with seven residues located, with one exception (Cys253), either within the metallo-dependent phosphatases signature (Gln27, Asn110, His111), or in unique structural regions of the ADPRibase-Mn family: s2s3 (Phe37 and Arg43) and h7h8 (Phe210), around the active site entrance. Mutants were constructed, and kinetic parameters for ADP-ribose, CDP-choline, 2´,3´-cAMP and cyclic ADP-ribose were determined. Phe37 was needed for ADP-ribose preference without catalytic effect, as indicated by the increased ADP-ribose Km and unchanged kcat of F37A-ADPRibase-Mn, while the Km values for the other substrates were little affected. Arg43 was essential for catalysis as indicated by the drastic efficiency loss shown by R43A-ADPRibase-Mn. Unexpectedly, Cys253 was hindering for cADPR phosphohydrolase, as indicated by the specific tenfold gain of efficiency of C253A-ADPRibase-Mn with cyclic ADP-ribose. This allowed the design of a triple mutant (F37A+L196F+C253A) for which cyclic ADP-ribose was the best substrate, with a catalytic efficiency of 3.5´104 M-1s-1 versus 4´103 M-1s-1 of the wild type.
2017-03-24T11:33:42Z
2017-03-24T11:33:42Z
2015
article
1932-6203
http://hdl.handle.net/10662/5499
Cabezas Martín, A.; Ribeiro, J. N. Meireles da Silva Gonçalves,; Rodrígues, J. Rui de Castro,; López Villamizar, I. M.; Fernández González, A.; Canales García, J. F.; Pinto Corraliza, R. M. et al. (2015). Molecular bases of catalysis and ADP-ribose preference of human Mn2+-dependent ADP-ribose/CDP-alcohol diphosphatase and conversion by mutagenesis to a preferential cyclic ADP-ribose phosphohydrolase. PLoS ONE, 10, 2, e0118680. ISSN 1932-6203
10.1371/journal.pone.0118680
PLoS ONE
2
e0118680, 1
e0118680, 23
10
eng
http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0118680
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/es/
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Atribución-NoComercial-CompartirIgual 3.0 España
PLOS/One
oai:dehesa.unex.es:10662/84322023-09-15T08:21:57Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Co-occurrence of colistin-resistance genes mcr-1 and mcr-3 among multidrug-resistant Escherichia coli isolated from cattle, Spain, September 2015
Hernández Pérez, Marta
Iglesias Parro, María del Rocío
Rodríguez Lázaro, Alfonso David
Gallardo Soler, Alejandro
Martín Quijada, Narciso
Miguela Villoldo, Pedro
Campos, Maria Jorge Geraldes
Píriz Durán, Segundo
López Orozco, Gema
Frutos Escobar, Cristina de
Sáez Llorente, José Luis
Ugarte Ruiz, María
Domínguez Rodríguez, Lucas
Quesada Molina, Alberto
Instituto Tecnológico Agrario de Castilla y León. Valladolid
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Departamento de Sanidad Animal
Universidad de Valladolid
Universidad de Burgos
Universidad Complutense de Madrid
Instituto Politécnico de Leiria. Portugal
Ministerio de Agricultura y Pesca, Alimentación y Medio Ambiente. Subdirección General de Sanidad e Higiene Animal y Trazabilidad
Universidad de Extremadura. Instituto de Investigación INBIO G+C
Genes de resistencia
Colistina
Escherichia coli
Betalactamasas de espectro extendido
Resistance genes
Colistin
Extended-spectrum beta-lactamases
Los genes de resistencia a colistina mcr-3 y mcr-1 se detectaron en un aislado de Escherichia coli de heces de ganado en un matadero español en 2015. Las secuencias de ambos genes se hibridaron a la misma banda de plásmidos de aproximadamente 250 kb, aunque la resistencia a la colistina no fue movilizable . El aislado producía betalactamasas de espectro extendido y pertenecía al serotipo O9: H10 y al tipo de secuencia ST533. Aquí informamos un gen mcr-3 detectado en Europa después de informes anteriores de Asia y los Estados Unidos.
Colistin resistance genes mcr-3 and mcr-1 have been detected in an Escherichia coli isolate from cattle faeces in a Spanish slaughterhouse in 2015. The sequences of both genes hybridised to same plasmid band of ca 250 kb, although colistin resistance was non-mobilisable. The isolate was producing extended-spectrum beta-lactamases and belonged to serotype O9:H10 and sequence type ST533. Here we report an mcr-3 gene detected in Europe following earlier reports from Asia and the United States.
2019-01-08T13:11:05Z
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2017
article
1560-7917
http://hdl.handle.net/10662/8432
Hernández Pérez, M.; Iglesias Parro, M. R.; Rodríguez Lázaro, A. D.; Gallardo Soler, A.; Martín Quijada, N.; Miguela Villoldo, P.; Campos, M. J. Geraldes [et al.] (2017). Co-occurrence of colistin-resistance genes mcr-1 and mcr-3 among multidrug-resistant Escherichia coli isolated from cattle, Spain, September 2015. Eurosurveillance, 22, 31, 13-17. e-ISSN 1025-496X
10.2807/1560-7917.ES.2017.22.31.30586
Eurosurveillance
31
13
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22
1025-496X
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https://doi.org/10.2807/1560-7917.ES.2017.22.31.30586
https://www.eurosurveillance.org/content/10.2807/1560-7917.ES.2017.22.31.30586
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
openAccess
Attribution 4.0 International
European Centre for Disease Prevention and Control
oai:dehesa.unex.es:10662/190562023-12-23T01:30:43Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Methylene Blue Blocks and Reverses the Inhibitory Effect of Tau on PMCA Function
Berrocal Carrillo, María
Caballero Bermejo, Montaña
Gutiérrez Merino, Carlos
Mata Durán, Ana María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Azul de metileno
Tau
Ca2+-ATPasa de membrana plasmática (PMCA)
Modulación funcional
Neurodegeneración
Methylene blue
Plasma membrane Ca2+-ATPase (PMCA)
Functional modulation
Neurodegeneration
• Ministerio de Economía y Competitividad y Fondos FEDER. Proyecto BFU2017-85723-P, para Ana María Mata Durán y Carlos García Merino
• Junta de Extremadura y Fondos FEDER. Subvención GR18118
• Junta de Extremadura y Fondo Social Europeo. Beca postdoctoral PO17009, para Montaña Caballero Bermejo
El azul de metileno (MB) es un colorante sintético fenotiazínico que, en los últimos años, ha generado mucho debate sobre si podría ser un fármaco terapéutico útil para patologías relacionadas con la tau, como la enfermedad de Alzheimer (EA). Sin embargo, el mecanismo molecular de acción dista mucho de estar claro. Recientemente, el MB activa la Ca2+-ATPasa de membrana plasmática (PMCA) en membranas de tejidos humanos y porcinos y de cultivos celulares podía proteger contra la inactivación de la PMCA por el péptido amiloide (A). El objetivo del presente estudio es examinar si el MB también podría modular el efecto inhibidor de tau, otro marcador molecular clave de la EA, sobre la actividad de la PMCA. Utilizando ensayos cinéticos en membranas de varios tejidos y cultivos celulares, descubrimos que fenotiazina era capaz de bloquear e incluso invertir por completo el efecto inhibidor de tau sobre la PMCA. Los resultados de este trabajo apuntan a que el MB podría mediar el efecto tóxico de tau relacionado con la desregulación de la homeostasis del calcio bloqueando el deterioro de la actividad PMCA por tau. Se estima que MB podría interferir con los efectos tóxicos de tau restaurando la función de la bomba PMCA como sintonizador fino de la homeostasis del calcio.
Methylene blue (MB) is a synthetic phenothiazine dye that, in the last years, has generated much debate about whether it could be a useful therapeutic drug for tau-related pathologies, such as Alzheimer’s disease (AD). However, the molecular mechanism of action is far from clear. Recently we reported that MB activates the plasma membrane Ca2+-ATPase (PMCA) in membranes from human and pig tissues and from cells cultures, and that it could protect against inactivation of PMCA by
amyloid -peptide (A). The purpose of the present study is to further examine whether the MB could also modulate the inhibitory eect of tau, another key molecular marker of AD, on PMCA activity. By using kinetic assays in membranes from several tissues and cell cultures, we found that this phenothiazine was able to block and even to completely reverse the inhibitory eect of tau on PMCA. The results of this work point out that MB could mediate the toxic eect of tau related to the deregulation of calcium homeostasis by blocking the impairment of PMCA activity by tau. We then could conclude that MB could interfere with the toxic eects of tau by restoring the function of PMCA pump as a fine tuner of calcium homeostasis.
2023-12-22T11:40:52Z
2023-12-22T11:40:52Z
2019
article
http://hdl.handle.net/10662/19056
Berrocal M, Caballero-Bermejo M, Gutierrez-Merino C, Mata AM. (2019). Methylene Blue Blocks and Reverses the Inhibitory Effect of Tau on PMCA Function. International Journal of Molecular Sciences; 20(14):3521. https://doi.org/10.3390/ijms20143521
10.3390/ijms20143521
International Journal of Molecular Sciences
14
3521-1
3521-19
20
1422-0067
0000-0003-0684-3853
0000-0002-3902-0178
0000-0003-3673-7007
0000-0002-2887-7854
eng
https://doi.org/10.3390/ijms20143521
https://www.mdpi.com/1422-0067/20/14/3521
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Attribution 4.0 International
MDPI
oai:dehesa.unex.es:10662/110262022-03-11T09:33:54Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Centriole planar polarity assessment in Drosophila wings
Garrido Jiménez, Sergio
Román García, Ángel Carlos
Álvarez Barrientos, Alberto
Carvajal González, José María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Centriolos
Polaridad de células planas
Frizzled
Actin polimerización
Efectos de la polaridad de las células planas
Centrioles
Planar cell polarity
Actin polymerization
Planar cell polarity effectors
En los vertebrados, la polarización plana de los cuerpos basales ciliares se ha asociado con la polimerización de la actina que se produce aguas abajo de la vía de la polaridad celular plana encrespada (Fz-PCP). En las células epiteliales del ala de la Drosophila, que no tienen cilios, los centríolos también se polarizan de manera dependiente de la Fz-PCP, aunque se desconoce la relación con la polimerización de la actina. Combinando los métodos cuantitativos existentes y los nuevos, encontramos inesperadamente que los efectores conocidos de PCP vinculados a los fenotipos de polimerización de actina no afectan ni a la polarización final de los centríolos ni a la distribución apical de los mismos. Pero la polimerización de la actina es necesaria antes de la Fz-PCP para mantener los centríolos en zonas restringidas en los planos más apicales de esas células epiteliales antes y después de que se forme el vello a base de actina. Además, en ausencia de una señalización adecuada del núcleo de Fz-PCP, la polimerización de actina es insuficiente para impulsar esta migración descentrada de los centríolos. En conjunto, los resultados revelan que hay al menos dos vías que controlan el posicionamiento del centríolo en las alas de la pupila de Drosophila: un mecanismo ascendente dependiente de la actina que interviene en la distribución del centríolo que es independiente del PCP, y un mecanismo desconocido que vincula el núcleo Fz-PCP y la polarización del centríolo.
In vertebrates, planar polarization of ciliary basal bodies has been associated with actin polymerization that occurs downstream of the Frizzled-planar cell polarity (Fz-PCP) pathway. In Drosophila wing epithelial cells, which do not have cilia, centrioles also polarize in a Fz-PCP-dependent manner, although the relationship with actin polymerization remains unknown. By combining existing and new quantitative methods, we unexpectedly found that known PCP effectors linked to actin polymerization phenotypes affect neither final centriole polarization nor apical centriole distribution. But actin polymerization is required upstream of Fz-PCP to maintain the centrioles in restricted areas in the apical-most planes of those epithelial cells before and after the actin-based hair is formed. Furthermore, in the absence of proper core Fz-PCP signalling, actin polymerization is insufficient to drive this off-centred centriole migration. Altogether, the results reveal that there are at least two pathways controlling centriole positioning in Drosophila pupal wings – an upstream actin-dependent mechanism involved in centriole distribution that is PCP independent, and an unknown mechanism that links core Fz-PCP and centriole polarization.
2020-07-02T10:40:47Z
2020-07-02T10:40:47Z
2018
article
0950-1991
http://hdl.handle.net/10662/11026
Garrido Jimenez, S.; Roman García, A. C.; Alvarez Barrientos, A.; Carvajal González, J. M. (2018). Centriole planar polarity assessment in Drosophila wings. Development, 2018, 145, dev169326. DOI: 10.1242/dev.169326
10.1242/dev.169326
Development
23
1
9
145, dev169326
eng
https://doi.org/10.1242/dev.169326
https://dev.biologists.org/content/145/23/dev169326
http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
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Atribución-NoComercial 4.0 Internacional
Company of Biologists
oai:dehesa.unex.es:10662/68912022-04-20T10:48:03Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
A novel frizzled-based screening tool identifies genetic modifiers of planar cell polarity in drosophila wings
Carvajal González, José María
Mulero Navarro, Sonia María
Smith, Michael
Mlodzik, Marek
Icahn School of Medicine at Mount Sinai. USA
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Polaridad celular planar
Drosophila
Frizzled
Krasavietz
Parada corta
Planar cell polarity
Short-stop
Most mutant alleles in the Fz-PCP pathway genes were discovered in classic Drosophila screens looking for recessive loss-of-function (LOF) mutations. Nonetheless, although Fz-PCP signaling is sensitive to increased doses of PCP gene products, not many screens have been performed in the wing under genetically engineered Fz overexpression conditions, mostly because the Fz phenotypes were strong and/or not easy to score and quantify. Here, we present a screen based on an unexpected mild Frizzled gain-of-function (GOF) phenotype. The leakiness of a chimeric Frizzled protein designed to be accumulated in the endoplasmic reticulum (ER) generated a reproducible Frizzled GOF phenotype in Drosophila wings. Using this genotype, we first screened a genome-wide collection of large deficiencies and found 16 strongly interacting genomic regions. Next, we narrowed down seven of those regions to finally test 116 candidate genes. We were, thus, able to identify eight new loci with a potential function in the PCP context. We further analyzed and confirmed krasavietz and its interactor short-stop as new genes acting during planar cell polarity establishment with a function related to actin and microtubule dynamics.
2018-01-19T13:26:46Z
2018-01-19T13:26:46Z
2016
article
2160-1836
http://hdl.handle.net/10662/6891
Carvajal González, J. M.; Mulero Navarro, S.; Smith, M. y Mlodzik, M. (2016). A novel frizzled-based screening tool identifies genetic modifiers of planar cell polarity in drosophila wings. G3: genes, genomas, genetics, 6, 12, 3963-6973. ESSN 2160-1836
10.1534/g3.116.035535
G3: genes, genomas, genetics
12
3963
3973
6
eng
http://www.g3journal.org/content/6/12/3963
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
Genetics Society of America
oai:dehesa.unex.es:10662/190852024-02-23T09:30:57Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Methylene blue activates the PMCA activity and cross-interacts with amyloid β-peptide, blocking Aβ-mediated PMCA inhibition
Berrocal Carrillo, María
Corbacho Cuello, Isaac
Gutiérrez Merino, Carlos
Mata Durán, Ana María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Azul de metileno
PMCA
Aβ
Interacciones moleculares
Desregulación neuronal del Ca2+
Methylene blue
Molecular interactions
Neuronal Ca2+dysregulation
Publicado en: Neuropharmacology, 139: 163-172. https://doi.org/10.1016/j.neuropharm.2018.07.012
La fenotiazina azul de metileno (MB) está atrayendo cada vez más atención porque parece tener efectos beneficiosos en la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer (EA). Entre otros factores, la presencia de placas neuríticas de agregados de péptido amiloide-β (Aβ), ovillos neurofibrilares neurofibrilares de tau y la perturbación del Ca2+ citosólico son importantes de la enfermedad. Se ha propuesto que el MB disminuye la formación de placas neuríticas debidas a la agregación de Aβ. Sin embargo, el mecanismo molecular subyacente a este efecto no está nada claro. En este trabajo, demostramos que el MB estimula la actividad Ca2+-ATPasa de la membrana plasmática Ca2+-ATPasa (PMCA) en tejidos humanos procedentes de cerebros afectados por la EA y de controles emparejados por edad así como en cerebro porcino y cultivos celulares. Además, el MB previene e incluso bloquea el efecto inhibidor de Aβ sobre la actividad PMCA. El análisis funcional análisis funcional con mutantes y experimentos de fluorescencia sugieren fuertemente que MB se une a PMCA, en la cola C-terminal, en un sitio situado cerca de la última hélice transmembrana y también que MB se une al péptido. Además, Aβ aumenta la afinidad de PMCA por MB. Estos resultados apuntan a una nueva base molecular de la acción de MB sobre Aβ y PMCA como mediador de su efecto beneficioso sobre la EA. en la EA.
The phenothiazine methylene blue (MB) is attracting increasing attention because it seems to have beneficial effects in the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). Among other factors, the presence of neuritic plaques of amyloid-β peptide (Aβ) aggregates, neurofibrilar tangles of tau and perturbation of cytosolic Ca2+ are important players of the disease. It has been proposed that MB decreases the formation of neuritic plaques due to Aβ aggregation. However, the molecular mechanism underlying this effect is far from clear. In this work, we show that MB stimulates the Ca2+-ATPase activity of the plasma membrane Ca2+-ATPase (PMCA) in human tissues from AD-affected brain and age-matched controls and also from pig brain and cell cultures. In addition, MB prevents and even blocks the inhibitory effect of Aβ on PMCA activity. Functional analysis with mutants and fluorescence experiments strongly suggest that MB binds to PMCA, at the C-terminal tail, in a site located close to the last transmembrane helix and also that MB binds to the peptide. Besides, Aβ increases PMCA affinity for MB. These results point out a novel molecular basis of MB action on Aβ and PMCA as mediator of its beneficial effect on AD.
2024-01-03T12:26:45Z
2024-01-03T12:26:45Z
2018
article
0028-3908
http://hdl.handle.net/10662/19085
Berrocal, M., Corbacho, I., Gutierrez-Merino, C., & Mata, A. M. (2018). Methylene blue activates the PMCA activity and cross-interacts with amyloid β-peptide, blocking Aβ-mediated PMCA inhibition. Neuropharmacology. https://doi.org/10.1016/j.neuropharm.2018.07.012
10.1016/j.neuropharm.2018.07.012
Neuropharmacology
139
163
172
0000-0003-0684-3853
0000-0003-1768-8270
0000-0003-3673-7007
0000-0002-2887-7854
eng
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0028390818303691
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
Elsevier
oai:dehesa.unex.es:10662/106292022-02-04T10:45:42Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Specific cyclic ADP-ribose phosphohydrolase obtained by mutagenic engineering of Mn2+-dependent ADP-ribose/CDP-alcohol diphosphatase
Ribeiro, João Nuno Meireles da Silva Gonçalves
Canales García, José
Cabezas Martín, Alicia
Rodrigues, Joaquim Rui de Castro
Pinto Corraliza, Rosa María
López Villamizar, Iralis Mercedes
Costas Vázquez, María Jesús
Cameselle Viña, José Carlos
Instituto Politécnico de Leiria. Portugal
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Sistemas de ensayo
Biocatálisis
Señalización de calcio
Mecanismos de las enzimas
Diseño de proteínas
Assay systems
Biocatalysis
Calcium signalling
Enzyme mechanisms
Protein design
La ribosa ADP cíclica (cADPR) es un mensajero para la movilización de Ca2+. Se cree que su rotación se produce por glicohidrolisis a ADP-ribosa. Sin embargo, la ADP-ribosa/CDP-difosfatasa alcohólica (ADPRibase-Mn) actúa como fosfhidrolasa cADPR con una eficiencia mucho menor que en sus principales sustratos. Recientemente, demostramos que la mutagénesis de la ADPRibasa-Mn humana en Phe37, Leu196 y Cys253 altera su especificidad: el mejor sustrato de la mutante F37A + L196F + C253A es el cADPR por una diferencia corta, siendo la mutación Cys253 esencial para la preferencia del cADPR. Su proximidad a la ribosa "norte" del cADPR en los modelos de acoplamiento indica que Cys253 es una restricción estérica para el posicionamiento del cADPR. Con el objetivo de obtener una fosfohidrolasa específica del cADPR, se probaron nuevas mutaciones en Asp250, Val252, Cys253 y Thr279, todas ellas cerca de la ribosa 'norte'. En primer lugar, la mutante F37A + L196F + C253G, con un residuo más pequeño 253 (Ala > Gly), mostró una mayor especificidad del cADPR. Luego, el mutante F37A + L196F + V252A + C253G, con otro residuo más pequeño (Val > Ala), mostró la especificidad deseada, con el cADPR kcat/KM ≈20-200 veces más grande que para cualquier otro sustrato. Cuando se probó en mezclas de nucleótidos, el cADPR se agotó mientras que otros permanecieron inalterados. Sugerimos que la fosfhidrolasa específica del cADPR, por transgénesis celular u orgánica, o las mutaciones diseñadas, por edición del genoma, ofrecen oportunidades para estudiar el efecto del agotamiento del cADPR en los muchos sistemas en los que interviene.
Cyclic ADP-ribose (cADPR) is a messenger for Ca2+ mobilization. Its turnover is believed to occur by glycohydrolysis to ADP-ribose. However, ADP-ribose/CDP-alcohol diphosphatase (ADPRibase-Mn) acts as cADPR phosphohydrolase with much lower efficiency than on its major substrates. Recently, we showed that mutagenesis of human ADPRibase-Mn at Phe37, Leu196 and Cys253 alters its specificity: the best substrate of the mutant F37A + L196F + C253A is cADPR by a short difference, Cys253 mutation being essential for cADPR preference. Its proximity to the ‘northern’ ribose of cADPR in docking models indicates Cys253 is a steric constraint for cADPR positioning. Aiming to obtain a specific cADPR phosphohydrolase, new mutations were tested at Asp250, Val252, Cys253 and Thr279, all near the ‘northern’ ribose. First, the mutant F37A + L196F + C253G, with a smaller residue 253 (Ala > Gly), showed increased cADPR specificity. Then, the mutant F37A + L196F + V252A + C253G, with another residue made smaller (Val > Ala), displayed the desired specificity, with cADPR kcat/KM ≈20–200-fold larger than for any other substrate. When tested in nucleotide mixtures, cADPR was exhausted while others remained unaltered. We suggest that the specific cADPR phosphohydrolase, by cell or organism transgenesis, or the designed mutations, by genome editing, provide opportunities to study the effect of cADPR depletion on the many systems where it intervenes.
2020-05-12T16:32:41Z
2020-05-12T16:32:41Z
2018
article
2045-2322
http://hdl.handle.net/10662/10629
Ribeiro, J.M., Canales, J., Cabezas, A. et al. Specific cyclic ADP-ribose phosphohydrolase obtained by mutagenic engineering of Mn2+-dependent ADP-ribose/CDP-alcohol diphosphatase. Sci Rep 8, 1036 (2018). https://doi.org/10.1038/s41598-017-18393-9
10.1038/s41598-017-18393-9
Scientific reports
1
11
8, 1036
eng
https://www.nature.com/articles/s41598-017-18393-9
HTTPS://doi.org/10.1038/s41598-017-18393-9
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Atribución 4.0 Internacional
Nature Research
oai:dehesa.unex.es:10662/114652024-03-21T08:07:14Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Calmodulin inhibitors increase the affinity of Merocyanine 540 for boar sperm membrane under non-capacitating conditions
González Fernández, Lauro
Macías García, Beatriz
Calle Guisado, Violeta
García Marín, Luis Jesús
Bragado González, María Julia
Centro de Cirugía de Mínima Invasión Jesús Usón. Cáceres
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Departamento de Fisiología
Universidad de Extremadura. Departamento de Medicina Animal
Universidad de Extremadura. Instituto de Investigación INBIO G+C
Espermatozoides de jabalí
Inhibidores de la calmodulina (CaM)
Merocianina 540 (M540)
Boar spermatozoa
Calmodulin (CaM) inhibitors
Merocyanine 540 (M540)
El objetivo era comprobar si los inhibidores de la calmodulina (CaM), el calmidazolio (CZ) y la N-(6-aminohexil)-5-cloro-1-naftalenosulfonamida (W-7), pueden utilizarse para evaluar el trastorno de los lípidos mediante una citometría de flujo utilizando la merocianina 540 (M540). Los espermatozoides de jabalí se incubaron en condiciones no discapacitantes durante 10 min a temperatura ambiente con 1 μM CZ, 200 μM W-7, o 1 mM 8-bromoadenosina 3′,5′-monofosfato cíclico (8-Br-cAMP). Luego, los espermatozoides fueron 1) evaluados directamente, 2) centrifugados y lavados antes de la evaluación, o 3) diluidos con PBS antes de la evaluación. La evaluación directa mostró un aumento en la alta fluorescencia de M540 en los espermatozoides tratados con los inhibidores (4.7 ± 1.8 [control] vs. 70.4 ± 4.0 [CZ] y 71.4 ± 4.2 [W-7], % medio ± SD, P < 0.001); el lavado disminuyó el porcentaje de espermatozoides que mostraban alta fluorescencia de M540 para W-7 (4. 8 ± 2,2, % medio ± SD) pero no para CZ (69,4 ± 3,9, % medio ± SD, P < 0,001), y la dilución mostró un aumento de la alta fluorescencia M540 tanto para CZ como para W-7; el 8-Br-cAMP no indujo un aumento de los espermatozoides que mostraban alta fluorescencia M540. Por lo tanto, hay que tener especial cuidado cuando se utiliza M540 en espermatozoides con inhibidores de CaM.
We aimed to test whether the calmodulin (CaM) inhibitors, calmidazolium (CZ) and N-(6-aminohexyl)-5-chloro-1-naphthalenesulfonamide (W-7), can be used to assess lipid disorder by flow cytometry using Merocyanine 540 (M540). Boar spermatozoa were incubated in non-capacitating conditions for 10 min at room temperature with 1 μM CZ, 200 μM W-7, or 1 mM 8-bromoadenosine 3′,5′-cyclic monophosphate (8-Br-cAMP). Then, sperm were 1) directly evaluated, 2) centrifuged and washed prior to evaluation, or 3) diluted with PBS prior to evaluation. Direct evaluation showed an increase in high M540 fluorescence in spermatozoa treated with the inhibitors (4.7 ± 1.8 [control] vs. 70.4 ± 4.0 [CZ] and 71.4 ± 4.2 [W-7], mean % ± SD, P < 0.001); washing decreased the percentage of sperm showing high M540 fluorescence for W-7 (4.8 ± 2.2, mean % ± SD) but not for CZ (69.4 ± 3.9, mean % ± SD, P < 0.001), and dilution showed an increase in high M540 fluorescence for both CZ and W-7; 8-Br-cAMP did not induce a rise in sperm showing high M540 fluorescence. Therefore, special care must be taken when M540 is used in spermatozoa with CaM inhibitors.
2020-10-14T08:59:58Z
2020-10-14T08:59:58Z
2018
article
0916-8818
http://hdl.handle.net/10662/11465
González Fernández, L.; Macías García, B.; Calle Guisado, V.; García Marín, L. J.; Bragado González, M. J. (2018). Calmodulin inhibitors increase the affinity of Merocyanine 540 for boar sperm membrane under non-capacitating conditions. Journal of reproduction and development, 64, 5, 445-449. ISSN 0916-8818. DOI: 10.1262/jrd.2018-021
10.1262/jrd.2018-021
Journal of reproduction and development
5
445
449
64
1348-4400
eng
https://doi.org/10.1262/jrd.2018-021
https://www.jstage.jst.go.jp/article/jrd/64/5/64_2018-021/_article
http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
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Atribución-NoComercial 4.0 Internacional
Society for reproduction and development
oai:dehesa.unex.es:10662/134642024-02-21T08:16:39Zcom_10662_30com_10662_29com_10662_27com_10662_37col_10662_31col_10662_158
Distribution of planar cell polarity proteins in the developing avian retina
Álvarez Hernán, Guadalupe
Garrido Jiménez, Sergio
Román García, Ángel Carlos
Carvajal González, José María
Francisco Morcillo, Javier de
Universidad de Extremadura. Departamento de Anatomía, Biología Celular y Zoología
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Retinogenesis
Planar cell polarity
Axonal guidance
Cell asymmetry
Cell morphogenesis
Development
Guía axonal
Asimetría celular
Morfogénesis celular
Desarrollo
Retinogénesis
Polaridad celular plana
Planar cell polarity (PCP) is evolutionary conserved and play a critical role in proper tissue development and
function. During central nervous system development, PCP proteins exhibit specific patterns of distribution and are indispensable for axonal growth, dendritogenesis, neuronal migration, and neuronal differentiation. The retina constitutes an excellent model in which to study molecular mechanisms involved in neural development. The analysis of the spatiotemporal expression of PCP proteins in this model constitutes an useful histological approach in order to identify possible roles of these proteins in retinogenesis. Immunohistochemical techniques revealed that Frz6, Celsr1, Vangl1, Pk1, Pk3, and Fat1 were present in emerging axons from recently differentiated ganglion cells in the chicken retina. Except for Vangl1, they were also asymmetrically distributed in differentiated amacrine cells. Pk1 and Pk3 were restricted in the outer nuclear layer to the outer segment of photoreceptors. Vangl1 was also located in the cell somata of Müller glia. Given these findings together, the distribution of PCP proteins in the developing chicken retina suggest essential roles in axonal guidance during early retinogenesis and a possible involvement in the establishment of cell asymmetry and maintenance of retinal cell phenotypes.
2022-01-21T12:53:05Z
2022-01-21T12:53:05Z
2021
article
http://hdl.handle.net/10662/13464
Álvarez Hernán, G., Garrido Jiménez, S., Román García, A.C., Carvajal González, J.M., Morcillo, J.F. (2021). Distribution of planar cell polarity proteins in the developing avian retina. Experimental Eye Research, 209, 108681. https://doi.org/10.1016/j.exer.2021.108681
10.1016/j.exer.2021.108681
Experimental Eye Research
108681-1
108681-12
209
0014-4835
eng
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0014483521002475?via%3Dihub
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
openAccess
Attribution 4.0 International
Elsevier
oai:dehesa.unex.es:10662/53802021-10-21T08:18:10Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Improved detection of Escherichia coli and coliform bacteria by multiplex PCR
Molina Rodríguez, Felipe Roberto
López Acedo, Elena
Tabla Sevillano, Rafael
Roa Ojalvo, Isidro
Gómez Quintana, Antonia
Rebollo Feria, José Emilio
Instituto Tecnológico Agroalimentario de Extremadura (INTAEX)
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Multiplex PCR
Detección de coliformes
Escherichia coli identificación
Coliform detection
Escherichia coli identification
Antecedentes: La presencia de bacterias coliformes es evaluado periódicamente para establecer la inocuidad microbiológica de los suministros de agua y materias o alimentos procesados. Los coliformes son un grupo de enterobacterias fermentadoras de lactosa, que probablemente adquirió la lacZ por transferencia horizontal de genes y, por lo tanto, constituyen un grupo polifiletico. Entre este grupo de bacterias Escherichia coli es el patógeno más frecuentemente asociadas con brotes de enfermedades de origen alimentario, y con frecuencia se identifica por Beta-glucuronidasa actividad enzimática o por la detección de uidA redundante por PCR. Debido a que una fracción importante de genes de la bacteria Escherichia coli esenciales se mantienen a lo largo de reino bacteriano, la alternativa de oligonucleótidos cebadores específicos para la detección de E. coli no son fácilmente identificables.
Resultados: En este manuscrito, se utilizaron dos estrategias para diseñar cebadores oligonucleótidos con diferentes niveles de especificidad para la detección simultánea de coliformes totales y E. coli por PCR multiplex. Una secuencia consenso de lacZ y el gen huérfano yaiO fueron elegidos como objetivos para la amplificación, la obtención de 234 pb y 115 pb, respectivamente, productos de PCR.
Conclusiones: El ensayo diseñado en esta labor de detección superior demostrada capacidad cuando se prueban con la colección de laboratorio y productos lácteos aislado cepas fermentadoras de lactosa. Mientras lacZ amplicones se encontraron en una amplia gama de bacterias coliformes, amplificación yaiO fue altamente específicas para E. coli. Además, la detección yaiO es no redundante con métodos enzimáticos.
Background: The presence of coliform bacteria is routinely assessed to establish the microbiological safety of water supplies and raw or processed foods. Coliforms are a group of lactose-fermenting Enterobacteriaceae, which most likely acquired the lacZ gene by horizontal transfer and therefore constitute a polyphyletic group. Among this group of bacteria is Escherichia coli, the pathogen that is most frequently associated with foodborne disease outbreaks and is often identified by β-glucuronidase enzymatic activity or by the redundant detection of uidA by PCR. Because a significant fraction of essential E. coli genes are preserved throughout the bacterial kingdom, alternative oligonucleotide primers for specific E. coli detection are not easily identified.
Results: In this manuscript, two strategies were used to design oligonucleotide primers with differing levels of specificity for the simultaneous detection of total coliforms and E. coli by multiplex PCR. A consensus sequence of lacZ and the orphan gene yaiO were chosen as targets for amplification, yielding 234 bp and 115 bp PCR products,
respectively.
Conclusions: The assay designed in this work demonstrated superior detection ability when tested with lab collection and dairy isolated lactose-fermenting strains. While lacZ amplicons were found in a wide range of coliforms, yaiO amplification was highly specific for E. coli. Additionally, yaiO detection is non-redundant with enzymatic methods.
2017-03-09T11:56:49Z
2017-03-09T11:56:49Z
2015
article
1472-6758
http://hdl.handle.net/10662/5380
Molina Rodríguez, F.; López Acedo, E.; Tabla Sevillano, R.; Roa Ojalvo, I.; Gómez Quintana, A. y Rebollo Feria, J. E. (2015). Improved detection of Escherichia coli and coliform bacteria by multiplex PCR. BMC biotechnology, 15, 48. ESSN 1472-6758
10.1186/s12896-015-0168-2
BMC biotechnology
48, 1
48, 9
15
eng
http://bmcbiotechnol.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12896-015-0168-2
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/es/
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BioMed Central
oai:dehesa.unex.es:10662/70882023-01-25T12:13:18Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Physiological, morphological and behavioural responses of self-feeding precocial chicks copying with contrasting levels of water salinity during development
Rocha, Afonso Duarte dos Reis
Silva, Joana Rita Martins
Villegas Sánchez, María Auxiliadora
Sánchez Guzmán, Juan Manuel
Ramos, Jaime Albino
Masero Osorio, José Antonio
Universidade de Coimbra. Portugal
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Hábitats hipersalinos
Dieta ontogenetica
Velocidad metabólica de descanso
Osmorregulación conductual
Hypersaline habitats
Ontogenetic diet
Resting metabolic rate (RMR)
Behavioural osmoregulation
Combined physiological and behavioural responses to salt loads during development have rarely been studied in air-breathing vertebrates able to inhabit hypersaline habitats, but they may be of particular importance in understanding, for example, the differences among species in patterns of habitat use or ontogenetic diet switches. Here, we compared the physiological and behavioural responses of self-feeding precocial chicks developed in contrasting levels of water salinity. The model species was the Black-winged Stilt (Himantopus himantopus) a precocial shorebird that breeds in a range of habitats from freshwater to hypersaline wetlands. Specifically, we compared resting metabolic rate (RMR), heat shock proteins (Hsp70), plasma ions, hematocrit, body mass, body size, growth rate and headshaking behaviour of captive-reared Black-winged Stilt fledglings developed under fresh (0 ½), saline (20 ½), and hypersaline (60 ½) water. Contrary to expectations, none of the physiological and morphological variables measured differed significantly among treatments. Likewise, the RMR of wild and captive-reared fledglings was similar. Surprisingly, the saltgland mass of wild fledglings from freshwater and those from hypersaline habitats was also similar. However, head-shaking, a behavioural response associated to minimize salt intake and to expel the secretions of salt glands, differed according to salinity source: head-shaking rate increased with increasing salinity. The results of this study support the key role of behavioural osmoregulation in avoiding salt stress during development.
2018-03-06T10:59:59Z
2018-03-06T10:59:59Z
2016
article
1932-6203
http://hdl.handle.net/10662/7088
Rocha, A. Duarte dos Reis; Silva, J. R. Martins; Villegas Sánchez, M. A.; Sánchez Guzmán, J. M.; Ramos, J. A. y Masero Osorio, J. A. (2016). Physiological, morphological and behavioural responses of self-feeding precocial chicks copying with contrasting levels of water salinity during development. PLoS ONE, 11, 10, e0165364. ESSN 1932-6203
10.1371/journal.pone.0165364
PLoS ONE
10
1
13
11, e0165364
eng
http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0165364
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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Public Library of Science
oai:dehesa.unex.es:10662/43032023-08-24T09:18:48Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Acerca de la biotecnología ambiental
Blasco Pla, Rafael
Castillo Rodríguez, Francisco
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Biorremediación
Ciclos biogeoquímicos
Biocombustibles
Célula de combustible microbiana
Pilas bioelectroquímicas
Biorremediation
Biogeochemical cycles
Biofuels
Microbial fuel cells
Bioelectrochemical cells
La Biotecnología ambiental trata de corregir los desequilibrios causados en el medio ambiente por actividades industriales que alteran los ecosistemas naturales mediante contaminación química o biológica y que también afectan a los grandes ciclos biogeoquímicos en la biosfera, mayoritariamente catalizados por seres vivos, entre los que los microrganismos juegan un papel esencial. Las desviaciones en los balances de compuestos carbonados, nitrogenados y azufrados atmosféricos pueden causar fenómenos de gran complejidad como el calentamiento global, la destrucción de la capa de ozono, la contaminación ambiental o la lluvia ácida. Por otra parte, las interacciones de los microorganismos entre sí y con el medio, desconocidas en su mayor parte, tiene importantes repercusiones en la generación y persistencia de especies químicas que, depositadas en las cadenas tróficas, son altamente tóxicas para los organismos vivos. Para atajar estos problemas es necesario avanzar en el conocimiento a nivel molecular de la ecología microbiana y del funcionamiento de los ciclos biogeoquímicos, aunque no es menos necesario desarrollar tecnologías para la eliminación de contaminantes industriales in situ y ex situ, evitar su producción y utilización incontroladas así como corregir las actuaciones desequilibrantes, actuales o futuras, de la biogeoquímica planetaria
The aim of environmental biotecnology is to correct environmental imbalances caused by modern industrial activities. Many of these imbalances affect biogeochemical cycles in the biosphere, mainly catalysed by microorganisms. Deviations in the balances of carbon, nitrogen, sulphur and iron compounds may cause very complex phenomena such as global warming, destruction of the ozone layer, environmental pollution and acidification of the sea. On the other hand, the poorly understood microbial interactions --either with each other or the environment-- have important consequences in generating highly recalcitrant chemical species which, accumulating in the trophic chains, are highly toxic for living organisms. To cope with these problems it is necessary to improve knowledge of microbial ecology and the functioning of the biogeochemical cycles at the molecular level, although it is also worth designing technologies to eliminate pollutants either in situ or ex situ, to avoid its uncontrolled production as well as to correct the unbalancing processes affecting phases of the biogeochemical cycles, either in the present day or in the future.
2016-06-16T10:57:43Z
2016-06-16T10:57:43Z
2014-07
article
0210-1963
http://hdl.handle.net/10662/4303
Blasco Pla, R. y Castillo Rodríguez, F. (2014). Acerca de la biotecnología ambiental. Arbor, 190 (768), a157
10.3989/arbor.2014.768n4011
Arbor
768, a157
1
13
190
spa
http://arbor.revistas.csic.es/index.php/arbor/article/view/1959/2294
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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CSIC
oai:dehesa.unex.es:10662/108962023-06-09T08:40:48Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
ER-mitochondria signaling in Parkinson's disease
Gómez Suaga, Patricia
Bravo San Pedro, José Manuel
González Polo, Rosa Ana
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Niso Santano, Mireia
King’s College London. UK
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Centre de Recherche des Cordeliers. France
Mitocondrias
Retículo endoplasmático (RE)
Metabolismo de los lípidos
Enfermedad de Parkinson
Mitochondria
Endoplasmic reticulum (ER),
Lipid metabolism
Parkinson’s disease (PD)
Las mitocondrias forman contactos físicos cercanos con un dominio especializado del retículo endoplasmático (RE), conocido como la membrana asociada a las mitocondrias (MAM). Esta asociación constituye un centro de señalización clave para regular varios procesos celulares fundamentales. Las alteraciones en la señalización de las mitocondrias en la sala de emergencias tienen efectos pleiotrópicos en una variedad de eventos intracelulares que resultan en daño mitocondrial, disomeostasias de Ca2+, estrés en la sala de emergencias y defectos en el metabolismo de los lípidos y la autofagia. Curiosamente, muchos de estos procesos celulares se ven perturbados en las enfermedades neurodegenerativas. Además, cada vez hay más pruebas que destacan que la señalización de las micromitocondrias contribuye a estas enfermedades, incluida la enfermedad de Parkinson (EP). La EP es el segundo trastorno neurodegenerativo más común, para el que siguen siendo difíciles de encontrar tratamientos eficaces basados en mecanismos. Varias proteínas relacionadas con la EP se localizan en las mitocondrias o en el MAM y se ha demostrado que participan en la regulación de la señalización de las mitocondrias. Asimismo, se ha demostrado que las mutaciones relacionadas con la DP dañan esta señalización. ¿Podrían las asociaciones ER-mitocondrias ser el vínculo entre los mecanismos patógenos involucrados en la EP, proporcionando un mecanismo común? ¿Proporcionaría esto un objetivo farmacológico para tratar esta devastadora enfermedad?
En esta revisión, pretendemos resumir el conocimiento actual de la señalización de la ER-mitocondrias y la reciente evidencia sobre el daño a esta señalización en la EP.
Mitochondria form close physical contacts with a specialized domain of the endoplasmic reticulum (ER), known as the mitochondria-associated membrane (MAM). This association constitutes a key signaling hub to regulate several fundamental cellular processes. Alterations in ER–mitochondria signaling have pleiotropic effects on a variety of intracellular events resulting in mitochondrial damage, Ca2+ dyshomeostasis, ER stress and defects in lipid metabolism and autophagy. Intriguingly, many of these cellular processes are perturbed in neurodegenerative diseases. Furthermore, increasing evidence highlights that ER–mitochondria signaling contributes to these diseases, including Parkinson’s disease (PD). PD is the second most common neurodegenerative disorder, for which effective mechanism-based treatments remain elusive. Several PD-related proteins localize at mitochondria or MAM and have been shown to participate in ER–mitochondria signaling regulation. Likewise, PD-related mutations have been shown to damage this signaling. Could ER–mitochondria associations be the link between pathogenic mechanisms involved in PD, providing a common mechanism? Would this provide a pharmacological target for treating this devastating disease?
In this review, we aim to summarize the current knowledge of ER–mitochondria signaling and the recent evidence concerning damage to this signaling in PD.
2020-06-18T11:19:43Z
2020-06-18T11:19:43Z
2018
article
2041-4889
http://hdl.handle.net/10662/10896
Gómez-Suaga, P., Bravo-San Pedro, J.M., González-Polo, R.A. et al. ER–mitochondria signaling in Parkinson’s disease. Cell Death Dis 9, 337 (2018). https://doi.org/10.1038/s41419-017-0079-3
10.1038/s41419-017-0079-3
Cell death and disease
1
12
9, 337
0000-0002-5781-1133
eng
https://www.nature.com/articles/s41419-017-0079-3
https://doi.org/10.1038/s41419-017-0079-3
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Atribución 4.0 Internacional
Springer Nature
oai:dehesa.unex.es:10662/171912023-12-21T13:30:14Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
The Plasma Membrane Ca2+-ATPase, a Molecular Target for Tau-induced Cytosolic Calcium Dysregulation
Berrocal Carrillo, María
Mata Durán, Ana María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
PMCA
Tau
Enfermedad de Alzheimer
Calmodulina
Azul de metileno
Sorcina
Alzheimer’s disease
Calmodulin
Methylene blue
Sorcin
La alteración de la homeostasis del calcio (Ca2+) se está convirtiendo en una característica prevalente del envejecimiento y de las enfermedades neurodegenerativas asociadas a él, como la enfermedad de Alzheimer (EA), el tipo más común de tauopatía. neurodegenerativas asociadas al envejecimiento, incluida la enfermedad de Alzheimer (EA), el tipo más común de tauopatía. Esta enfermedad se caracteriza por la presencia combinada de placas neuríticas extracelulares compuestas por péptidos b amiloides (Ab) y ovillos neurofibrilares de tau. Se ha estudiado ampliamente la asociación de la dishomeostasis del calcio con los Ab. Sin embargo, su relación con tau se ha investigado menos. Por ello, esta revisión se centrará en el vínculo funcional entre tau y la bomba de Ca2+ de la membrana plasmática (PMCA) y otras proteínas de membrana implicadas en la regulación del calcio intracelular y/o su asociación con la neurodegeneración.
Disruption of calcium (Ca2+) homeostasis is emerging as a prevalent feature of aging and agingassociated neurodegenerative diseases, including Alzheimer’s disease (AD), the most common type of tauopathy. This disease is characterized by the combined presence of extracellular neuritic plaques composed by amyloid bpeptides (Ab) and neurofibrillary tangles of tau. The association of calcium dyshomeostasis with Ab has been extensively studied, however its link with tau has been less investigated. Thus, this review will concentrate on the functional link between tau and the plasma membrane Ca2+ pump (PMCA) and other membrane proteins
involved in the regulation of intracellular calcium and/or its association with neurodegeneration.
2023-03-31T10:08:51Z
2023-03-31T10:08:51Z
2022
article
http://hdl.handle.net/10662/17191
Berrocal M, Mata AM. The Plasma Membrane Ca2+-ATPase, a Molecular Target for Tau-induced Cytosolic Calcium Dysregulation. Neuroscience (2022), https://doi.org/10.1016/j. neuroscience.2022.04.016
10.1016/j. neuroscience.2022.04.016
Neurosciencie
0306-4522
eng
https://doi.org/10.1016/j. neuroscience.2022.04.016
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
Elsevier
oai:dehesa.unex.es:10662/166562023-06-08T11:48:39Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
The TKFC Ala185Thr variant, reported as ‘null’ for fructose metabolism, is fully active as triokinase
Ribeiro, João Meireles
Costas Vázquez, María Jesús
Cabezas Martín, Alicia
Meunier, Brigitte
Onoufriadis, Alexandros
Cameselle Viña, José Carlos
Université Paris Saclay. France
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
King’s College London. St John’s Institute of Dermatology. UK
Metabolismo de la fructosa
Oxidación de la fructosa
Cruce de gliceraldehído
Fosforilación del gliceraldehído
Lipogénesis
rs2260655
Polimorfismo de nucleótido único
TKFC
Triocinasa
FMN ciclasa
Fructose metabolism
Fructose oxidation
Glyceraldehyde crossroads
Glyceraldehyde phosphorylation
Single nucleotide polymorphism
Triokinase
FMN cyclase
La triocinasa codificada por TKFC cataliza la fosforilación de gliceraldehído en el metabolismo de la fructosa y favorece la lipogénesis en ratones. En los knockouts o knockdowns de Tkfc, la oxidación de la fructosa predomina sobre la lipogénesis. Se ha informado de que la variante humana Ala185Thr-Triokinasa/FMN ciclasa (TKFC), muy prevalente, es "nula" para el metabolismo de la fructosa, ya que Ala185-TKFC rescata el fenotipo deficiente de TKFC en ratones, mientras que Ala185Thr-TKFC no lo hace. Este informe implica que la mayoría de los humanos mostrarían un metabolismo de la fructosa no canónico, pero ignora la actividad triocinasa bien caracterizada de Ala185Thr-TKFC. Aquí se resume la evidencia anterior, junto con la nueva evidencia de que ambas variantes humanas son igualmente activas en levadura. Por lo tanto, las futuras investigaciones sobre la triocinasa en el contexto del metabolismo humano de la fructosa deberían considerar que Ala185Thr-TKFC no es bioquímicamente "nula".
TKFC-encoded triokinase catalyses glyceraldehyde phosphorylation in fructose metabolism and favours lipogenesis in mice. In Tkfc knockouts or knockdowns, fructose oxidation predominates over lipogenesis. The highly prevalent human variant Ala185Thr-Triokinase/FMN cyclase (TKFC) has been reported to be ‘null’ for fructose metabolism, since Ala185-TKFC rescues the mouse TKFC-deficient phenotype, whereas Ala185Thr-TKFC does not. Such report implies that most humans would display a noncanonical fructose metabolism, but it ignores the well-characterized triokinase activity of Ala185Thr-TKFC. Here, earlier evidence is summarized, along with new evidence that both human variants are equally active in yeast. Therefore, future research on triokinase in the context of human fructose metabolism should consider that Ala185Thr-TKFC is not biochemically ‘null’.
2023-01-25T09:59:26Z
2023-01-25T09:59:26Z
2022
article
http://hdl.handle.net/10662/16656
Ribeiro, J. M.; Costas, M. J.; Cabezas, A.; Meunier, B.; Onoufriadis, A.; Cameselle, J. C. (2022). The TKFC Ala185Thr variant, reported as ‘null’ for fructose metabolism, is fully active as triokinase. FEBS letters, 596, 11, 1453-1457. https://doi.org/10.1002/1873-3468.14309
10.1002/1873-3468.14309
FEBS letters
11
1453
1457
596
1873-3468
0000-0001-8815-1839
0000-0003-0005-081X
eng
https://doi.org/10.1002/1873-3468.14309
http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
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Willey & Sons
oai:dehesa.unex.es:10662/93702023-04-11T10:35:01Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Lung regeneration after toxic injury is improved in absence of dioxin receptor
Morales Hernández, Antonio
Nacarino Palma, Ana
Moreno Marín, Nuria
Barrasa Ardila, Eva María
Paniagua Quiñones, Beroé
Catalina Fernández, Inmaculada
Álvarez Barrientos, Alberto
Bustelo, Xosé R.
Merino Fernández, Jaime María
Fernández Salguero, Pedro María
Hospital Universitario Infanta Cristina. Badajoz
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
St. Jude Children’s Research Hospital. USA
Universidad de Salamanca
Receptor de dioxinas
Regeneración hepática y pulmonar
Pluripotencia
Tallo
Dioxin receptor
Liver and lung regeneration
Pluripotency
Stemness
Evidencias experimentales recientes de sistemas celulares y modelos animales de mamíferos y no mamíferos resaltan funciones novedosas para el hidrocarburo arilo / receptor de dioxinas (AhR) en el mantenimiento de la diferenciación celular y la homeostasis tisular. En particular, el agotamiento de AhR estimula un fenotipo indiferenciado y pluripotente probablemente asociado a una transición mesenquimática en las células epiteliales y al aumento de la tumorigénesis primaria y la metástasis en el melanoma. En este trabajo, hemos utilizado un modelo pulmonar de regeneración epitelial para investigar si AhR regula la reparación adecuada del tejido mediante el ajuste de la expansión de células similares a tallos no diferenciados. Los ratones AhR-nulos desarrollaron una reparación más rápida y eficiente del epitelio bronquial pulmonar sobre la lesión por naftalina que requirió un aumento de la proliferación celular y la activación más temprana de precursores de células como Clara, basales y neuroepiteliales de tallo. Aumento del contenido basal de las células Sca1 + / CD31− / CD4− y en las células que expresan factores de pluripotencia. NANOG y OCT4 también podrían mejorar la reepitelización en los pulmones AhR-nulos. La respuesta reducida de los pulmones AhRdeficientes a la represión de Sonic Hedgehog (Shh) poco después de la lesión también puede ayudar a mejorar su reparación del epitelio bronquiolar. Estos resultados apoyan el papel de AhR en la respuesta regenerativa contra las toxinas y abren la posibilidad de modular su nivel de activación para favorecer la recuperación de las lesiones causadas por contaminantes ambientales.
Recent experimental evidences fromcellular systems and frommammalian and non-mammalian animal models highlight novel functions for the aryl hydrocarbon/dioxin receptor (AhR) in maintaining cell differentiation and tissue homeostasis. Notably, AhR depletion stimulates an undifferentiated and pluripotent phenotype likely associated to a mesenchymal transition in epithelial cells and to increased primary tumorigenesis and metastasis in melanoma. In thiswork,we have used a lungmodel of epithelial regeneration to investigate whether AhR regulates proper tissue repair by adjusting the expansion of undifferentiated stem-like cells. AhR-null mice developed a faster and more efficient repair of the lung bronchiolar epithelium upon naphthalene injury that required increased cell proliferation and the earlier activation of stem-like Clara, Basal and neuroepithelial cells precursors. Increased basal content inmultipotent Sca1+/CD31−/CD4− cells and in cells expressing pluripotency factorsNANOGandOCT4 could also improve re-epithelialization in AhR-null lungs. The reduced response of AhRdeficient lungs to Sonic Hedgehog (Shh) repression shortly after injurymay also help their improved bronchiolar epithelium repair. These results support a role for AhR in the regenerative response against toxins, and open the possibility of modulating its activation level to favor recovery from lesions caused by environmental contaminants.
2019-05-27T09:46:02Z
2019-05-27T09:46:02Z
2017
article
1873-5061
http://hdl.handle.net/10662/9370
Morales Hernández, A.; Nacarino Palma, A.; Moreno Marín, N.; Barrasa Ardila, E. M.; Paniagua Quiñones, B.; Catalina Fernández, I. y Alvarez Barrientos, A. [et al.]. (2017). Lung regeneration after toxic injury is improved in absence of dioxin receptor. Stem cell research, 25, 61-71. ISSN 1873-5061
10.1016/j.scr.2017.10.009
Stem cell research
61
71
25
1876-7753
eng
https://doi.org/10.1016/j.scr.2017.10.009
https://reader.elsevier.com/reader/sd/pii/S187350611730212X?token=0479D3B4CE2BAD8177EE7A88CB47077E2220E285FFCBD8C2C1FA019143A82C499233F68BB89534705C31B4CC77CCACCF
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
Elsevier
oai:dehesa.unex.es:10662/95132022-05-06T08:03:18Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Dioxin receptor adjusts liver regeneration after acute toxic injury and protects against liver carcinogenesis
Moreno Marín, Nuria
Barrasa Ardila, Eva María
Morales Hernández, Antonio
Paniagua Quiñones, Beroé
Blanco Fernández, Gerardo
Merino Fernández, Jaime María
Fernández Salguero, Pedro María
St. Jude Children’s Research Hospital. USA
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Hospital Universitario Infanta Cristina. Badajoz
Modelos de cáncer
Regeneración
Cancer models
Regenerations
El receptor de hidrocarburos arilo (AhR) desempeña funciones en la proliferación celular, la diferenciación y la homeostasis de los órganos, incluido el hígado. El agotamiento de AhR induce indiferenciación y pluripotencia en células normales y transformadas. Aquí, los ratones AhR-nulos (AhR - / -) se usaron para explorar si AhR controla la regeneración hepática y la carcinogénesis al restringir la expansión de células similares a tallos y la expresión de genes de pluripotencia. El daño hepático a corto plazo de CCl4 fue más temprano y se reparó de manera más eficiente en los ratones AhR - / - que en los ratones AhR + / +. Las células CK14 + y TBX3 + y las células OCT4 + y NANOG + que expresan pluripotencia se expandieron antes en AhR - / - que en los hígados regeneradores AhR + / +. Las células de la población del lado del tallo (SP) aisladas de los hígados AhR - / - tuvieron una señalización aumentada de β-catenina (β-Cat) con sobreexpresión de Axin2, Dkk1 y Cyclin D1. Curiosamente, β-Cat, Axin2 y Dkk1 también aumentaron durante la regeneración, pero más notablemente en los hígados AhR-nulos. La carcinogénesis hepática inducida por dietilnitrosamina (DEN) produjo carcinomas grandes en todos los ratones AhR - / - pero en su mayoría adenomas premalignos en menos de la mitad de los ratones AhR + / +. El tejido tumoral AhR-nulo, pero no su parénquima no tumoral circundante, tenía sobreexpresión de β-Cat y Axin2 nuclear. Sin embargo, OCT4 y NANOG se expresaron de manera similar en las lesiones AhR + / + y AhR - / -. Sugerimos que la AhR puede servir para ajustar la reparación del hígado y para bloquear la tumorigénesis mediante la modulación de células similares al tallo y la señalización de β-Cat.
The aryl hydrocarbon receptor (AhR) has roles in cell proliferation, differentiation and organ homeostasis, including the liver. AhR depletion induces undifferentiation and pluripotency in normal and transformed cells. Here, AhR-null mice (AhR−/−) were used to explore whether AhR controls liver regeneration and carcinogenesis by restricting the expansion of stem-like cells and the expression of pluripotency genes. Short-term CCl4 liver damage was earlier and more efficiently repaired in AhR−/− than in AhR+/+ mice. Stem-like CK14 + and TBX3 + and pluripotency-expressing OCT4 + and NANOG + cells expanded sooner in AhR−/− than in AhR+/+ regenerating livers. Stem-like side population cells (SP) isolated from AhR−/− livers had increased β-catenin (β-Cat) signaling with overexpression of Axin2, Dkk1 and Cyclin D1. Interestingly, β-Cat, Axin2 and Dkk1 also increased during regeneration but more notably in AhR-null livers. Liver carcinogenesis induced by diethylnitrosamine (DEN) produced large carcinomas in all AhR−/− mice but mostly premalignant adenomas in less than half of AhR+/+ mice. AhR-null tumoral tissue, but not their surrounding non-tumoral parenchyma, had nuclear β-Cat and Axin2 overexpression. OCT4 and NANOG were nevertheless similarly expressed in AhR+/+ and AhR−/− lesions. We suggest that AhR may serve to adjust liver repair and to block tumorigenesis by modulating stem-like cells and β-Cat signaling.
2019-07-04T11:05:29Z
2019-07-04T11:05:29Z
2017
article
2045-2322
http://hdl.handle.net/10662/9513
Moreno Marín, N.; Barrasa Ardila, E. M.; Morales Hernández, A.; Paniagua Quiñones, B.; Blanco Fernández, G.; Merino Fernández, J. M. y Fernández Salguero, P. M. (2017). Dioxin receptor adjusts liver regeneration after acute toxic injury and protects against liver carcinogenesis. Scientific reports, 7, 10420. ISSN 2045-2322
10.1038/s41598-017-10984-w
Scientific reports
1
12
7, 10420
eng
https://doi.org/10.1038/s41598-017-10984-w
https://www.nature.com/articles/s41598-017-10984-w#author-information
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Attribution 4.0 International
Nature Research
oai:dehesa.unex.es:10662/146272023-09-14T11:58:14Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27com_10662_58com_10662_13442com_10662_11067col_10662_158col_10662_145col_10662_13444
Neuroprotective properties of queen bee acid by autophagy induction
Martínez Chacón, Guadalupe
Paredes Barquero, Marta
Yakhine-Diop, Sokhna M. S.
Uribe Carretero, Elisabet
Bargiela, Ariadna
Sabater Arcis, María
Morales García, José
Alarcón Gil, Jesús
Alegre Cortés, Eva
Canales Cortés, Saray
Rodríguez Arribas, Mario
Camello Almaraz, Pedro Javier
Bravo San Pedro, José Manuel
Pérez Castillo, Ana
Artero, Rubén
González Pozo, Rosa Ana
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Niso Santano, Mireia
Universidad de Extremadura. Instituto Universitario de Investigación Biosanitaria de Extremadura (INUBE)
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Departamento de Fisiología
Universidad de Valencia
Universidad Complutense de Madrid
Autophagy
SIRT1
QBA
Longevity
Neurodegeneration
Parkinson’s disease
Autofagia
Longevidad Neurodegeneración
Enfermedad de Parkinson
Ácido de abeja reina (QBA)
The datasets generated during and/or analyzed during the current study are available from the corresponding author on reasonable request.
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Autophagy is a conserved intracellular catabolic pathway that removes cytoplasmic components to contribute to neuronal homeostasis. Accumulating evidence has increasingly shown that the induction of autophagy improves neuronal health and extends longevity in several animal models. Therefore, there is a great interest in the identification of effective autophagy enhancers with potential nutraceutical or pharmaceutical properties to ameliorate age-related diseases, such as neurodegenerative disorders, and/or promote longevity. Queen bee acid (QBA, 10-hydroxy-2-decenoic acid) is the major fatty acid component of, and is found exclusively in, royal jelly, which has beneficial properties for human health. It is reported that QBA has antitumor, anti-inflammatory, and antibacterial activities and promotes neurogenesis and neuronal health; however, the mechanism by which QBA exerts these effects has not been fully elucidated. The present study investigated the role of the autophagic process in the protective effect of QBA. We found that QBA is a novel autophagy inducer that triggers autophagy in various neuronal cell lines and mouse and fly models. The beclin-1 (BECN1) and mTOR pathways participate in the regulation of QBA-induced autophagy. Moreover, our results showed that QBA stimulates sirtuin 1 (SIRT1), which promotes autophagy by the deacetylation of critical ATG proteins. Finally, QBA-mediated autophagy promotes neuroprotection in Parkinson’s disease in vitro and in a mouse model and extends the lifespan of Drosophila melanogaster. This study provides detailed evidences showing that autophagy induction plays a critical role in the beneficial health effects of QBA.
2022-05-06T11:41:02Z
2022-05-06T11:41:02Z
2021
article
0742-2091
http://hdl.handle.net/10662/14627
Martínez-Chacón, G., Paredes-Barquero, M., Yakhine-Diop, S.M. et al. Neuroprotective properties of queen bee acid by autophagy induction. Cell Biol Toxicol (2021). https://doi.org/10.1007/s10565-021-09625-w
10.1007/s10565-021-09625-w
Cell Biology and Toxicology
1573-6822
0000-0002-5781-1133
eng
https://link.springer.com/article/10.1007/s10565-021-09625-w
http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
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Attribution-NonCommercial 4.0 International
Springer
oai:dehesa.unex.es:10662/190592023-12-23T01:30:55Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Internalized Amyloid-β (1-42) Peptide Inhibits the Store-Operated Calcium Entry in HT-22 Cells
Poejo, Joana Margarida de Andrade
Orantos Aguilera, Yolanda
Martín Romero, Francisco Javier
Mata Durán, Ana María
Gutiérrez Merino, Carlos
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Amiloide-β (1-42)
Entrada de calcio operada por almacenamiento
STIM1
Calmodulina
Retículo endoplásmico
Células HT-22
Enfermedad de Alzheimer
Amyloid-β (1-42)
Store-operated calcium entry
Calmodulin
Endoplasmic reticulum
HT-22 cells
Alzheimer’s disease
La desregulación de las vías de señalización del calcio desempeña un papel fundamental en el inicio de la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer (EA). Las pruebas experimentales acumuladas obtenidas con modelos celulares y animales, así como con muestras de cerebro de EA, señalan la elevada citotoxicidad de las pequeñas formas oligoméricas solubles de los péptidos amiloides β (Aβ) en la EA. En trabajos recientes, hemos propuesto que la complejación A-β calmodulina (CaM) puede desempeñar un papel importante en la señalización neuronal de Ca2+, mediada por proteínas de unión a CaM (CaMBPs). STIM1, una CaMBP reconocida, desempeña un papel clave en la entrada de calcio operada por almacenamiento (SOCE), y se ha demostrado que la función SOCE está disminuida en la EA, lo que resulta en la inestabilidad de las espinas dendríticas y el aumento de la amiloidogénesis. En este trabajo, demostramos que 2 y 5 h de incubación con 2 μM de oligómeros de Aβ (1-42) en la línea celular inmortalizada de hipocampo de ratón HT-22 conduce a la internalización de 62 11 nM y 135 15 nM de Aβ(1-42), respectivamente. Los oligómeros internalizados de Aβ(1-42) se localizan con el retículo endoplásmico (RE) y co-inmunoprecipitan con STIM1, lo que revela que esta proteína es una nueva diana de Aβ. Las mediciones de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia entre STIM1 marcada con una proteína verde fluorescente (GFP) y Aβ (1-42)-HiLyte™-Fluor555 muestran que STIM1 puede unirse a concentraciones nanomolares de oligómeros de Aβ (1-42) en un sitio situado cerca del sitio de unión a CaM en STIM1. El Aβ (1-42) internalizado produce una desregulación de la SOCE en las células HT-22 antes de que pueda detectarse una alteración sostenida de la homeostasis del Ca2+ citosólico, y es provocada por sólo 2 h de incubación con 2 μM de oligómeros de Aβ (1-42). Concluimos que la desregulación de la SOCE inducida por Aβ (1-42) en HT-22 en células HT-22 está causada por la modulación inhibitoria de STIM1 y la activación parcial de los canales de fuga de Ca2+ del RE.
Dysregulation in calcium signaling pathways plays a major role in the initiation of Alzheimer’s disease (AD) pathogenesis. Accumulative experimental evidence obtained with cellular and animal models, as well as with AD brain samples, points out the high cytotoxicity of soluble small oligomeric forms of amyloid-β peptides (Aβ) in AD. In recent works, we have proposed that A-β calmodulin (CaM) complexation may play a major role in neuronal Ca2+ signaling, mediated by CaM-binding proteins (CaMBPs). STIM1, a recognized CaMBP, plays a key role in store-operated calcium entry (SOCE), and it has been shown that the SOCE function is diminished in AD, resulting in the instability of dendric spines and enhanced amyloidogenesis. In this work, we show that 2 and 5 h of incubation with 2 μM Aβ (1-42) oligomers of the immortalized mouse hippocampal cell line HT-22 leads to the internalization of 62 11 nM and 135 15 nM of Aβ (1-42), respectively. Internalized Aβ (1-42) oligomers colocalize with the endoplasmic reticulum (ER) and co-immunoprecipitated with STIM1, unveiling that this protein is a novel target of Aβ. Fluorescence resonance energy transfer measurements between STIM1 tagged with a green fluorescent protein (GFP) and Aβ (1-42)-HiLyte™- Fluor555 show that STIM1 can bind nanomolar concentrations of Aβ (1-42) oligomers at a site located close to the CaM-binding site in STIM1. Internalized Aβ (1-42) produced dysregulation of the SOCE in the HT-22 cells before a sustained alteration of cytosolic Ca2+ homeostasis can be detected, and is elicited by only 2 h of incubation with 2 μM Aβ (1-42) oligomers. We conclude that Aβ (1-42)-induced SOCE dysregulation in HT-22 cells is caused by the inhibitory modulation of STIM1, and the partial activation of ER Ca2+-leak channels.
2023-12-22T12:34:26Z
2023-12-22T12:34:26Z
2022
article
http://hdl.handle.net/10662/19059
Poejo J, Orantos-Aguilera Y, Martin-Romero FJ, Mata AM, Gutierrez-Merino C. (2022). Internalized Amyloid-β (1-42) Peptide Inhibits the Store-Operated Calcium Entry in HT-22 Cells. International Journal of Molecular Sciences; 23(20):12678. https://doi.org/10.3390/ijms232012678
10.3390/ijms232012678
International Journal of Molecular Sciences
20
12678-1
12678-34
23
1422-0067
0000-0001-8740-1074
0000-0003-3742-2488
0000-0001-6796-7396
0000-0002-2887-7854
0000-0003-3673-7007
eng
https://doi.org/10.3390/ijms232012678
https://www.mdpi.com/1422-0067/23/20/12678
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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MDPI
oai:dehesa.unex.es:10662/50452016-12-14T09:30:49Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Recruiting specialized macrophages across the borders to restore brain functions
Corraliza Generelo, Inés María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Barreras hematoencefálicas
Activación microglía
Fronteras cerebrales
Macrofagos
Funciones reparadoras
Blood–brain barriers
Microglia activation
Brain borders
Macrophages
Reparative functions
Aunque es bien aceptado que el sistema nervioso central tiene un privilegio inmune protegido por la barrera hematoencefálica (BBB) y mantenido por la glía, también se sabe que en condiciones homeostáticas, las células inmunes periféricas son capaces de penetrar en las regiones más profundas del cerebro Sin alterar la integridad estructural de la BBB. Casi todas las enfermedades neurológicas, incluyendo enfermedades degenerativas, autoinmunes o infecciosas, comprometiendo las funciones cerebrales, se desarrollan con un patrón común de inflamación en el que los macrófagos y la activación microglia se han considerado de diez como los "chicos malos". "Sin embargo, reconociendo la enorme heterogeneidad de las poblaciones de macrófagos y también las diferentes propiedades de expresión de la microglia, hay evidencia creciente de condiciones alternativas en las que estas células, si se imprimen y se dirigen en la dirección correcta, podrían ser esenciales para las funciones reparativas y regenerativas. La principal propuesta de esta revisión es integrar estudios sobre la biología de los macrófagos en las fronteras cerebrales donde el desafío final es penetrar a través de la BBB y contribuir a cambiar o incluso detener el curso de la enfermedad. Gracias a los esfuerzos realizados en el siglo pasado, este muro especial se reconoce actualmente como una estructura cooperativa altamente regulada, en la que sus componentes de las unidades neurovasculares. Este nuevo escenario nos ha llevado a revisar la conversación precisa entre los modos de la mente y el cuerpo de la respuesta inmune.
Although is well accepted that the central nervous system has an immune privilege protected by the blood brain barrier (BBB) and maintained by the glia, it is also known that in homeostatic conditions, peripheral immune cells are able to penetrate to the deepest regions of brain without altering the structural integrity of the BBB. Nearly all neurological diseases, including degenerative, autoimmune or infectious ones, compromising brain functions, develop with a common pattern of inflammation in which macrophages and microglia activation have been regarded of ten as the “bad guys. ”However, recognizing the huge heterogeneity of macrophage populations and also the different expression properties of microglia, there is increasing evidence of alternative conditions in which these cells, if primed and addressed in the correct direction, could be essential for reparative and regenerative functions. The main proposal of this review is to integrate studies about macrophage’s biology at the brain borders where the ultimate challenge is to penetrate through the BBB and contribute to change or even stop the course of disease. Thanks to the efforts made in the last century, this special wall is currently recognized as a highly regulated cooperative structure, in which their components from neurovascular units. This new scenario prompted us to review the precise cross-talk between the mind and body modes of immune response.
2016-12-14T09:30:49Z
2016-12-14T09:30:49Z
2014
article
1662-5102
http://hdl.handle.net/10662/5045
Corraliza Generelo, I. M. (2014). Recruiting specialized macrophages across the borders to restore brain functions. Frontiers in cellular neuroscience, 8, 262. ESSN 1662-5102
10.3389/fncel.2014.00262
Frontiers in cellular neuroscience
8, 262
1
7
eng
http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fncel.2014.00262/full
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
Frontiers Media
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Dissemination of antimicrobial‐resistant isolates of Salmonella spp. in wild boars and its relationship with management practices
Gil Molina, María de los Milagros
Gonçalves Blanco, María Pilar
Risco Pérez, David
Martín Cano, Francisco Eduardo
García Sánchez, Alfredo
Rey Pérez, Joaquín
Fernández Llario, Pedro
Quesada Molina, Alberto
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Departamento de Medicina Animal
CICYTEX-La Orden, Área de Producción Animal
Universidad de Extremadura. Instituto de Investigación INBIO G+C
Determinante AMR
Resistencia a los antimicrobianos (AMR)
Gestión
Salmonella
Jabalí salvaje
AMR determinant
Antimicrobial resistance (AMR)
Management
Wild boar
La resistencia a los antimicrobianos (RAM) es una preocupación mundial y controlar su propagación es fundamental para la eficacia de los antibióticos. Los miembros del género Salmonella tienen una amplia distribución, y los jabalíes pueden desempeñar un papel importante en su circulación entre las zonas periurbanas y el medio ambiente, debido a sus frecuentes interacciones tanto con el ganado como con la basura humana. Dado que la población de estos animales está aumentando debido a la gestión en determinadas fincas cinegéticas o a la ausencia de depredadores naturales, el objetivo del presente trabajo es identificar los mecanismos de RAM presentes y/o expresados en Salmonella spp. procedentes de poblaciones de jabalíes y determinar el posible papel de factores relacionados con la gestión aplicada en diferentes fincas cinegéticas situadas en el centro de España. La detección de Salmonella spp. se llevó a cabo en 121 jabalíes muertos procedentes de 24 fincas cinegéticas, y los rasgos de resistencia antimicrobiana se determinaron mediante pruebas de susceptibilidad a los antibióticos y el cribado de sus determinantes genéticos a los antibióticos y la búsqueda de sus determinantes genéticos. Los efectos de la suplementación alimentaria, la proximidad del ganado, la existencia de una valla circundante y la densidad de jabalíes sobre la RAM de los aislados. La subespecie y el serovar predominantes encontrados fueron S. enterica subsp. enterica (n = 69) y S. choleraesuis (n = 33), respectivamente. Las otras subespecies encontradas fueron S. enterica subsp. diarizonae, S. enterica subsp. salamae y S. enterica subsp. houtenae. La RAM era común entre los aislados (75,2%) y el 15,7% mostraba resistencia a múltiples medicamentos (MDR). mostraron resistencia a múltiples fármacos (MDR). La resistencia a las sulfonamidas fue la más frecuente (85,7%), así como a sul1, que fue el determinante de RAM más frecuente. Los plásmidos aparecieron en el 38,8% de los aislados, siendo IncHI1 el replicón detectado con mayor prevalencia. con la mayor prevalencia. La RAM de los aislados aumentó cuando los animales fueron criados con suplementos alimenticios y cercados con vallas alrededor de las fincas.
Antimicrobial resistance (AMR) is a global concern and controlling its spread is critical for the effectiveness of antibiotics. Members of the genus Salmonella are broadly distributed, and wild boar may play an important role in its circulation between periurban areas and the environment, due to its frequent interactions both with livestock or human garbage. As the population of these animals is rising due to management on certain hunting estates or the absence of natural predators, the aim of the present work is to identify the mechanisms of AMR present and/or expressed in Salmonella spp. from wild boar populations and to determine the possible role of managementrelated factors applied to different game estates located in central Spain. The detection of Salmonella spp. was carried out in 121 dead wild boar from 24 game estates, and antimicrobial resistance traits were determined by antibiotic susceptibility testing and screening for their genetic determinants. The effects of feeding upplementation, the proximity of livestock, the existence of a surrounding fence and the density of wild boar on the AMR of the isolates were evaluated. The predominant subspecies and serovar found were S. enterica subsp. enterica (n = 69) and S. choleraesuis (n = 33), respectively. The other subspecies found were S. enterica subsp. diarizonae, S. enterica subsp. salamae and S. enterica subsp. houtenae. AMR was common among isolates (75.2%) and 15.7% showed multi drug resistance (MDR). Resistance to sulphonamides was the most frequent (85.7%), as well as sul1 which was the AMR determinant most commonly found. Plasmids appeared in 38.8% of the isolates, with IncHI1 being the replicon detected with the highest prevalence. TheAMRof the isolates increasedwhen the animalswere raised with feeding supplementation and enclosed by fences around the estates.
2023-01-24T12:06:28Z
2023-01-24T12:06:28Z
2022
article
http://hdl.handle.net/10662/16638
Gil-Molino, M., Gonçalves, P., Risco,D., Martín-Cano, F. E., García, A., Rey, J., Fernández-Llario, P., & Quesada, A. (2022). Dissemination of antimicrobial-resistant isolates of Salmonella spp. in wild boars and its relationshipwith management practices. Transboundary and Emerging Diseases, 69, e1488–e1502. https://doi.org/10.1111/tbed.14480
10.1111/tbed.14480
Transboundary and Emerging Diseases
5
e1488
e1502
69
1865-1682
0000-0003-0797-3377
0000-0003-4971-4883
eng
https://doi.org/10.1111/tbed.14480
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
Wiley
oai:dehesa.unex.es:10662/73832021-12-16T11:32:52Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
The critical role of lipid rafts nanodomains in the cross-talk between calcium and reactive oxygen and nitrogen species in cerebellar granule neurons apoptosis by extracellular potassium deprivation
Gutiérrez Merino, Carlos
Silva, Dorinda Marques da
Fortalezas, Sofia Isabel Almeida
Samhan Arias, Alejandro Khalil
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Apoptosis
Neuronas granulares de cerebelo
Calcio citosólico
Especies reactivas de oxígeno y nitrógeno
Balsas de lípidos
Canales de calcio de tipo L
Citocromo b5 reductasa
nNOS
CaMKII " y otras balsas de lípidos proteínas quinasas asociadas
Cerebellar granule neurons
Cytosolic calcium
Reactive oxygen and nitrogen species
Lipid rafts
L-type calcium channels
Cytochrome b5 reductase
CaMKII and other lipid rafts-associated protein kinases
The apoptosis of cerebellar granule neurons (CGN) induced by low-potassium in serum free medium in vitro has become a widely used model for neuronal apoptosis during in vivo brain development. In this review we shall summarize first the basic features of this model for neuronal apoptosis. Next, we shall focus on the L-type calcium channels (LTCC) inactivation as the primary pro-apoptotic signal in low K+-induced CGN death. This apoptotic process can be split into two major and sequential cellular signaling phases: one reversible phase that offers a temporal window for therapeutic interventions to prevent neuronal death, and an irreversible later phase. Therefore, we shall comment next the critical role of reactive oxygen species (ROS) production and major ROS sources triggering the entry of CGN in the irreversible stages of low K+-induced apoptosis. Then, we shall present the experimental evidences showing clustering of LTCC and ROS producing enzymes in plasma membrane lipid rafts of CGN matured in vitro, which have opened new perspectives for cell signaling in the early and reversible phase of this apoptosis. The role of lipid rafts nanodomains as fast response calcium/nitric oxide transducers of the switch of CGN to low K+ medium will be discussed next. The two major conclusions drawn from this review are: (1) deregulation of the pool of cytochrome b5 reductase associated to plasma membrane-lipid rafts, at least in part due to overexpression of cytochrome b5, can account for the critical superoxide anion overshot which triggers the entry in the irreversible phase of low K+ apoptosis of CGN, and (2) LTCC inactivation is rapidly transduced by lipid rafts nanodomains into a large drop of cytosolic calcium, a switch-off of nitric oxide production and subsequent inactivation of survival signaling pathways dependent on the activity of CaMKII, PKA and Akt/PKB kinases.
2018-05-02T12:20:46Z
2018-05-02T12:20:46Z
2016
article
2372-028X
http://hdl.handle.net/10662/7383
Gutierrez Merino, C.; Silva, D. Marques da, Fortalezas, S. I. Almeida y Samhan Arias, A. K. (2016). The critical role of lipid rafts nanodomains in the cross-talk between calcium and reactive oxygen and nitrogen species in cerebellar granule neurons apoptosis by extracellular potassium deprivation. AIMS molecular science, 3, 1, 12-29. ESSN 2372-0301
10.3934/molsci.2016.1.12
AIMS molecular science
1
12
29
3
eng
http://www.aimspress.com/Molecular/2016/1/12
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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AIMS
oai:dehesa.unex.es:10662/72742023-04-11T10:32:31Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Alu retrotransposons promote differentiation of human carcinoma cells through the aryl hydrocarbon receptor
Morales Hernández, Antonio
González Rico, Francisco Javier
Román García, Ángel Carlos
Rico Leo, Eva María
Álvarez Barrientos, Alberto
Sánchez Ruiz, Laura
Macia Ortega, Ángela
Rodríguez Heras, Sara
García Pérez, José Luis
Merino Fernández, Jaime María
Fernández Salguero, Pedro María
CSIC-Instituto Cajal. Madrid
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Granada
Diferenciación celular
Regulación de genes
Células de carcinoma
Elementos discretos de Alu
Cell differentiation
Gene regulation
Carcinoma cells
Discrete Alu elements
Cell differentiation is a central process in development and in cancer growth and dissemination. OCT4 (POU5F1) and NANOG are essential for cell stemness and pluripotency; yet, the mechanisms that regulate their expression remain largely unknown. Repetitive elements account for almost half of the Human Genome; still, their role in gene regulation is poorly understood. Here, we show that the dioxin receptor (AHR) leads to differentiation of human carcinoma cells through the transcriptional upregulation of Alu retrotransposons, whose RNA transcripts
can repress pluripotency genes. Despite the genome-wide presence of Alu elements, we provide evidences that those located at the NANOG and OCT4 promoters bind AHR, are transcribed by RNA polymerase-III and repress NANOG and OCT4 in differentiated cells. OCT4 and NANOG repression likely involves processing of Alu-derived transcripts through the miRNA machinery involving the Microprocessor and RISC. Consistently, stable AHR knockdown led to basal undifferentiation, impaired Alus transcription and blockade of OCT4 and NANOG repression. We suggest that transcripts produced from AHR-regulated Alu retrotransposons may control the
expression of stemness genes OCT4 and NANOG during differentiation of carcinoma cells. The control of discrete Alu elements by specific transcription factors may have a dynamic role in genome regulation under physiological and diseased conditions.
2018-04-10T11:59:38Z
2018-04-10T11:59:38Z
2016
article
0305-1048
http://hdl.handle.net/10662/7274
Morales Hernández, A.; González Rico, F. J.; Román García, A. C.; Rico Leo, E.M.; Álvarez Barrientos, A.; Sánchez Ruiz, L. y Macia Ortega, A. [et al.]. (2016). Alu retrotransposons promote differentiation of human carcinoma cells through the aryl hydrocarbon receptor. Nucleid acids research, 44, 10. 4665-4683. ESSN 1362-4962
10.1093/nar/gkw095
Nucleid acids research
10
4665
4683
44
eng
info:eu-repo/grantAgreement/EC/FP7/224913
https://academic.oup.com/nar/article/44/10/4665/2515972?searchresult=1
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oai:dehesa.unex.es:10662/82462021-12-16T11:33:04Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Store-operated calcium entry is dispensable for the activation of ERK1/2 pathway in prostate cancer cells
López Guerrero, Aida María
Pascual Caro, Carlos
Martín Romero, Francisco Javier
Pozo Guisado, Eulalia
Universidad de Extremadura. Departamento de Anatomía, Biología Celular y Zoología
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Calcio
CRISPR
ERK1/2
SOCE
Src
STIM1
Calcium
STIM1, el sensor de Ca2 + del retículo endoplásmico que modula la actividad de los canales de Ca2 + de la membrana plasmática, se fosforila en los sitios objetivo de ERK1 / 2 durante el agotamiento del almacenamiento de Ca2 + desencadenado por thapsigargin o factor de crecimiento epidérmico (EGF). Esta fosforilación dependiente de ERK1 / 2 regula la localización y disociación de STIM1 de los microtúbulos, y se sabe que mejora la unión a ORAI1, un canal de entrada de Ca2 + (SOCE) operado en el almacén, lo que lleva a la activación de esta vía de afluencia de Ca2 +. Sin embargo, quedaron algunas pruebas de un papel para SOCE en la activación de ERK1 / 2, y aquí evaluamos la contribución de SOCE a la activación de ERK1 / 2 generando una línea celular deficiente en STIM1 mediante la edición del genoma CRISPR / Cas9 del locus STIM1 En células de cáncer de próstata PC3. La modificación genómica consistió en una inserción de pares de 16 bases en el exón 5 de ambos alelos, anulando así la síntesis de STIM1. Las células STIM1-KO mostraron una disminución sorprendente en el flujo de Ca2 + en respuesta a thapsigargin o EGF, un resultado que demuestra que SOCE media la entrada de Ca2 + en las células PC3 durante la estimulación con EGF. Además, se encontraron niveles idénticos de ERK1 / 2 total en células STIM1-KO y en la línea celular parental, y la activación de ERK1 / 2 se activó completamente en células KO, tanto en presencia como en ausencia de Ca2 + extracelular, un resultado que apoya que STIM1 y SOCE no son necesarios para la activación de ERK1 / 2. Esta activación fue sensible a la inhibición de la Src quinasa, pero no a la inhibición de CAMKII ni a la PKC, un resultado que establece a STIM1 y SOCE como objetivos descendentes del eje Src-Raf-MEK-ERK, en lugar de reguladores ascendentes.
STIM1, the endoplasmic reticulum Ca2+ sensor that modulates the activity of plasma membrane Ca2+ channels, becomes phosphorylated at ERK1/2 target sites during Ca2+ store depletion triggered by thapsigargin or epidermal growth factor (EGF). This ERK1/2-dependent phosphorylation regulates STIM1 localization and dissociation from microtubules, and it is known that enhances the binding to ORAI1, a store-operated Ca2+ entry (SOCE) channel, leading to the activation of this Ca2+ influx pathway. However, there remained some evidence of a role for SOCE in the activation of ERK1/2, and here we assessed the contribution of SOCE to ERK1/2 activation by generating a STIM1-deficient cell line by CRISPR/Cas9 genome editing of the STIM1 locus in prostate cancer PC3 cells. The genomic modification consisted of a 16 base -pair insertion in exon 5 of both alleles, therefore abrogating STIM1 synthesis. STIM1-KO cells did show a striking decrease in Ca2+ influx in response to thapsigargin or EGF, a result that demonstrates that SOCE mediates Ca2+ entry in PC3 cells during stimulation with EGF. Moreover, identical levels of total ERK1/2 were found in STIM1-KO cells and the parental cell line, and ERK1/2 activation was fully activated in KO cells, both in the presence and in the absence of extracellular Ca2+, a result that supports that STIM1 and SOCE are not required for ERK1/2 activation. This activation was sensitive to Src kinase inhibition, but not to CAMKII nor PKC inhibition, a result that sets STIM1 and SOCE as downstream targets of the axis Src-Raf-MEK-ERK, rather than upstream regulators.
2018-11-20T11:14:57Z
2018-11-20T11:14:57Z
2017
article
0898-6568
http://hdl.handle.net/10662/8246
López Guerrero, A. M.; Pascual Caro, C.; Martin Romero, F. J.; Pozo Guisado, E. (2017). Store-operated calcium entry is dispensable for the activation of ERK1/2 pathway in prostate cancer cells. Cellular signalling, 40, 44-52. ESSN 1873-3913
10.1016/j.cellsig.2017.08.010
Cellular signalling
44
52
40
eng
https://doi.org/10.1016/j.cellsig.2017.08.010
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/es/
openAccess
Atribución-NoComercial-CompartirIgual 3.0 España
Elsevier
oai:dehesa.unex.es:10662/67462021-10-26T08:20:37Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Echinococcus granulosus Antigen B binds to monocytes and macrophages modulating cell response to inflammation
Silva Álvarez, María Valeria
Folle López, Ana Maite
Ramos, Ana Lía
Kitano, Eduardo S.
Iwai, Leo K.
Corraliza Generelo, Inés María
Córsico, Betina
Ferreira Váquez, Ana María
Universidad de la República. Uruguay
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad Nacional de La Plata. Argentina
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). Argentina
Instituto Butantan. Brasil
Echinococcus granulosus
Antígeno B
HLBP
Celda vinculante
Lipoproteínas
Monocitos
Macrófagos
Antigen B
Cell binding
Lipoproteins
Monocytes
Macrophages
Antecedentes: El antígeno B (EgAgB) es una lipoproteína lanzada abundantemente por la larva del cestodo Echinococcus granulosus en los tejidos del huésped. Su fracción de proteína pertenece a la familia específica de cestodos conocido como ligador hidrófobo de proteínas (HLBP) y es codificada por el gen de la subfamilia (EgAgB8/1-EgAgB8/5). Las funciones de la biología del parásito en EgAgB siguen siendo inciertas. Puede jugar un papel en el metabolismo de los lípidos del parásito ya que transporta los lípidos del huésped cuando E. granulosus es incapaz de sintetizarse. Por otro lado, hay evidencias que apoyan actividades en la modulación inmune EgAgB, particularmente en las células del sistema inmune innato. Ambas funciones hipotéticas podrían implicar interacciones EgAgB con los monocitos y macrófagos, los cuales no han sido analizados formalmente todavía.
Métodos: Los EgAgB vinculantes para monocitos y macrófagos fueron estudiados por citometría de flujo utilizando la inflamación peritoneal y la contratación de células THP-1 línea celular. La participación de las proteínas y de los fosfolípidos en fracciones EgAgB vinculantes a las celdas fueron analizados empleando un lípido-libre EgAgB subunidades recombinantes y fosfolipasa D tratada-EgAgB (le falta la cabeza polar de los fosfolípidos). Los ensayos de competencia vinculantes con las lipoproteínas plasmáticas y ligadores para receptores de lipoproteínas se realizan para obtener información acerca de la supuesta recepción de EgAgB en estas células. La arginasa-I, la inducción y el PMA/LPS-desencadenó la IL-1β, TNF-α y la secreción de IL-10 fueron examinados para investigar los resultados de EgAgB vinculante en respuesta a macrófagos.
Resultados: Los monocitos y macrófagos dependientes específicamente del nativo EgAgB; este enlace también se encontró con los lípidos libres rEgAgB rEgAgB8/1 y8/3, pero no con las subunidades rEgAgB8/2. El tratamiento de EgAgB fosfolipasa D, no la competencia con vesículas de fosfolípidos, causaron una fuerte inhibición de la actividad de enlace EgAgB, sugiriendo una contribución indirecta de fosfolípidos a células con interacción EgAgB. Además, la prueba de competencia de aglutinantes indicó que esta interacción puede involucrar receptores con afinidad por las lipoproteínas del plasma. A nivel funcional, la exposición de los macrófagos para EgAgB induce un poco de la arginasa I e inhibe la respuesta mediada por LPS/PMA IL-1β y TNF-α en la secreción de IL-10 de manera independiente.
Conclusión: EgAgB y, particularmente su predominante8/1 EgAgB apolipoproteína, son potenciales ligadores para receptores de monocitos y macrófagos. Estos receptores pueden estar también implicados en el reconocimiento de lipoproteínas plasmáticas e inducir un efecto anti-inflamatorio en los macrófagos de fenotipo a partir del reconocimiento de EgAgB.
Background: Antigen B (EgAgB) is an abundant lipoprotein released by the larva of the cestode Echinococcus granulosus into the host tissues. Its protein moiety belongs to the cestode-specific family known as hydrophobic ligand binding protein (HLBP), and is encoded by five gene subfamilies (EgAgB8/1-EgAgB8/5). The functions of EgAgB in parasite biology remain unclear. It may play a role in the parasite’s lipid metabolism since it carries host lipids that E. granulosus is unable to synthesis. On the other hand, there is evidence supporting immune modulating activities in EgAgB, particularly on innate immune cells. Both hypothetical functions might involve EgAgB interactions with monocytes and macrophages, which have not been formally analysed yet.
Methods: EgAgB binding to monocytes and macrophages was studied by flow cytometry using inflammation recruited peritoneal cells and the THP-1 cell line. Involvement of the protein and phospholipid moieties in EgAgB binding to cells was analysed employing lipid-free recombinant EgAgB subunits and phospholipase D treated-EgAgB (lacking the polar head of phospholipids). Competition binding assays with plasma lipoproteins and ligands for lipoprotein receptors were performed to gain information about the putative EgAgB receptor(s) in these cells. Arginase-I induction and PMA/LPS-triggered IL-1β, TNF-α and IL-10 secretion were examined to investigate the outcome of EgAgB binding on macrophage response.
Results: Monocytes and macrophages bound native EgAgB specifically; this binding was also found with lipid-free rEgAgB8/1 and rEgAgB8/3, but not rEgAgB8/2 subunits. EgAgB phospholipase D-treatment, but not the competition with phospholipid vesicles, caused a strong inhibition of EgAgB binding activity, suggesting an indirect contribution of phospholipids to EgAgB-cell interaction. Furthermore, competition binding assays indicated that this interaction may involve receptors with affinity for plasma lipoproteins. At functional level, the exposure of macrophages to EgAgB induced a very modest arginase-I response and inhibited PMA/LPS-mediated IL-1β and TNF-α secretion in an IL-10-independent manner.
Conclusion: EgAgB and, particularly its predominant EgAgB8/1 apolipoprotein, are potential ligands for monocyte and macrophage receptors. These receptors may also be involved in plasma lipoprotein recognition and induce an anti-inflammatory phenotype in macrophages upon recognition of EgAgB.
2017-12-21T11:19:50Z
2017-12-21T11:19:50Z
2016
article
1756-3305
http://hdl.handle.net/10662/6746
Silva Álvarez, M. V.; Folle López, A. M.; Ramos, A. L.; Kitano, E. S.; Iwai, L. K.; Corraliza Generelo, I. M.; Córsico, B. [el al.]. (2016). Echinococcus granulosus Antigen B binds to monocytes and macrophages modulating cell response to inflammation. Parasites and vectors, 9, 1, 69. ESSN 1756-3305
10.1186/s13071-016-1350-7
Parasites and vectors
1
1
17
9, 69
eng
https://parasitesandvectors.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13071-016-1350-7
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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BioMed Central
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Characterization of autochthonal Hafnia spp. strains isolated from Spanish soft raw ewe's milk PDO cheeses to be used as adjunct culture
Vázquez Merchán, Almudena
Ruiz Moyano, Santiago
Vázquez Hernández, María
Martín González, Alberto
Lorenzo Benayas, María Jesús
Benito Bernáldez, María José
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Departamento de Producción Animal y Ciencias de los Alimentos
Universidad de Extremadura. Instituto Universitario de Investigación de Recursos Agrarios (INURA)
Productos lácteos
Enterobacterias
Hafnia alvei
Factor de riesgo
Condiciones de crecimiento
Propiedades tecnológicas
Dairy product
Enterobacteria
Risk factor
Growth conditions
Technological properties
En el presente trabajo se han estudiado las enterobacterias implicadas en la maduración de los quesos artesanos crudos de leche de oveja DOP "Torta del Casar" y "Queso de la Serena" producidos en Extremadura (España). DOP "Torta del Casar" y "Queso de la Serena" producidos en Extremadura (España). Estos aislados se clasificaron por cepas, se sometieron a pruebas de seguridad y se caracterizaron por algunas propiedades tecnológicas importantes. Un total de 485 enterobacterias se agruparon mediante RAPD-PCR y posteriormente se identificaron mediante secuenciación parcial del gen 16S rRNA. 16S rRNA. Entre las 17 especies diferentes identificadas, Hafnia paralvei fue la especie predominante; H. alvei y Lelliottia amnigena estaban presentes en menor medida. Por consiguiente, se seleccionaron 55 cepas de Hafnia spp. su perfil genético y su origen lácteo. En general, fueron capaces de producir las putrescina y cadaverina en condiciones favorables, presentaban actividad α-hemolítica y no producían toxina citolítica. no producían toxina citolítica activa contra células HeLa ni contenían genes de virulencia. Además, los perfiles de mostraron que 17 cepas de Hafnia spp. eran menos resistentes a los 33 antibióticos ensayados; posteriormente posteriormente, se caracterizaron tecnológicamente. Aunque mostraban diferencias, en general estaban bien adaptadas a las condiciones de estrés de la maduración del queso. adaptadas a las condiciones de estrés de la maduración del queso. Entre ellas, dos cepas, H. alvei 544 y 1142, destacan principalmente por su capacidad proteolítica. principalmente por su actividad proteolítica a temperaturas de refrigeración y su baja o nula producción de gas. o nula. Aunque son necesarios más estudios antes de su aplicación industrial, estas dos cepas se proponen como cultivos adyuvantes para favorecer la homogeneidad de estos quesos DOP, preservando sus características sensoriales únicas. características sensoriales únicas.
The present work was performed to study the enterobacteria involved in the ripening of the artisanal raw ewe's milk PDO cheeses ‘Torta del Casar’ and ‘Queso de la Serena’ produced in Extremadura (Spain). These isolates were strain-typed, safety tested and characterized for some important technological properties. A total of 485 enterobacterial isolates were clustered by RAPD-PCR and subsequently identified by partial sequencing of the 16S rRNA gene. Among the 17 different species identified, Hafnia paralvei was the predominant species; H. alvei and Lelliottia amnigena were present to a lesser extent. Therefore, 55 Hafnia spp. strains, selected according to their genetic profile and dairy origin, were tested for the safe application. Overall, they were able to produce the biogenic amines putrescine and cadaverine under favourable conditions, presented α-haemolytic activity and did not produce cytolytic toxin active against HeLa cells or contain virulence genes. In addition, antibiotic susceptibility profiles showed that 17 Hafnia spp. strains were less resistant to the 33 antibiotics tested; subsequently, they were further technologically characterized. Although they showed differences, in general, they were well adapted to the stress conditions of cheese ripening. Among them, two strains, H. alvei 544 and 1142, are highlighted mainly due to their proteolytic activity at refrigeration temperatures and their low or null gas production. Although further studies are necessary before industrial application, these two strains are proposed for potential use as adjunct cultures to favour the homogeneity of these PDO cheeses, preserving their unique sensory characteristics.
2023-04-14T07:17:38Z
2023-04-14T07:17:38Z
2022
article
0168-1605
http://hdl.handle.net/10662/17250
Merchán,A. V.; Ruiz Moyano, S.; Vázquez Hernández,M.; Martín, A.; Lorenzo, M. J.; Benito, M. J. (2022). Characterization of autochthonal Hafnia spp. strains isolated from Spanish soft raw ewe's milk PDO cheeses to be used as adjunct culture. International Journal of Food Microbiology, Volume 373, 109703, ISSN 0168-1605, https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2022.109703
10.1016/j.ijfoodmicro.2022.109703
International Journal of Food Microbiology
109703-1
109703-13
373
0000-0003-4880-4764
0000-0003-0309-5888
0000-0002-9358-5727
0000-0001-8432-8035
eng
https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2022.109703
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
Elsevier
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PhageCocktail: An R package to design phage cocktails from experimental phage-bacteria infection networks
Díaz Galián, María Victoria
Vega Rodríguez, Miguel Ángel
Molina Rodríguez, Felipe Roberto
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Departamento de Tecnología de los Computadores y de las Comunicaciones
Terapia de fagos
Cóctel de fagos
Red de infección fagobacteria
Paquete R
Phage therapy
Phage cocktail
Phage-bacteria infection network
R package
Financiación de acceso abierto gracias al acuerdo CRUE-CSIC con Elsevier.
Background and objective: Phage therapy is a resurgent strategy used in medicine and the food industry to lyse bacteria that cause damage to health or spoil a food product. Frequently, phage-bacteria infection networks have a large size, making it impossible to manually study all possible phage cocktails. Thus, this article presents an R package called PhageCocktail to automatically design efficient phage cocktails from phage-bacteria infection networks.
Methods: This R package includes four different methods for designing phage cocktails: ExhaustiveSearch, ExhaustivePhi, ClusteringSearch, and ClusteringPhi. These four methods are explained in detail and are evaluated using 13 empirical phage-bacteria infection networks. More specifically, runtime and expected success (fraction of lysed bacteria) are analyzed.
Results: The four methods have variations in terms of runtime and quality of the results. ExhaustiveSearch always provides the best possible phage cocktail, but its runtime could be long. ExhaustivePhi only focuses on one cocktail size, the one estimated as the best; thus, its runtime is less than ExhaustiveSearch, but it can produce cocktails with more phages than necessary. ClusteringSearch and ClusteringPhi are very fast (generally, less than one millisecond), providing always immediate results due to clustering techniques, but their accuracies can be lower, yielding cocktails with lower expected successes.
Conclusions: The larger the phage-bacteria infection network is, the more complex its analysis is. Thus, this tool eases this task for scientists and other users while designing phage cocktails of good quality. This R package includes four different methods; therefore, users may choose among them, considering their preferences in speed and accuracy of results.
Antecedentes y objetivo: La fagoterapia es una estrategia resurgente utilizada en la medicina y la industria alimentaria para lisar bacterias que causan daño a la salud o estropean un producto alimenticio. Con frecuencia, las redes de infección de fagos y bacterias tienen un gran tamaño, lo que hace imposible estudiar manualmente todos los posibles cócteles de fagos. Por lo tanto, este artículo presenta un paquete R llamado PhageCocktail para diseñar automáticamente cócteles de fagos eficientes a partir de redes de infección de fagos y bacterias.
Métodos: este paquete R incluye cuatro métodos diferentes para diseñar cócteles de fagos: ExhaustiveSearch, ExhaustivePhi, ClusteringSearch y ClusteringPhi. Estos cuatro métodos se explican en detalle y se evalúan utilizando 13 redes empíricas de infección por fagos y bacterias. Más específicamente, se analizan el tiempo de ejecución y el éxito esperado (fracción de bacterias lisadas).
Resultados: Los cuatro métodos tienen variaciones en términos de tiempo de ejecución y calidad de los resultados. ExhaustiveSearch siempre proporciona el mejor cóctel de fagos posible, pero su tiempo de ejecución puede ser largo. ExhaustivePhi solo se enfoca en un tamaño de cóctel, el estimado como el mejor; por lo tanto, su tiempo de ejecución es menor que el de ExhaustiveSearch, pero puede producir cócteles con más fagos de los necesarios. ClusteringSearch y ClusteringPhi son muy rápidos (generalmente, menos de un milisegundo) y proporcionan resultados siempre inmediatos debido a las técnicas de agrupación, pero sus precisiones pueden ser menores, lo que produce cócteles con menos éxitos esperados.
Conclusiones: Cuanto más grande es la red de infección fago-bacteria, más complejo es su análisis. Por lo tanto, esta herramienta facilita esta tarea a los científicos y otros usuarios mientras diseña cócteles de fagos de buena calidad. Este paquete R incluye cuatro métodos diferentes; por lo tanto, los usuarios pueden elegir entre ellos, considerando sus preferencias en cuanto a rapidez y precisión de los resultados.
2023-04-12T11:02:31Z
2023-04-12T11:02:31Z
2022
article
http://hdl.handle.net/10662/17232
Díaz-Galián, M.V., Vega-Rodríguez, M.A., Molina, F. (2022). PhageCocktail: An R package to design phage cocktails from experimental phage-bacteria infection networks. Computer Methods and Programs in Biomedicine, 221, 106865. https://doi.org/10.1016/j.cmpb.2022.106865
10.1016/j.cmpb.2022.106865
Computer Methods and Programs in Biomedicine
106865-1
106865-9
221
0169-2607
0000-0002-0382-3470
0000-0002-3003-758X
0000-0002-9167-7097
eng
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0169260722002474?via%3Dihub
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Elsevier
oai:dehesa.unex.es:10662/145292023-10-06T11:36:22Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
p53 regulation by MDM2 contributes to self-renewal and differentiation of basal stem cells in mouse and human airway epithelium
Garrido Jiménez, Sergio
Barrera López, Juan Francisco
Díaz Chamorro, Selene
Mateos Quirós, Clara María
Rodríguez Blanco, Ignacio
Márquez Pérez, Francisca Lourdes
Lorenzo Benayas, María Jesús
Centeno Velázquez, Francisco
Román García, Ángel Carlos
Carvajal González, José María
Hospital Universitario de Badajoz
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
MDM2 (Murine double minute 2)
p53
Airway epithelial cells
Células epiteliales de las vías respiratorias
Proper physiological function of mammalian airways requires the differentiation of basal stem cells into secretory or multiciliated cells, among others. In addition, the self- renewal ability of these basal stem cells is crucial for developing a quick response to toxic agents in order to re- establish the epithelial barrier function of the airways. Although these epithelial missions are vital, little is known about those mechanism controlling airway epithelial regeneration in health and dis-ease. p53 has been recently proposed as the guardian of homeostasis, promoting differentiation programs, and antagonizing a de- differentiation program. Here, we exploit mouse and human tracheal epithelial cell culture models to study the role of MDM2- p53 signaling in self- renewal and differentiation in the airway epi-thelium. We show that p53 protein regulation by MDM2 is crucial for basal stem cell differentiation and to keep proper cell proliferation. Therefore, we suggest that MDM2/p53 interaction modulation is a potential target to control regenera-tion of the mammalian airway epithelia without massively affecting the epithe-lium integrity and differentiation potential.
2022-04-20T11:10:22Z
2022-04-20T11:10:22Z
2021
article
0892-6638
http://hdl.handle.net/10662/14529
Garrido-Jimenez, S., Barrera-Lopez, J. F., Diaz-Chamorro, S., Mateos-Quiros, C. M., Rodriguez-Blanco, I., Marquez-Perez, F. L., Lorenzo, M. J., Centeno, F., Roman, A. C., & Carvajal-Gonzalez, J. M. (2021). p53 regulation by MDM2 contributes to self-renewal and differentiation of basal stem cells in mouse and human airway epithelium. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology, 35(9), e21816. https://doi.org/10.1096/fj.202100638R
10.1096/fj.202100638R
FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology
9
e21816-1
e21816-18
35
1530-6860
eng
https://faseb.onlinelibrary.wiley.com/doi/epdf/10.1096/fj.202100638R
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
Wiley
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Importancia fisiológica de la arginasa de glándula mamaria en lactación
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Arginasa
Glándula mamaria
Lactación
Fisiología
Arginase
Mammary gland
Lactation
Physiology
En los animales superiores la excreción del nitrógeno amínico puede llegar a ser un proceso crítico debido a la toxicidad de algunos derivados nitrogenados, fundamentalmente del amoníaco. Si bien es cierto que a pH fisiológico el elevado pK del NH3 (Pk = 9,25) hace que se encuentre mayoritariamente en forma de catión (NH/), que no atraviesa con facilidad las membranas celulares, también lo es que la pequeña cantidad de NH3 existente (1 % a pH 7,4) atraviesa sin dificultad tanto la membrana celular como la mitocondrial, siendo captado rápidamente por el α-cetoglutarato que se transforma, de esta manera en glutamato, provocando así una disminución en los niveles de uno de los intermediarios del ciclo de Krebs, con lo que la eficacia generadora de energía del ciclo es menor. Este hecho puede resultar particularmente peligroso para la célula nerviosa, pudiendo llegar a producirse, en ocasiones, situaciones de coma.
2022-04-08T06:55:34Z
2022-04-08T06:55:34Z
1994
article
0214-039X
http://hdl.handle.net/10662/14484
FUENTES RODRÍGUEZ, J.M. (1994). Importancia fisiológica de la arginasa de glándula mamaria en lactación. Acta Veterinaria, 7, 91-95. ISSN 0214-039X
Acta Veterinaria
91
95
7
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
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Aryl hydrocarbon receptor controls skin homeostasis, regeneration, and hair follicle cycling by adjusting epidermal stem cell function
Rico Leo, Eva María
Lorenzo Martín, Luis Francisco
Román García, Ángel Carlos
Bustelo, Xosé R.
Merino Fernández, Jaime María
Fernández Salguero, Pedro María
Universidad de Salamanca
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Aryl hydrocarbon receptor (AhR)
Cell differentiation
Epidermal stem cells
Hair follicle
Quiescence
Regeneration
Skin homeostasis
Receptor de hidrocarburo de arilo (AhR)
Diferenciación celular
Regeneración
Células madre epidérmicas
Folículo piloso
Quiescencia
Homeostasis de la piel
Skin integrity requires constant maintenance of a quiescent, yet responsive, populationof stem cells. While interfollicular epidermal progenitors control normal homeostasis,hair follicle stem cells residing within the bulge provide regenerative potential duringhair cycle and in response to wounding. The aryl hydrocarbon receptor (AhR) modulatescell plasticity and differentiation and its overactivation results in severe skin lesions inhumans. However, its physiological role in skin homeostasis and hair growth isunknown. Reconstitution assays grafting primary keratinocytes and dermal fibroblastsinto nude mice and 3-D epidermal equivalents revealed a positive role for AhR in skinregeneration, epidermal differentiation, and stem cell maintenance. Furthermore, lackof receptor expression inAhR / mice delayed morphogenesis and impaired hairregrowth with a phenotype closely correlating with a reduction in suprabasal bulgestem cells (α6lowCD34+). Moreover, RNA-microarray and RT-qPCR analyses of fluores-cence-activated cell sorting (FACS)-isolated bulge stem cells revealed that AhR deple-tion impaired transcriptional signatures typical of both epidermal progenitors and bulgestem cells but upregulated differentiation markers likely compromising theirundifferentiated phenotype. Altogether, our findings support that AhR controls skinregeneration and homeostasis by ensuring epidermal stem cell identity and highlightsthis receptor as potential target for the treatment of cutaneous pathologies.
2022-04-20T10:15:57Z
2022-04-20T10:15:57Z
2021
article
1066-5099
http://hdl.handle.net/10662/14528
Rico-Leo EM, Lorenzo-Martín LF,Román AC, Bustelo XR, Merino JM, Fernández-Salguero PM.Aryl hydrocarbon receptor controls skin homeostasis,regeneration, and hair follicle cycling by adjusting epidermalstem cell function. Stem Cells. 2021;39(12):1733-1750. doi:10.1002/stem.3443
10.1002/stem.3443
Stem Cells
12
1733
1750
39
1549-4918
eng
http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
openAccess
Attribution-NonCommercial 4.0 International
Wiley
oai:dehesa.unex.es:10662/171712024-03-21T08:07:25Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27com_10662_58com_10662_70com_10662_17174com_10662_11067com_10662_6860com_10662_38col_10662_158col_10662_145col_10662_285col_10662_17175col_10662_6861
Selected Metabolites Found in Equine Oviductal Fluid do not Modify the Parameters Associated to Capacitation of the Frozen-thawed Equine Spermatozoa "In Vitro"
Fernández Hernández, Pablo
García Marín, Luis Jesús
Bragado González, María Julia
Domingo, Andrés
González Fernández, Lauro
Macías García, Beatriz
Universidad de Extremadura. Grupo de investigación "Señalización Intracelular y Tecnología de la Reproducción" (SINTREP)
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Departamento de Fisiología
Universidad de Extremadura. Departamento de Medicina Animal
Centro de Selección y Reproducción Animal de Extremadura (CENSYRA)
Universidad de Extremadura. Instituto Universitario de Biotecnología Ganadera y Cinegética (INBO G+C)
Capacitación
Caballo
Metabolitos
Esperma
Capacitation
Horse
Metabolites
Sperm
Financiación de acceso abierto gracias al acuerdo CRUE-CSIC con Elsevier.
In the horse, a repeatable protocol for in vitro fertilization has not been developed, possibly due to incomplete sperm capacitation. We have previously identified the metabolites present in equine oviductal fluid (OF). We aimed to test the effects of different metabolites found in equine oviductal fluid on quality parameters of frozen-thawed spermatozoa. Different concentrations of myoinositol (5–25 mM), lactate (6–60 mM), glycine (0.1–5 mM), β-alanine (1–6 mM), and histamine (0.05–0.4 mM) were added independently to modified Whitten's medium (pH = 7.25). Thawed equine spermatozoa (three stallions, one ejaculate per stallion, n = 3) were incubated for 2 hours at 37˚C in presence of the selected metabolites. After sperm incubation, total motility (TM), and progressive motility (PM) were evaluated by computer-assisted sperm analysis. Viability (SYBR-14+/PI−), mitochondrial membrane potential (ΔΨm) (JC-1), acrosome reaction (PNA+/PI−) and reactive oxygen species (ROS) production (CellRox+/PI−), were evaluated by flow cytometry. Protein tyrosine phosphorylation (PY) was evaluated by indirect immunofluorescence. Our results show that the addition of the metabolites at the dosages tested does not exert any effect on the sperm parameters analyzed. More research is needed to ascertain if metabolite addition at the dosages found in the equine OF exerts any remarkable effect on in vitro equine sperm capacitation.
En el caballo, no se ha desarrollado un protocolo repetible para la fertilización in vitro, posiblemente debido a una capacitación incompleta de los espermatozoides. Hemos identificado previamente los metabolitos presentes en el líquido oviductal equino (OF). Nuestro objetivo fue probar los efectos de diferentes metabolitos encontrados en el líquido oviductal equino sobre los parámetros de calidad de los espermatozoides congelados y descongelados. Se agregaron independientemente diferentes concentraciones de mioinositol (5 a 25 mM), lactato (6 a 60 mM), glicina (0,1 a 5 mM), β-alanina (1 a 6 mM) e histamina (0,05 a 0,4 mM). Medio de Whitten (pH = 7,25). Los espermatozoides equinos descongelados (tres sementales, un eyaculado por semental, n = 3) se incubaron durante 2 horas a 37 °C en presencia de los metabolitos seleccionados. Después de la incubación de los espermatozoides, se evaluaron la motilidad total (TM) y la motilidad progresiva (PM) mediante análisis de espermatozoides asistido por computadora. La viabilidad (SYBR-14+/PI−), el potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) (JC-1), la reacción del acrosoma (PNA+/PI−) y la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) (CellRox+/PI−), se evaluaron por flujo citometría La fosforilación de proteína tirosina (PY) se evaluó por inmunofluorescencia indirecta. Nuestros resultados muestran que la adición de los metabolitos a las dosis ensayadas no ejerce ningún efecto sobre los parámetros espermáticos analizados. Se necesita más investigación para determinar si la adición de metabolitos en las dosis encontradas en el OF equino ejerce algún efecto notable sobre la capacitación in vitro del esperma equino.
2023-03-29T09:08:16Z
2023-03-29T09:08:16Z
2022
article
0737-0806
http://hdl.handle.net/10662/17171
Fernández-Hernández, P., García-Marín, L.J., Bragado, M.J., Domingo, A., González-Fernández, L. & Macías-García, B. (2022). Selected Metabolites Found in Equine Oviductal Fluid do not Modify the Parameters Associated to Capacitation of the Frozen-thawed Equine Spermatozoa "In Vitro". Journal of Equine Veterinary Science, 111, 103875. 1-7. https://doi.org/10.1016/j.jevs.2022.103875
10.1016/j.jevs.2022.103875
Journal of Equine Veterinary Science
103875-1
103875-7
111
0000-0001-5445-1630
0000-0002-1795-7381
0000-0001-7770-0775
0000-0001-5568-548X
0000-0001-5331-9793
eng
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0737080622000132?via%3Dihub
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Attribution 4.0 International
Elsevier
oai:dehesa.unex.es:10662/113082022-03-11T09:35:03Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Histone H4 acetylation regulates behavioral inter-individual variability in zebrafish
Román García, Ángel Carlos
Vicente Page, Julián
Pérez Escudero, Alfonso
Carvajal González, José María
Fernández Salguero, Pedro María
García de Polavieja Embid, Gonzalo
Champalimaud Foundation. Portugal
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
CSIC-Instituto Cajal. Madrid
Epigenética
HDAC
YY1
Comportamiento
Variabilidad interindividual
Pez cebra
Epigenetics
Behavior
Inter-individual variability
Zebrafish
FUNDAMENTOS: Los animales pueden mostrar comportamientos muy diferentes incluso en poblaciones isogénicas, pero los mecanismos subyacentes para generar esta variabilidad siguen siendo esquivos. Utilizamos el pez cebra (Danio rerio) como modelo para probar la influencia de las modificaciones de las histonas en el comportamiento.
RESULTADOS: Encontramos que las larvas de pez cebra de laboratorio e isogénico muestran comportamientos individuales consistentes cuando nadan libremente en pozos idénticos o en reacción a estímulos. Esta variabilidad de comportamiento interindividual se reduce cuando dañamos la vía de desacetilación de la histona. Los individuos con altos niveles de acetilación de la histona H4, y específicamente H4K12, se comportan de manera similar al promedio de la población, pero aquellos con bajos niveles se desvían de él. Más precisamente, encontramos un conjunto de regiones genómicas cuya acetilación de histonas H4 se reduce con la distancia entre el individuo y el comportamiento medio de la población. Encontramos pruebas de que esta modulación depende de un complejo de Yin-yang 1 (YY1) y de la histona deacetilasa 1 (HDAC1) que se une a estas regiones y las desactiva. Estos cambios no sólo se mantienen a nivel de la transcripción sino que también se amplifican, ya que la mayoría de las regiones objetivo se encuentran cerca de los genes que codifican los factores de transcripción.
CONCLUSIONES: Sugerimos que la estocasticidad en la vía de desacetilación de las histonas participa en la generación de una variabilidad interindividual de comportamiento genético independiente.
BACKGROUND: Animals can show very different behaviors even in isogenic populations, but the underlying mechanisms to generate this variability remain elusive. We use the zebrafish (Danio rerio) as a model to test the influence of histone modifications on behavior.
RESULTS: We find that laboratory and isogenic zebrafish larvae show consistent individual behaviors when swimming freely in identical wells or in reaction to stimuli. This behavioral inter-individual variability is reduced when we impair the histone deacetylation pathway. Individuals with high levels of histone H4 acetylation, and specifically H4K12, behave similarly to the average of the population, but those with low levels deviate from it. More precisely, we find a set of genomic regions whose histone H4 acetylation is reduced with the distance between the individual and the average population behavior. We find evidence that this modulation depends on a complex of Yin-yang 1 (YY1) and histone deacetylase 1 (HDAC1) that binds to and deacetylates these regions. These changes are not only maintained at the transcriptional level but also amplified, as most target regions are located near genes encoding transcription factors.
CONCLUSIONS: We suggest that stochasticity in the histone deacetylation pathway participates in the generation of genetic-independent behavioral inter-individual variability.
2020-09-18T12:03:02Z
2020-09-18T12:03:02Z
2018
article
1474-760X
http://hdl.handle.net/10662/11308
Román, A., Vicente-Page, J., Pérez-Escudero, A. et al. Histone H4 acetylation regulates behavioral inter-individual variability in zebrafish. Genome Biol 19, 55 (2018). https://doi.org/10.1186/s13059-018-1428-y
10.1186/s13059-018-1428-y
Genome biology
1
21
19, 55
eng
https://doi.org/10.1186/s13059-018-1428-y
https://genomebiology.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13059-018-1428-y
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Atribución 4.0 Internacional
BioMed Central
oai:dehesa.unex.es:10662/190602023-12-23T01:31:03Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
The Plasma Membrane Ca2+-ATPase, a Molecular Target for Tau-induced Cytosolic Calcium Dysregulation
Berrocal Carrillo, María
Mata Durán, Ana María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
PMCA
Tau
Enfermedad de Alzheimer
Calmodulina
Azul de metileno
Sorcina
Alzheimer’s disease
Calmodulin
Methylene blue
Sorcin
Este art. es parte de: Special Issue entitled: SI: The Molecular Bases of Tauopathies
La alteración de la homeostasis del calcio (Ca2+) se está convirtiendo en una característica prevalente del envejecimiento y de las enfermedades neurodegenerativas asociadas a él, como la enfermedad de Alzheimer (EA), el tipo más común de tauopatía. neurodegenerativas asociadas al envejecimiento, incluida la enfermedad de Alzheimer (EA), el tipo más común de tauopatía. Esta enfermedad se caracteriza por la presencia combinada de placas neuríticas extracelulares compuestas por péptidos-β amiloides (Aβ) y ovillos neurofibrilares de tau. Se ha estudiado ampliamente la asociación de la dishomeostasis del calcio con los Aβ. Sin embargo, su relación con tau se ha investigado menos. Por ello, esta revisión se centrará en el vínculo funcional entre tau y la bomba de Ca2+ de la membrana plasmática (PMCA) y otras proteínas de membrana.
Disruption of calcium (Ca2+) homeostasis is emerging as a prevalent feature of aging and agingassociated neurodegenerative diseases, including Alzheimer’s disease (AD), the most common type of tauopathy. This disease is characterized by the combined presence of extracellular neuritic plaques composed by amyloid β-peptides (Aβ) and neurofibrillary tangles of tau. The association of calcium dyshomeostasis with Aβ has been extensively studied, however its link with tau has been less investigated. Thus, this review will concentrate on the functional link between tau and the plasma membrane Ca2+ pump (PMCA) and other membrane proteins involved in the regulation of intracellular calcium and/or its association with neurodegeneration.
2023-12-22T13:06:58Z
2023-12-22T13:06:58Z
2023
article
0306-4522
http://hdl.handle.net/10662/19060
Berrocal, M.; Mata, A. M. (2023). The Plasma Membrane Ca2+-ATPase, a Molecular Target for Tau-induced Cytosolic Calcium Dysregulation. Neuroscience, 518, 112-118. https://doi.org/10.1016/j.neuroscience.2022.04.016
10.1016/j.neuroscience.2022.04.016
Neuroscience
112
118
518
0000-0003-0684-3853
0000-0002-2887-7854
eng
SI: The Molecular Bases of Tauopathies
https://doi.org/10.1016/j.neuroscience.2022.04.016
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0306452222001981
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
Elsevier
oai:dehesa.unex.es:10662/80522023-08-24T09:18:29Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
A Cyanide-Induced 3-Cyanoalanine Nitrilase in the Cyanide-Assimilating Bacterium Pseudomonas pseudoalcaligenes Strain CECT 5344
Acera Hernández, Felipe
Carmona Gallardo, María Isabel
Castillo Rodríguez, Francisco
Quesada Molina, Alberto
Blasco Pla, Rafael
Universidad de Extremadura. Instituto de Investigación INBIO G+C
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Instituto de investigación de carne y productos cárnicos(IProCar)
Biodegradación
Cianuro
Nitrilasa
Biodegradation
Cyanide
Nitrilase
Pseudomonas pseudoalcaligenes CECT 5344 es una bacteria capaz de asimilar el cianuro como única fuente de nitrógeno. Bajo esta condición de crecimiento, se indujo una actividad enzimática 3-cianoalanina nitrilasa. Esta actividad fue codificada por nit4, uno de los cuatro genes de nitrilasa detectados en el genoma de esta bacteria, y su expresión en Escherichia coli permitió a la cepa recombinante asimilar completamente la 3-cianoalanina. P. pseudoalcaligenes CECT 5344 mostró un nivel de crecimiento débil con 3-cianoalanina como fuente de N, a menos que también se agregara KCN. Además, un mutante knock-out de nit4 de P. pseudoalcaligenes CECT 5344 se deterioró gravemente en su capacidad para crecer con 3-cianoalanina y cianuro como fuentes de nitrógeno. La enzima nativa expresada en E. coli se purificó hasta homogeneidad electroforética y se caracterizó bioquímicamente. Nit4 parece ser específico para la 3-cianoalanina, y la cantidad de amonio derivada de la actividad enzimática se duplicó en presencia de actividad asparaginasa agregada exógenamente, lo que demostró que la enzima Nit4 tenía actividades tanto 3-cianoalanina nitrilasa como hidratasa. El gen nit4 está ubicado aguas abajo de la unidad transcripcional de resistencia al cianuro que contiene los genes cio1, cuyos niveles de expresión están bajo el control positivo del cianuro. Los experimentos de PCR en tiempo real revelaron que la expresión de nit4 también estaba regulada positivamente por el cianuro tanto en medios mínimos como en medios LB. Estos resultados sugieren que este grupo de genes, incluidos cio1 y nit4, podrían participar tanto en la resistencia al cianuro como en su asimilación por parte de P. pseudoalcaligenes CECT 5344.
Pseudomonas pseudoalcaligenes CECT 5344 is a bacterium able to assimilate cyanide as a sole nitrogen source. Under this growth condition, a 3-cyanoalanine nitrilase enzymatic activity was induced. This activity was encoded by nit4, one of the four nitrilase genes detected in the genome of this bacterium, and its expression in Escherichia coli enabled the recombinant strain to fully assimilate 3-cyanoalanine. P. pseudoalcaligenes CECT 5344 showed a weak growth level with 3-cyanoalanine as the N source, unless KCN was also added. Moreover, a nit4 knockout mutant of P. pseudoalcaligenes CECT 5344 became severely impaired in its ability to grow with 3-cyanoalanine and cyanide as nitrogen sources. The native enzyme expressed in E. coli was purified up to electrophoretic homogeneity and biochemically characterized. Nit4 seems to be specific for 3-cyanoalanine, and the amount of ammonium derived from the enzymatic activity doubled in the presence of exogenously added asparaginase activity, which demonstrated that the Nit4 enzyme had both 3-cyanoalanine nitrilase and hydratase activities. The nit4 gene is located downstream of the cyanide resistance transcriptional unit containing cio1 genes, whose expression levels are under the positive control of cyanide. Real-time PCR experiments revealed that nit4 expression was also positively regulated by cyanide in both minimal and LB media. These results suggest that this gene cluster including cio1 and nit4 could be involved both in cyanide resistance and in its assimilation by P. pseudoalcaligenes CECT 5344.
2018-10-18T09:45:39Z
2018-10-18T09:45:39Z
2017
article
0099-2240
http://hdl.handle.net/10662/8052
Acera Hernández, F.; Carmona Gallardo,M. I.; Castillo Rodríguez, F.; Quesada Molina, A.; Blasco Pla, R. (2017). A Cyanide-Induced 3-Cyanoalanine Nitrilase in the Cyanide-Assimilating Bacterium Pseudomonas pseudoalcaligenes Strain CECT 5344. Applied and environmental microbiology, 83, 9, e00089. ESSN 1098-5336
10.1128/AEM.00089-17
Applied and environmental microbiology
9
1
14
83, e00089
eng
https://aem.asm.org/content/83/9/e00089-17
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/es/
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Atribución-NoComercial-CompartirIgual 3.0 España
American Society for Microbiology
oai:dehesa.unex.es:10662/90022022-04-20T10:44:36Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
MKK6 controls T3-mediated browning of white adipose tissue
Matesanz Parellada, Nuria
Bernardo Vasco, Edgar
Acín Pérez, Rebeca
Manieri, Elisa
Pérez Sieira, Sonia
Hernández Cosido, Lourdes
Montalvo Romeral, Valle
Mora Corral, Alfonso
Rodríguez Vieítez, Elena
Leiva Vega, Luis
Lechuga Vieco, Ana Victoria
Ruiz Cabello, Jesús
Torres Triana, Jorge Luis
Crespo Ruiz-Cabello, Maria
Centeno Velázquez, Francisco
Álvarez Villamarín, Clara
Marcos Martín, Miguel
Enríquez Domínguez, José Antonio
Nogueiras Pozo, Ruben
Sabio Buzo, Guadalupe
Fundación Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares Carlos III
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Centro Nacional de Biotecnología, CSIC
Universidad de Santiago de Compostela
Universidad de Salamanca
Universidad Complutense de Madrid
Hospital Universitario de Salamanca
Universidad de Extremadura. Grupo de Investigación en Enfermedades Neurodegenerativas
Tejido adiposo
Activador MAPK p38 MKK6
Obesidad
Adipose tissue
p38 MAPK activator MKK6
Obesity
El aumento de la capacidad termogénica del tejido adiposo para mejorar el gasto de energía del organismo se considera una estrategia terapéutica prometedora para combatir la obesidad. Aquí nosotros informe que la expresión del activador MAPK p38 MKK6 está elevada en el tejido adiposo blanco de individuos obesos. Usando animales knockout y shRNA, mostramos que la eliminación de Mkk6 aumenta el gasto de energía y la capacidad termogénica del tejido adiposo blanco, protegiendo a los ratones contra la obesidad inducida por la dieta y el desarrollo de la diabetes. La eliminación de Mkk6 aumenta la expresión de UCP1 estimulada por T3 en los adipocitos, lo que aumenta su capacidad termogénica. De manera mecánica, demostramos que, en el tejido adiposo blanco, p38 se activa mediante una ruta alternativa que involucra AMPK, TAK y TAB. Nuestros resultados identifican MKK6 en los adipocitos como un posible objetivo terapéutico para reducir la obesidad.
Increasing the thermogenic capacity of adipose tissue to enhance organismal energy expenditure is considered a promising therapeutic strategy to combat obesity. Here, we report that expression of the p38 MAPK activator MKK6 is elevated in white adipose tissue of obese individuals. Using knockout animals and shRNA, we show that Mkk6 deletion increases energy expenditure and thermogenic capacity of white adipose tissue, protecting mice against diet-induced obesity and the development of diabetes. Deletion of Mkk6 increases T3-stimulated UCP1 expression in adipocytes, thereby increasing their thermogenic capacity. Mechanistically, we demonstrate that, in white adipose tissue, p38 is activated by an alternative pathway involving AMPK, TAK, and TAB. Our results identify MKK6 in adipocytes as a potential therapeutic target to reduce obesity.
2019-03-22T11:47:25Z
2019-03-22T11:47:25Z
2017
article
2041-1723
http://hdl.handle.net/10662/9002
Matesanz Parellada, N.; Bernardo Vasco, E.; Acín Pérez, R.; Manieri, E.; Pérez Sieira, S.; Hernández Cosido, L.y Montalvo Romeral, V. [et al.] (2017). MKK6 controls T3-mediated browning of white adipose tissue. Nature communications, 8, 856. ISSN 2041-1723
10.1038/s41467-017-00948-z
Nature communications
1
14
8, 856
eng
Https://doi.org/10.1038/s41467-017-00948-z
https://www.nature.com/articles/s41467-017-00948-z#Abs1
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
openAccess
Attribution 4.0 International
Natura Research
oai:dehesa.unex.es:10662/51492023-04-11T10:35:59Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
The dioxin receptor modulates caveolin-1 mobilization during directional migration: role of cholesterol
Rey Barroso, Javier
Álvarez Barrientos, Alberto
Rico Leo, Eva María
Contador Troca, María
Carvajal González, José María
Echarri Aguirre, Asier
Pozo Barriuso, Miguel Ángel del
Fernández Salguero, Pedro María
Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC)
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Mount Sinai School of Medicine. USA
Receptor de dioxina
Caveolin-1
Microdominios de la membrana
Endocitosis
Colesterol
Dioxin receptor
Membrane microdomains
Endocytosis
Cholesterol
Antecedentes: La adhesión y la migración son funciones fisiológicas relevantes que deben ser reguladas por la célula bajo tanto normales como patológicas. El receptor de dioxina (AhR) ha surgido como un factor de transcripción regulando ambos procesos en células mesenquimales, epiteliales y endoteliales. Los resultados indirectos sugieren que AhR podría cooperan no sólo con factores de transcripción adicionales sino también con proteínas asociadas a la membrana para procesos.
Resultados: En este estudio se han utilizado fibroblastos dérmicos inmortalizados y primarios de tipo salvaje (AhR + / +) y AhR-null (AhR - / -) para mostrar que AhR modula la distribución de la membrana y la movilización de la caveolina-1 (Cav-1) durante la migración direccional de células. AhR co-immunoprecipitated con Cav-1 y una fracción de ambas proteínas co-localizados a microdominios de membrana resistentes al detergente (DRM). Consistente con un papel de AhR en el proceso, AhR - / - células tuvo una reducción significativa en Cav-1 en DRMs. Además, la alta densidad celular redujo los niveles nucleares de AhR y desplazó Cav-1 de DRM a la membrana soluble en AhR + / + pero no en AhR - / - células. Tirosina-14 fosforilación tuvo un papel complejo en el mecanismo, ya que su upregulation redujo Cav-1 en DRM en AhR + / + y AhR - / - células, a pesar de los niveles basales más bajos de Y14-Cav-1 en las células nulas. La recuperación de la fluorescencia después del fotoblanqueo reveló que AhR bloqueó el transporte de Cav-1 a la membrana plasmática, un déficit que podría influir en sus niveles DRM. La distribución de la membrana de Cav-1 en fibroblastos AhR-nulo correlacionó con mayores niveles de colesterol y con microdominios de membrana interrumpidos, mientras que la adición de colesterol exógeno cambió la distribución de Cav-1 de AhR + / + al fenotipo nulo. Consistentemente, los niveles más altos de colesterol aumentan la endocitosis dependiente de caveolae en células AhR-nulas.
Conclusiones: Estos resultados sugieren que AhR modula la distribución de Cav-1 en células
migratorias a través del control de microdominio de membrana enriquecido en colesterol. Nuestro estudio también apoya la posibilidad probable de membrana relacionada, factor de transcripción independiente, funciones de AhR.
Background: Adhesion and migration are relevant physiological functions that must be regulated by the cell under both normal and pathological conditions. The dioxin receptor (AhR) has emerged as a transcription factor regulating both processes in mesenchymal, epithelial and endothelial cells. Indirect results suggest that AhR could cooperate not only with additional transcription factors but also with membrane-associated proteins to drive such processes.
Results: In this study, we have used immortalized and primary dermal fibroblasts from wild type (AhR+/+) and AhR-null (AhR−/−) mice to show that AhR modulates membrane distribution and mobilization of caveolin-1 (Cav-1) during directional cell migration. AhR co-immunoprecipitated with Cav-1 and a fraction of both proteins co-localized to detergent-resistant membrane microdomains (DRM). Consistent with a role of AhR in the process, AhR−/− cells had a significant reduction in Cav-1 in DRMs. Moreover, high cell density reduced AhR nuclear levels and moved Cav-1 from DRMs to the soluble membrane in AhR+/+ but not in AhR−/− cells. Tyrosine-14 phosphorylation had a complex role in the mechanism since its upregulation reduced Cav-1 in DRMs in both AhR+/+ and AhR−/−cells, despite the lower basal levels of Y14-Cav-1 in the null cells. Fluorescence recovery after photobleaching revealed that AhR knock-down blocked Cav-1 transport to the plasma membrane, a deficit possibly influencing its depleted levels in DRMs. Membrane distribution of Cav-1 in AhR-null fibroblasts correlated with higher levels of cholesterol and with disrupted membrane microdomains, whereas addition of exogenous cholesterol changed the Cav-1 distribution of AhR+/+ cells to the null phenotype. Consistently, higher cholesterol levels enhanced caveolae-dependent endocytosis in AhR-null cells.
Conclusions: These results suggest that AhR modulates Cav-1 distribution in migrating cells through the control of cholesterol-enriched membrane microdomains. Our study also supports the likely possibility of membrane-related, transcription factor independent, functions of AhR.
2017-02-01T13:11:52Z
2017-02-01T13:11:52Z
2014
article
1478-811X
http://hdl.handle.net/10662/5149
Rey Barroso, J.; Álvarez Barrientos, A. M.; Rico Leo, E.; Contador Troca, M.; Carvajal Gonzalez, J. M.; Echarri Aguirre, A.; Pozo Barriuso, M. A del. et al. (2014). The dioxin receptor modulates caveolin-1 mobilization during directional migration: role of cholesterol. Cell communication and signaling, 12, 57. ISSN 1478-811X
10.1186/s12964-014-0057-7
Cell communication and signaling
57
12
eng
http://biosignaling.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12964-014-0057-7
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
BioMed Central
oai:dehesa.unex.es:10662/69222022-03-11T09:35:19Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Positioning of centrioles is a conserved readout of Frizzled planar cell polarity signalling
Carvajal González, José María
Román García, Ángel Carlos
Mlodzik, Marek
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Polaridad cellular plana
Orientación celular
Drosophila
Planar cell polarity
Cellular orientation
Planar cell polarity (PCP) signalling is a well-conserved developmental pathway regulating
cellular orientation during development. An evolutionarily conserved pathway readout is
not established and, moreover, it is thought that PCP mediated cellular responses are
tissue-specific. A key PCP function in vertebrates is to regulate coordinated centriole/cilia
positioning, a function that has not been associated with PCP in Drosophila. Here we report
instructive input of Frizzled-PCP (Fz/PCP) signalling into polarized centriole positioning in
Drosophila wings. We show that centrioles are polarized in pupal wing cells as a readout of
PCP signalling, with both gain and loss-of-function Fz/PCP signalling affecting centriole
polarization. Importantly, loss or gain of centrioles does not affect Fz/PCP establishment,
implicating centriolar positioning as a conserved PCP-readout, likely downstream of
PCP-regulated actin polymerization. Together with vertebrate data, these results suggest a
unifying model of centriole/cilia positioning as a common downstream effect of PCP
signalling from flies to mammals.
2018-02-02T12:57:14Z
2018-02-02T12:57:14Z
2016
article
2041-1723
http://hdl.handle.net/10662/6922
Carvajal Gonzalez, J. M.; Román García, A C. y Mlodzik, M. (2016). Positioning of centrioles is a conserved readout of Frizzled planar cell polarity signalling. Nature communications, 7, 11135. ESSN 2041-1723
10.1038/ncomms11135
Nature communications
1
9
7, 11135
eng
https://www.nature.com/articles/ncomms11135
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
Natural Publishing Group
oai:dehesa.unex.es:10662/70872022-02-04T10:48:40Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
The characterization of Escherichia coli CpdB as a recombinantpProtein reveals that, besides having the expected 3´-nucleotidase and 2´,3´-cyclic mononucleotide phosphodiesterase activities, it is also active as cyclic dinucleotide phosphodiesterase
López Villamizar, Iralis Mercedes
Cabezas Martín, Alicia
Pinto Corraliza, Rosa María
Canales García, José
Ribeiro, João Nuno Meireles da Silva Gonçalves
Cameselle Viña, José Carlos
Costas Vázquez, María Jesús
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Escherichia coli BL21
Bacteria Gram-Negativo
Proteina fusión con GST
Electroforesis de proteinas desnaturalizantes
Gram-negative bacteria
GST fusion protein
Denaturing gel electrophoresis
Endogenous cyclic diadenylate phosphodiesterase activity was accidentally detected in lysates of Escherichia coli BL21. Since this kind of activity is uncommon in Gram-negative bacteria, its identification was undertaken. After partial purification and analysis by denaturing gel electrophoresis, renatured activity correlated with a protein identified by fingerprinting as CpdB (cpdB gene product), which is annotated as 3´-nucleotidase / 2´,3´- cyclicmononucleotide phosphodiesterase, and it is synthesized as a precursor protein with a signal sequence removable upon export to the periplasm. It has never been studied as a recombinant protein. The coding sequence of mature CpdB was cloned and expressed as a GST fusion protein. The study of the purified recombinant protein, separated from GST, confirmed CpdB annotation. The assay of catalytic efficiencies (kcat/Km) for a large substrate set revealed novel CpdB features, including very high efficiencies for 3´-AMP and 2´,3´- cyclic mononucleotides, and previously unknown activities on cyclic and linear dinucleotides. The catalytic efficiencies of the latter activities, though low in relative terms when compared to the major ones, are far from negligible. Actually, they are perfectly comparable to those of the ‘average’ enzyme and the known, bona fide cyclic dinucleotide phosphodiesterases. On the other hand, CpdB differs from these enzymes in its extracytoplasmic location and in the absence of EAL, HD and DHH domains. Instead, it contains the domains of the 5´-nucleotidase family pertaining to the metallophosphoesterase superfamily, although CpdB lacks 5´-nucleotidase activity. The possibility that the extracytoplasmic activity of CpdB on cyclic dinucleotides could have physiological meaning is discussed.
2018-03-06T09:41:36Z
2018-03-06T09:41:36Z
2016
article
1932-6203
http://hdl.handle.net/10662/7087
López Villamizar, I.; Cabezas Martín, A.; Pinto Corraliza, R. M.; Canales García, J.; Ribeiro, J. N. Meireles da Silva Gonçalves; Cameselle Viña, J. C. y Costas Vázquez, M. J. (2016). The characterization of Escherichia coli CpdB as a recombinantpProtein reveals that, besides having the expected 3´-nucleotidase and 2´,3´-cyclic mononucleotide phosphodiesterase activities, it is also active as cyclic dinucleotide phosphodiesterase. PLoS ONE, 11, 6, e0157308. ESSN 1932-6203
10.1371/journal.pone.0157308
PLoS ONE
6
1
22
11, e015308
eng
http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0157308
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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Public Library of Science
oai:dehesa.unex.es:10662/114542023-12-21T13:30:03Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
STIM1 deficiency is linked to Alzheimer’s disease and triggers cell death in SH-SY5Y cells by upregulation of L-type voltage-operated Ca2+ entry
Pascual Caro, Carlos
Berrocal Carrillo, María
López Guerrero, Aida María
Álvarez Barrientos, Alberto
Pozo Guisado, Eulalia
Gutiérrez Merino, Carlos
Mata Durán, Ana María
Martín Romero, Francisco Javier
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Enfermedad de Alzheimer
Calcio
CRISPR
STIM1
SH-SY5Y
VOCC
Alzheimer’s disease
Calcium
La STIM1 es una proteína del retículo endoplásmico con un papel en la movilización y señalización del Ca2+. Como sensor de los niveles intraluminales de Ca2+, STIM1 modula los canales de Ca2+ de la membrana plasmática para regular la entrada de Ca2+. En las células de neuroblastoma SH-SY5Y y en los fibroblastos cutáneos familiares de pacientes con la enfermedad de Alzheimer, STIM1 se divide en el dominio transmembrana por la presenilina-1-asociada a γ-secretase, lo que lleva a una desregulación de la homeostasis del Ca2+. En este informe, investigamos los niveles de expresión de STIM1 en los tejidos cerebrales (giro frontal medio) de pacientes con enfermedad de Alzheimer confirmada patológicamente, y observamos que el nivel de expresión de la proteína STIM1 disminuyó con la progresión de la neurodegeneración. Para estudiar el papel de STIM1 en la neurodegeneración, se diseñó una estrategia para eliminar la expresión del gen STIM1 en la línea de células de neuroblastoma SH-SY5Y mediante la edición del genoma mediado por CRISPR/Cas9, como un modelo in vitro para examinar el fenotipo de las células neuronales deficientes de STIM1. Se demostró que, si bien la STIM1 no es necesaria para la diferenciación de las células SH-SY5Y, es absolutamente esencial para la supervivencia de las células en la diferenciación. Las células STIM1-KO diferenciadas mostraron una disminución significativa de la actividad del complejo I de la cadena respiratoria mitocondrial, la despolarización de la membrana interna de la mitocondria, la reducción de la concentración de Ca2+ libre en la mitocondria y mayores niveles de senescencia en comparación con las células de tipo salvaje. En paralelo, las células STIM1-KO mostraron una entrada de Ca2+ potenciada en respuesta a la despolarización, que era sensible a la nifedipina, apuntando a los canales de Ca2+ operados por voltaje de tipo L como mediadores de la entrada de Ca2+ aumentada. El derribo estable de las transcripciones de CACNA1C restauró la función mitocondrial, aumentó los niveles mitocondriales de Ca2+ y redujo la senescencia a los niveles basales, demostrando el papel esencial de la regulación de la entrada de Ca2+ operada por voltaje a través de los canales Cav1.2 en la muerte celular deficiente de STIM1 SHSY5Y.
STIM1 is an endoplasmic reticulum protein with a role in Ca2+ mobilization and signaling. As a sensor of intraluminal Ca2+ levels, STIM1 modulates plasma membrane Ca2+ channels to regulate Ca2+ entry. In neuroblastoma SH-SY5Y cells and in familial Alzheimer’s disease patient skin fibroblasts, STIM1 is cleaved at the transmembrane domain by the presenilin-1-associated γ-secretase, leading to dysregulation of Ca2+ homeostasis. In this report, we investigated expression levels of STIM1 in brain tissues (medium frontal gyrus) of pathologically confirmed Alzheimer’s disease patients, and observed that STIM1 protein expression level decreased with the progression of neurodegeneration. To study the role of STIM1 in neurodegeneration, a strategy was designed to knock-out the expression of STIM1 gene in the SH-SY5Y neuroblastoma cell line by CRISPR/Cas9-mediated genome editing, as an in vitro model to examine the phenotype of STIM1-deficient neuronal cells. It was proved that, while STIM1 is not required for the differentiation of SH-SY5Y cells, it is absolutely essential for cell survival in differentiating cells. Differentiated STIM1-KO cells showed a significant decrease of mitochondrial respiratory chain complex I activity, mitochondrial inner membrane depolarization, reduced mitochondrial free Ca2+ concentration, and higher levels of senescence as compared with wild-type cells. In parallel, STIM1-KO cells showed a potentiated Ca2+ entry in response to depolarization, which was sensitive to nifedipine, pointing to L-type voltage-operated Ca2+ channels as mediators of the upregulated Ca2+ entry. The stable knocking-down of CACNA1C transcripts restored mitocondrial function, increased mitochondrial Ca2+ levels, and dropped senescence to basal levels, emonstrating the essential role of the upregulation of voltage-operated Ca2+ entry through Cav1.2 channels in STIM1-deficient SHSY5Y cell death.
2020-10-13T11:43:46Z
2020-10-13T11:43:46Z
2018
article
0946-2716
http://hdl.handle.net/10662/11454
Pascual-Caro, C., Berrocal, M., Lopez-Guerrero, A.M. et al. STIM1 deficiency is linked to Alzheimer’s disease and triggers cell death in SH-SY5Y cells by upregulation of L-type voltage-operated Ca2+ entry. J Mol Med 96, 1061–1079 (2018). https://doi.org/10.1007/s00109-018-1677-y
10.1007/s00109-019-01816-7-y
Journal of molecular medicine
10
1061
1071
96
1432-1440
eng
https://link.springer.com/article/10.1007/s00109-018-1677-y
https://doi.org/10.1007/s00109-018-1677-y
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Atribución 4.0 Internacional
Springer
oai:dehesa.unex.es:10662/145792023-05-25T13:39:53Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27com_10662_14577com_10662_11067col_10662_158col_10662_14586
Interactive effects of biotic stressors and provenance on chemical defence induction by holm oak (Quercus ilex)
Rodríguez Romero, Manuela
Gallardo Soler, Alejandro
Pérez, Andrea
Pulido, Fernando
Centro de Investigaciones Científicas y Tecnológicas de Extremadura (CICYTEX). Instituto del Corcho, la Madera y el Carbón Vegetal (ICMC)
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Instituto de Investigación de la Dehesa (INDEHESA)
Combined biotic stress
Oak decline
Phytophthora cinnamomi
Geographical variability
Herbivory
Induced chemical defences
Estrés biótico combinado
Deterioro del roble
Defensas químicas inducidas
Variabilidad geográfica
Herbivoría
Key Message The patterns of induced chemical defences in Quercus ilex leaves are specifc to the biotic stress factor that causes them. Interactive efects between stressors depend on provenance.
Abstract Quercus forests are sufering serious decline worldwide, closely linked to the consequences of climate change. The increase of biotic stressors threatens the survival of the holm oak (Quercus ilex), a dominant tree species in the Mediterranean Basin. A better understanding of its resistance mechanisms is urgently required to enable a better control of its decline. In this work, the ability of holm oaks from six Iberian provenances to respond to multiple biotic damage is studied through an analysis of their induced chemical defence patterns. Using 2016 seedlings established in a common garden trial (6 regions×12 families/region×7 seedlings/family×4 treatments), biotic damage was induced at the root level (by infection with the widespread pathogen Phytophthora cinnamomi) and at the above-ground level (by mechanical defoliation). The
levels of constitutive and induced total phenols, total tannins and condensed tannins were measured. Results showed that (1) the defensive chemical patterns present signifcant local and geographical variation, (2) survival to stress is more related to constitutive defences than induced ones, (3) the induced response is stressor-specifc, and (4) there is an interactive efect amongst stressors whose sign (induction/inhibition) depends on the provenance. These fndings on biotic stressor efects on the chemical defences and survival of holm oak can contribute to the development of genetic material selection programs in the integrated control of the widespread decline of Quercus.
2022-05-03T10:12:59Z
2022-05-03T10:12:59Z
2022
article
0931-1890
http://hdl.handle.net/10662/14579
Rodríguez-Romero, M., Gallardo, A., Pérez, A. et al. Interactive effects of biotic stressors and provenance on chemical defence induction by holm oak (Quercus ilex). Trees 36, 227–240 (2022). https://doi.org/10.1007/s00468-021-02201-z
10.1007/s00468-021-02201-z
Trees
36
227
240
1432-2285
eng
https://link.springer.com/article/10.1007/s00468-021-02201-z
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oai:dehesa.unex.es:10662/90102023-06-09T08:41:23Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Inhibitor of growth protein 4 interacts with Beclin 1 and represses autophagy
Sica, Valentina
Bravo San Pedro, José Manuel
Chen, Guo
Mariño García, Guillermo
Lachkar, Sylvie
Izzo, Valentina
Maiuri, Maria Chiara
Niso Santano, Mireia
Kroemer, Guido
Université Paris-Sorbonne (Paris I). France
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Université Pierre et Marie Curie. France
Universidad de Oviedo
Karolinska University Hospital. Sweden
Cáncer
ING4
PIK3C3
TP53
Autofagia
Cancer
Autophagy
Beclin 1 (BECN1) es una proteína multifuncional que activa la 3-quinasa de fosfatidilinositol proautofágica clase III (PIK3C3, mejor conocida como VPS34), pero también interactúa con múltiples reguladores negativos. Aquí informamos que BECN1 interactúa con el inhibidor del miembro de la familia de crecimiento 4 (ING4), una proteína supresora de tumores que es mejor conocida por su capacidad para interactuar con la proteína supresora de tumores p53 (TP53) y la proteína de unión a la acetiltransferasa E1A p300 (EP300). La eliminación de TP53 o EP300 no afectó la interacción BECN1 / ING4, que sin embargo se perdió en el cultivo de células en condiciones inductivas de autofagia y sin nutrientes. El agotamiento de ING4 estimuló la actividad enzimática de PIK3C3, como se visualizó por medio de un péptido corto marcado con proteína fluorescente roja (FYVE) que se une específicamente a la fosfatidilinositol-3-fosfato (PI3P) que contiene vesículas subcelulares y una autofagia mejorada, según lo indicado por un La lipidación mejorada de las proteínas asociadas a los microtúbulos 1A / 1B de cadena ligera 3 beta (LC3B) y la redistribución de una proteína de fusión verde-fluorescente (GFP) -LC3B a puntos puntuales citoplásmicos. La generación de puntos de GFP-LC3B estimulados por el agotamiento de ING4 se redujo por agotamiento simultáneo, o inhibición farmacológica, de PIK3C3 / VPS34. En conclusión, ING4 actúa como un regulador negativo de la actividad de la lipido quinasa del complejo BECN1 y como auto inducido por inanición.
Beclin 1 (BECN1) is a multifunctional protein that activates the proautophagic class III phosphatidylinositol 3-kinase (PIK3C3, best known as VPS34), yet also interacts with multiple negative regulators. Here we report that BECN1 interacts with inhibitor of growth family member 4 (ING4), a tumor suppressor protein that is best known for its capacity to interact with the tumor suppressor protein p53 (TP53) and the acetyltransferase E1A binding protein p300 (EP300). Removal of TP53 or EP300 did not affect the BECN1/ING4 interaction, which however was lost upon culture of cells in autophagy-inducing, nutrient free conditions. Depletion of ING4 stimulated the enzymatic activity of PIK3C3, as visualized by means of a red fluorescent protein-tagged short peptide (FYVE) that specifically binds to phosphatidylinositol-3-phosphate (PI3P)-containing subcellular vesicles and enhanced autophagy, as indicated by an enhanced lipidation of microtubule associated proteins 1A/1B light chain 3 beta (LC3B) and the redistribution of a green-fluorescent protein (GFP)-LC3B fusion protein to cytoplasmic puncta. The generation of GFP-LC3B puncta stimulated by ING4 depletion was reduced by simultaneous depletion, or pharmacological inhibition, of PIK3C3/VPS34. In conclusion, ING4 acts as a negative regulator of the lipid kinase activity of the BECN1 complex, and starvation-induced auto.
2019-03-25T11:37:34Z
2019-03-25T11:37:34Z
2017
article
1949-2553
http://hdl.handle.net/10662/9010
Sica, V.; Bravo San Pedro, J. M.; Chen, G.; Mariño García, G.; Lachkar, S.; Izzo, V.; Maiuri, M. C. [et al.] (2017). Inhibitor of growth protein 4 interacts with Beclin 1 and represses autophagy. Oncotarget, 8, 52, 89527-89538. ISSN 1949-2553
10.18632/oncotarget.19033
Oncotarget
52
89527
89538
8
0000-0002-5781-1133
eng
https://doi.org/10.18632/oncotarget.19033
http://www.oncotarget.com/index.php?journal=oncotarget&page=article&op=view&path[]=19033
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Attribution 4.0 International
Impact Journals
oai:dehesa.unex.es:10662/56182024-02-15T11:04:37Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27com_10662_77col_10662_158col_10662_301
Editorial on Cerebral endothelial and glial cells are more than bricks in the Great Wall of the brain: insights into the way the blood-brain barrier actually works (celebrating the centenary of Goldman's experiments)
García Martín, Elena
Barreto, George Emilio Sampaio
García-Agúndez Pérez-Coca, José Augusto
Guedes, Rubem Carlos Araujo
El-Bachá, Ramon dos Santos
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Pontificia Universidad Javeriana. Colombia
Universidad de Extremadura. Departamento de Terapéutica Médico-Quirúrgica
Universidade Federal de Pernambuco. Brasil
Universidade Federal da Bahia. Brasil
Barrera hematoencefálica
Células gliales
Células endoteliales cerebrales
Xenobiótico-metabolización de enzimas
Transportadores ABC
Respuesta del estrés oxidativo
Neuroinflamación
Blood-brain barrier
Glial cells
Cerebral endothelial cells
Xenobiotic-metabolizing enzymes
ABC transporters
Oxidative stress response
Neuroinflammation
Carta editorial a la revista Frontiers in cellular neuroscience sobre las células endoteliales cerebrales y gliales. Se analiza la manera en que la barrera sangre-cerebro realmente funciona.
Editorial letter to Frontiers in cellular neuroscience on cerebral endothelial and glial cells. It looks at how the blood-brain barrier actually works.
2017-04-26T11:34:04Z
2017-04-26T11:34:04Z
2015
other
1662-5102
http://hdl.handle.net/10662/5618
García Martín, M. E.; Barreto,G. E. Sampaio; Agúndez, J. A. G.; Guedes, R. C. Araujo y El-Bachá, R. dos Santos. (2015). Editorial on Cerebral endothelial and glial cells are more than bricks in the Great Wall of the brain: insights into the way the blood-brain barrier actually works (celebrating the centenary of Goldman's experiments). Frontiers in cellular neuroscience, 9, nº 128. ESSN 1662-5102
10.3389/fncel.2015.00128
Frontiers in cellular neuroscience
128, 1
128, 3
9
eng
http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fncel.2015.00128/full
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Atribución-NoComercial-CompartirIgual 3.0 España
Frontiers Media
oai:dehesa.unex.es:10662/56382023-08-24T11:03:53Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Genome, proteome and structure of a T7-like bacteriophage of the kiwifruit canker phytopathogen pseudomonas syringae pv. actinidiae
Frampton, Rebekah A.
López Acedo, Elena
Young, Vivienne L.
Chen, Danni
Tong, Brian
Taylor, Corinda
Easingwood, Richard A.
Pitman, Andrew R.
Kleffmann, Torsten
Bostina, Mihnea
Fineran, Peter C.
University of Otago. New Zealand
Institute for Plant and Food Research. New Zealand
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Agente de biocontrol
Kiwis
Aftas
Pseudomonas syringae pv. actinidiae
Bacteriófago
Criomicroscopía electrónica
Reconstrucción de partículas
Genómica
Proteómica
vB_PsyP_phiPsa17
Biocontrol agent
Kiwifruit
Canker
Bacteriophage
Cryo-electron microscopy
Single particle reconstruction
Genomics
Proteomics
La pseudomonas syringae pv. actinidiae es un patógeno responsable significativo de la afta bacteriana severa del kiwi (Actinidia sp.). Los bacteriófagos infectados de este fitopatógeno tienen potencial como agentes de control biológico como parte de un enfoque integrado de la gestión del cancro bacteriano, y para su uso como herramientas molecular para el estudio de esta bacteria. Una variedad de bacteriófagos fueron previamente aislados, antes de ser infectados con P. syringae pv. Actinidiae; y sus propiedades básicas fueron caracterizadas para proporcionar un marco para la formulación de estos fagos, como agentes de biocontrol. Aquí, hemos examinado con más detalle el φPsa17, un fago con la capacidad de infectar a una amplia gama de cepas P. syringae pv. Actinidiae, único miembro de la Podoviridae en esta colección. La morfología de partículas fue visualizada mediante criomicroscopía electrónica, el genoma fue secuenciado, y sus proteínas estructurales fueron analizados usando shotgun proteomics. Estos estudios demostraron que 40,525 φPsa17 tiene un genoma de BP, es un miembro de género T7likevirus y está estrechamente relacionada con la pseudomonada llamada fágicas φPSA2 y GH-1. Once proteínas estructurales (andamios) fueron detectados por la proteómica y φPsa17 tiene una cápside de aproximadamente 60 nm de diámetro. No fueron identificados genes indicativos de un ciclo de vida lisogénica, sugiriendo que el fago es necesariamente lítico. Estas características indican que φPsa17 pueden ser adecuadas para la formulación como un agente de biocontrol de P. syringae pv. actinidiae
Pseudomonas syringae pv. actinidiae is an economically significant pathogen responsible for severe bacterial canker of kiwifruit (Actinidia sp.). Bacteriophages infecting this phytopathogen have potential as biocontrol agents as part of an integrated approach to the management of bacterial canker, and for use as molecular tools to study this bacterium. A variety of bacteriophages were previously isolated that infect P. syringae pv. actinidiae, and their basic properties were characterized to provide a framework for formulation of these phages as biocontrol agents. Here, we have examined in more detail φPsa17, a phage with the capacity to infect a broad range of P. syringae pv. actinidiae strains and the only member of the Podoviridae in this collection. Particle morphology was visualized using cryo-electron microscopy, the genome was sequenced, and its structural proteins were analysed using shotgun proteomics. These studies demonstrated that φPsa17 has a 40,525 bp genome, is a member of the T7likevirus genus and is closely related to the pseudomonad phages φPSA2 and gh-1. Eleven structural proteins (one scaffolding) were detected by proteomics and φPsa17 has a capsid of approximately 60 nm in diameter. No genes indicative of a lysogenic lifecycle were identified, suggesting the phage is obligately lytic. These features indicate that φPsa17 may be suitable for formulation as a biocontrol agent of P. syringae pv. actinidiae
2017-05-05T11:07:06Z
2017-05-05T11:07:06Z
2015
article
1999-4915
http://hdl.handle.net/10662/5638
Frampton, R. A.; López Acedo, E.; Young, V. L.; Chen, D.; Tong, B.; Taylor, C. y Easingwood, R. S. et al. (2015). Genome, proteome and structure of a T7-like bacteriophage of the kiwifruit canker phytopathogen pseudomonas syringae pv. actinidiae. Viruses, 7, 7, 3361-3379. ESSN 1999-4915
10.3390/v7072776
Viruses
7
3361
3379
7
eng
http://www.mdpi.com/1999-4915/7/7/2776
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/es/
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Atribución-NoComercial-CompartirIgual 3.0 España
MDPI
oai:dehesa.unex.es:10662/84442023-02-09T09:12:09Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Genome comparison of erythromycin resistant campylobacter from Turkeys identifies hosts and pathways for horizontal spread of erm(B) genes
Flórez Cuadrado, Diego
Ugarte Ruiz, María
Méric, Guillaume
Quesada Molina, Alberto
Porrero Calonge, María Concepción
Pascoe, Ben
Sáez Llorente, José Luis
López Orozco, Gema
Domínguez Rodríguez, Lucas
Sheppard, Samuel K.
Universidad Complutense de Madrid
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Eritromicina
Antimicrobiano
Transmisión
Turquía
Campylobacter
Erythromycin
Erm (B)
Antimicrobial
Transmission
Turkey
Los patógenos en el género Campylobacter son la causa más común de gastroenteritis bacteriana transmitida por los alimentos. La campilobacteriosis, causada principalmente por Campylobacter jejuni y Campylobacter coli, se transmite a los humanos mediante alimentos de origen animal, especialmente aves de corral. En cuanto a muchos patógenos, la resistencia antimicrobiana en Campylobacter está aumentando a un ritmo alarmante. La prescripción de eritromicina es el tratamiento de elección para los casos clínicos que requieren terapia antimicrobiana, pero esto se ve comprometido por la movilidad del gen de resistencia a la eritromicina erm (B) entre las cepas. Aquí, evaluamos la resistencia a seis antimicrobianos en 170 aislados de Campylobacter (133 C. coli y 37 C. jejuni) de pavos. Los aislados resistentes a la eritromicina (n = 85; 81 C. coli y 4 C. jejuni) se examinaron en busca de la presencia del gen erm (B), que no se ha identificado previamente en aislamientos de pavos. Se secuenciaron los genomas de dos aislamientos positivos de C. coli y en ambos aislamientos el gen erm (B) se agrupó con determinantes de resistencia contra aminoglucósidos más tetraciclina, incluidos aad9, aadE, aph (2 ") - IIIa, aph (3 ') - IIIa , y genes tet (O). El análisis genómico comparativo identificó secuencias erm (B) idénticas entre Campylobacter de pavos, Streptococcus suis de cerdos y Enterococcus faecium y Clostridium difficile de humanos. Esto es consistente con múltiples eventos de transferencia horizontal entre diferentes especies de bacterias que colonizan pavos. Este ejemplo destaca el potencial de diseminación de la resistencia antimicrobiana a través de los límites de las especies bacterianas que pueden comprometer su efectividad en la terapia antimicrobiana.
Pathogens in the genus Campylobacter are the most common cause of food-borne bacterial gastro-enteritis. Campylobacteriosis, caused principally by Campylobacter jejuni and Campylobacter coli, is transmitted to humans by food of animal origin, especially poultry. As for many pathogens, antimicrobial resistance in Campylobacter is increasing at an alarming rate. Erythromycin prescription is the treatment of choice for clinical cases requiring antimicrobial therapy but this is compromised by mobility of the erythromycin resistance gene erm(B) between strains. Here, we evaluate resistance to six antimicrobials in 170 Campylobacter isolates (133 C. coli and 37 C. jejuni) from turkeys. Erythromycin resistant isolates (n = 85; 81 C. coli and 4 C. jejuni) were screened for the presence of the erm(B) gene, that has not previously been identified in isolates from turkeys. The genomes of two positive C. coli isolates were sequenced and in both isolates the erm(B) gene clustered with resistance determinants against aminoglycosides plus tetracycline, including aad9, aadE, aph(2″)-IIIa, aph(3′)-IIIa, and tet(O) genes. Comparative genomic analysis identified identical erm(B) sequences among Campylobacter from turkeys, Streptococcus suis from pigs and Enterococcus faecium and Clostridium difficile from humans. This is consistent with multiple horizontal transfer events among different bacterial species colonizing turkeys. This example highlights the potential for dissemination of antimicrobial resistance across bacterial species boundaries which may compromise their effectiveness in antimicrobial therapy.
2019-01-09T12:56:17Z
2019-01-09T12:56:17Z
2017
article
1664-302X
http://hdl.handle.net/10662/8444
Flórez Cuadrado, D.; Ugarte Ruiz, M.; Méric, G.; Quesada Molina, A.; Porrero Calonge, M. C.; Pascoe, B.; Sáez Llorente, J. L. [et al.] (2017). Genome comparison of erythromycin resistant campylobacter from Turkeys identifies hosts and pathways for horizontal spread of erm(B) genes. Frontiers microbiology, 8, 2240. ISSN 1664-302X
10.3389/fmicb.2017.02240
Frontiers microbiology
1
8
8, 2240
eng
https://doi.org/10.3389/fmicb.2017.02240
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2017.02240/full#supplementary-material
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Attribution 4.0 International
Frontiers Media
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HSP90 maintains boar spermatozoa motility and mitochondrial membrane potential during heat stress
Calle Guisado, Violeta
Bragado González, María Julia
García Marín, Luis Jesús
González Fernández, Lauro
Universidad de Extremadura. Grupo de investigación "Señalización Intracelular y Tecnología de la Reproducción" (SINTREP)
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Extremadura. Departamento de Fisiología
Jabalí
Espermatozoides
Motilidad
HSP90
Estrés térmico
Boar
Spermatozoa
Motility
Heat stress
Proteínas de choque térmico (HSP)
Heat Shock Proteins (HSP)
Publicado en: Animal Reproduction Science 187 (2017) 13–19 https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2017.09.009
Heat Shock Proteins (HSP) is a family of proteins that protects cells from high temperatures. The present work aimed to elucidate the role that HSP90 exerts on boar sperm incubated under heat stress conditions on viability, total motility (TM), progressive motility (PM), acrosome status, mitochondrial membrane potential and plasma membrane lipid organization. Sperm were incubated in non-capacitating conditions (Tyrode’s basal medium or TBM) for 3, 8 and 24 h or in capacitating conditions (Tyrode’s complete medium or TCM) for 4 h at 38.5 °C or 40 °C (Heat stress) in the presence or absence of 5 or 20 μM of 17-AAG, a specific HSP90 inhibitor. Sperm viability was not affected by the presence of 17-AAG in any condition tested compared with its own control (at the same temperature and incubation time). In non-capacitating conditions TM (22.7 ± 4.1 vs. 1.9 ± 1.1; % mean ± SEM), PM (3.1 ± 0.9 vs. 0) and high mitochondrial membrane potential (19.5 ± 2.2 vs. 11.8 ± 0.8) decreased significantly in sperm incubated at 40 °C for 24 h in the presence of 20 μM 17-AAG (control vs. 20 μM 17-AAG, respectively; p < 0.05). In sperm incubated at 38.5 °C only a mild decrease in TM was observed (48.7 ± 3.1 vs. 32.1 ± 4.8; control vs. 20 μM 17-AAG, respectively; p < 0.05). However, under capacitating conditions none of the sperm parameters studied were affected by 17-AAG after 4 h of incubation. These results demonstrate for the first time the role of HSP90 in the maintenance of boar sperm motility and mitochondrial membrane potential during prolonged heat stress in non-capacitating conditions.
2017-12-29T10:41:35Z
2017-12-29T10:41:35Z
2017-12-29
article
0378-4320
http://hdl.handle.net/10662/6748
10.1016/j.anireprosci.2017.09.009
Animal Reproduction Science
13
19
187
eng
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0378432017304827?via%3Dihub
https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2017.09.009
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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Biding of Amiylod β (1-42)-Calmodulin Complexes to Plasma Membrane Lipid Rafts in Cerebellar Granule Neurons Alters Resting Cytosolic Calcium Homeostasis
Poejo, Joana Margarida de Andrade
Salazar Casco, Jairo
Mata Durán, Ana María
Gutiérrez Merino, Carlos
N/A
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Amiloide (1-42)
Calmodulina
Balsas lipídicas
Neuronas del gránulo cerebeloso
Homeostasis del calcio citosólico
Canales de calcio de tipo L
Amyloid (1–42)
Calmodulin
Lipid rafts
Cerebellar granule neurons
Cytosolic calcium homeostasis
L-type calcium channels
Las balsas lipídicas son un objetivo primario en los estudios sobre la citotoxicidad del β amiloide (Aβ) en las neuronas. Los péptidos Aβ exógenos se unen a las balsas lipídicas, que a su vez desempeñan un papel clave en la captación de Aβ, lo que conduce a la formación de agregados Aβ intracelulares neurotóxicos. Por otra parte, en la enfermedad de Alzheimer (EA) se ha observado una desregulación de la homeostasis del calcio intracelular en las neuronas. En un trabajo previo, demostramos que A β(1-42), el péptido A prevalente encontrado en las placas amiloides de pacientes con EA, se une con alta afinidad a la calmodulina (CaM) purificada, con una constante de disociación 1 μM. En este trabajo, para evaluar experimentalmente la capacidad de unión de Aβ (1-42) a CaM intracelular, utilizamos cultivos primarios de neuronas granulares cerebelosas maduras (CGN) como modelo neuronal. Nuestros resultados mostraron una gran complejación de concentraciones submicromolares de dímeros de Aβ (1-42) por CaM en CGN, hasta 120 13 picomoles de Aβ (1-42) / 2,5 106 células. Utilizando imágenes de microscopía de fluorescencia, mostramos una extensa co-localización de CaM y Aβ (1-42) en balsas lipídicas en CGN teñidas con hasta 100 picomoles de monómeros de Aβ (1-42)-HiLyteTM-Fluor555. Este tratamiento redujo el calcio citosólico en reposo de la CGN madura en un medio parcialmente despolarizante de 25 μM de potasio. We conclude that the main cause of the decrease in resting cytosolic calcium is the inhibition of CGN L-type calcium channels by Aβ (1-42) dimers, whose activity is inhibited β.
Lipid rafts are a primary target in studies of β amyloid (Aβ) cytotoxicity in neurons. Exogenous A peptides β bind to lipid rafts, which in turn play a key role in A uptake, leading to the formation of neurotoxic intracellular A aggregates. On the other hand, dysregulation of intracellular calcium homeostasis in neurons has been observed in Alzheimer’s disease (AD). In a previous work, we showed that Aβ (1–42), the prevalent Aβ peptide found in the amyloid plaques of AD patients, binds with high affinity to purified calmodulin (CaM), with a dissociation constant 1 μM. In this work, to experimentally assess the Aβ (1–42) binding capacity to intracellular CaM, we used primary cultures of mature cerebellar granule neurons (CGN) as a neuronal model. Our results showed a large complexation of submicromolar concentrations of Aβ (1–42) dimers by CaM in CGN, up to 120 13 picomoles of Aβ (1–42) / 2.5 106 cells. Using fluorescence microscopy imaging, we showed an extensive co-localization of CaM and Aβ (1–42) in lipid rafts in CGN stained with up to 100 picomoles of Aβ (1–42)-HiLyteTM-Fluor555 monomers. Intracellular Aβ (1–42) concentration in this range was achieved by 2 h incubation of CGN with 2 M Aβ (1–42), and this treatment lowered the resting cytosolic calcium of mature CGN in partially depolarizing 25 μM potassium medium. We conclude that the primary cause of the resting cytosolic calcium decrease is the inhibition of L-type calcium channels of CGN by Aβ (1–42) dimers, whose activity is inhibited by CaM: Aβ (1–42) complexes bound to lipid rafts.
2023-12-22T13:44:40Z
2023-12-22T13:44:40Z
2021
article
http://hdl.handle.net/10662/19061
Poejo J, Salazar J, Mata AM, Gutierrez-Merino C. (2021). Binding of Amyloid β(1–42)-Calmodulin Complexes to Plasma Membrane Lipid Rafts in Cerebellar Granule Neurons Alters Resting Cytosolic Calcium Homeostasis. International Journal of Molecular Sciences; 22(4):1984. https://doi.org/10.3390/ijms22041984
10.3390/ijms22041984
International Journal of Molecular Sciences
4
1984-1
1984-27
22
1422-0067
0000-0001-8740-1074
0000-0002-2887-7854
0000-0003-3673-7007
eng
https://www.mdpi.com/1422-0067/22/4/1984
https://doi.org/10.3390/ijms22041984
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Attribution 4.0 International
MDPI
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Acetylome in human fibroblasts from Parkinson's disease patients
Yakhine-Diop, Sokhna M. S.
Rodríguez Arribas, Mario
Martínez Chacón, Guadalupe
Uribe Carretero, Elisabet
Gómez Sánchez, Rubén
Aiastui Pujana, Ana
López de Munain, Adolfo
Bravo San Pedro, José Manuel
Niso Santano, Mireia
González Polo, Rosa Ana
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Centro de Investigación Biomédica en Red en Enfermedades Neurodegenerativas. Madrid
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
University Medical Center Groningen. Netherlands
Universidad del País Vasco/Euskal Herriko Unibertsitatea (UPV/EHU)
Université Paris-Sorbonne (Paris V). France
Université Pierre et Marie Curie. France
Acetilación
LRRK2
Péptidos
Enfermedad de Parkinson
Proteinas
Acetylation
Peptides
Parkinson
Proteins
La enfermedad de Parkinson (EP) es un trastorno neurodegenerativo multifactorial. La patogénesis de esta enfermedad está asociada a factores genéticos y ambientales. Las mutaciones en la quinasa 2 repetida rica en leucina (LRRK2) son la causa genética más frecuente de la EP familiar y esporádica. Además, las modificaciones postraduccionales, incluida la acetilación de proteínas, están implicadas en el mecanismo molecular de la EP. La acetilación de las proteínas de lisina es un proceso dinámico que se modula en la EP. En este estudio descriptivo, caracterizamos las proteínas y péptidos acetilados en los fibroblastos primarios de la EP idiopática (IPD) y la EP genética que alberga mutaciones G2019S o R1441G LRRK2. Los péptidos acetilados identificados se modulan entre grupos de individuos. Aunque las proteínas nucleares acetiladas son las más representadas en las células, están hipoacetiladas en la IPD. Los resultados muestran que el nivel de péptidos hiperacetilados e hipoacetilados están, respectivamente, aumentados en la EP genética y en las células de la EPD.
Parkinson’s disease (PD) is amultifactorial neurodegenerative disorder. The pathogenesis of this disease is associated with gene and environmental factors. Mutations in leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) are the most frequent genetic cause of familial and sporadic PD. Moreover, posttranslational modifications, including protein acetylation, are involved in the molecular mechanism of PD. Acetylation of lysine proteins is a dynamic process that ismodulated in PD. In this descriptive study, we characterized the acetylated proteins and peptides in primary fibroblasts from idiopathic PD (IPD) and genetic PD harboring G2019S or R1441G LRRK2 mutations. Identified acetylated peptides are modulated between individuals’ groups. Although acetylated nuclear proteins are the most represented in cells, they are hypoacetylated in IPD. Results display that the level of hyperacetylated and hypoacetylated peptides are, respectively, enhanced in genetic PD and in IPD cells.
2020-07-29T10:26:58Z
2020-07-29T10:26:58Z
2018
article
1662-5102
http://hdl.handle.net/10662/11137
Yakhine-Diop SMS, Rodríguez-Arribas M, Martínez-Chacón G, Uribe-Carretero E, Gómez-Sánchez R, Aiastui A, López de Munain A, Bravo-San Pedro JM, Niso-Santano M, González-Polo RA and Fuentes JM (2018) Acetylome in Human Fibroblasts From Parkinson’s Disease Patients. Front. Cell. Neurosci. 12:97. doi: 10.3389/fncel.2018.00097
10.3389/fncel.2018.00097
Frontiers in cellular neuroscience
1
8
12, 97
0000-0002-5781-1133
eng
https://doi.org/10.3389/fncel.2018.00097
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fncel.2018.00097/full
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Atribución 4.0 Internacional
Frontiers Media
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Gold Compounds Inhibit the Ca2+-ATPase Activity of Brain PMCA and Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells and Decrease Cell Viability
Berrocal Carrillo, María
Cordoba Granados, Juan José
Carabineiro, Sónia Alexandra Correia
Gutiérrez Merino, Carlos
Aureliano Alves, Manuel
Mata Durán, Ana María
N/A
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Compuestos de oro
PMCA
Ca2+-ATPasa
Homeostasis del calcio
Células de neuroblastoma humano SH-SY5Y
Gold compounds
Ca2+-ATPase
Calcium homeostasis
SH-SY5Y human neuroblastoma cells
Las ATPasas de calcio de membrana plasmática (PMCA) son proteínas clave en el mantenimiento de la homeostasis del calcio (Ca2+). La desregulación de la función de las PMCA está asociada a varias patologías humanas, como las enfermedades neurodegenerativas, por lo que estas proteínas son posibles dianas farmacológicas para contrarrestarlas. Los compuestos de oro, concretamente de Au(I), son bien conocidos por su terapéuticos en la artritis reumatoide y otras enfermedades. En este trabajo se describe la capacidad de dicloro(2-piridinocarboxilato) oro(III) (1), clorotrimetilfosfinoro(I) (2), 1,3-bis(2,6- diisopropilfenil)imidazol-2-ilidencloruro de oro(I) (3), y clorotrifenilfosfinegold(I) (4) para interferir con la actividad Ca2+-ATPasa de la PMCA purificada de cerebro de cerdo y con membranas de cultivos celulares de neuroblastoma SH-SY5Y. El compuesto de Au(III) (1) inhibe la actividad de la PMCA con un valor IC50 de 4,9 M, mientras que los compuestos de Au(I) (2, 3 y 4) inhiben la actividad de la proteína con valores IC50 de 2,8, 21 y 0,9 M, respectivamente. Con respecto al sustrato nativo MgATP, los compuestos de oro 1 y 4 mostraron una inhibición de tipo no competitivo, mientras que los compuestos 2 y 3 mostraron una inhibición de tipo mixto. Todos los complejos de oro mostraron efectos citotóxicos en células de neuroblastoma humano SHSY5Y aunque los compuestos 1 y 3 fueron más citotóxicos que los compuestos 2 y 4. En resumen, este trabajo demuestra que ambos compuestos de Au (I y III) son inhibidores de alta afinidad de la actividad Ca2+-ATPasa en fracciones purificadas de PMCA y en membranas de células de neuroblastoma humano SH-SY5Y. Además, ejercen fuertes efectos citotóxicos.
Plasma membrane calcium ATPases (PMCA) are key proteins in the maintenance of calcium (Ca2+) homeostasis. Dysregulation of PMCA function is associated with several human pathologies, including neurodegenerative diseases, and, therefore, these proteins are potential drug targets to counteract those diseases. Gold compounds, namely of Au(I), are well-known for their therapeutic use in rheumatoid arthritis and other diseases for centuries. Herein, we report the ability of dichloro(2-pyridinecarboxylate)gold(III) (1), chlorotrimethylphosphinegold(I) (2), 1,3-bis(2,6-diisopropylphenyl)imidazol-2-ylidenegold(I) chloride (3), and chlorotriphenylphosphinegold(I) (4) compounds to interfere with the Ca2+-ATPase activity of pig brain purified PMCA and with membranes from SH-SY5Y neuroblastoma cell cultures. The Au(III) compound (1) inhibits PMCA activity with the IC50 value of 4.9 M, while Au(I) compounds (2, 3, and 4) inhibit the protein activity with IC50 values of 2.8, 21, and 0.9 M, respectively. Regarding the native substrate MgATP, gold compounds 1 and 4 showed a non-competitive type of inhibition, whereas compounds 2 and 3 showed a mixed type of inhibition. All gold complexes showed cytotoxic effects on human neuroblastoma SHSY5Y cells, although compounds 1 and 3 were more cytotoxic than compounds 2 and 4. In summary, this work shows that both Au (I and III) compounds are high-affinity inhibitors of the Ca2+-ATPase activity in purified PMCA fractions and in membranes from SH-SY5Y human neuroblastoma cells. Additionally, they exert strong cytotoxic effects.
2023-12-22T11:17:02Z
2023-12-22T11:17:02Z
2021
article
http://hdl.handle.net/10662/19055
Berrocal M, Cordoba-Granados JJ, Carabineiro SAC, Gutierrez-Merino C, Aureliano M, Mata AM. (2021).Gold Compounds Inhibit the Ca2+-ATPase Activity of Brain PMCA and Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells and Decrease Cell Viability. Metals; 11(12):1934. https://doi.org/10.3390/met11121934
10.3390/met11121934
Metals
12
1934-1
1934-14
11
2075-4701
0000-0003-0684-3853
0000-0003-3673-7007
0000-0003-4858-3201
0000-0002-2887-7854
eng
https://doi.org/10.3390/met11121934
https://www.mdpi.com/2075-4701/11/12/1934
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Attribution 4.0 International
MDPI
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Thymineless death, at the origin
Guzmán Cabañas, María Elena
Mata Martín, María Carmen
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
TLD
Replicación
Iniciación
OriC
Rifampicina
DSBs
2DgelDNA
Replicationfork
Initiation
Rifampicin
La muerte Thymineless (TLD) en bacterias ha sido un foco de investigación durante décadas. Sin embargo, los avances en los últimos 5 años, con Escherichia coli como organismo modelo, han sido sobresalientes. Grupos de investigación independientes han presentado resultados convincentes que establecen que el inicio de la replicación cromosómica en timina inanición es un elemento clave en el escenario de TLD. Aquí revisamos los resultados experimentales que une el inicio de la replicación en la letalidad en timina la inanición y la propuesta de mecanismos mediante los cuales se produce la DTL. El concepto de esta relación era "en el aire", pero los enfoques no estaban suficientemente desarrollados para demostrar el papel crucial del ADN iniciación en el TLD. Marcador de genómica y análisis de frecuencias bidimensional de electroforesis en gel de agarosa han sido críticos de los métodos empleados para revelar que la iniciación de eventos y la degradación de los oriC región ocurren durante una timina de inanición. Las relaciones entre estos eventos y TLD han establecido que son las principales causas subyacentes de la letalidad en timina inanición. Además, se resumen otros hallazgos importantes del estudio de diferentes cepas mutantes que apoyan la idea de que el inicio de la replicación cromosómica y TLD están conectados.
Thymineless death (TLD) in bacteria has been a focus of research for decades. Nevertheless, the advances in the last 5 years, with Escherichia coli as the model organism, have been outstanding. Independent research groups have presented compelling results that establish that the initiation of chromosome replication under thymine starvation is a key element in the scenario of TLD. Here we review the experimental results linking the initiation of replication to the lethality under thymine starvation and the proposed mechanisms by which TLD occurs. The concept of this relationship was ‘in the air,’ but approaches were not sufficiently developed to demonstrate the crucial role of DNA initiation in TLD. Genome-wide marker frequency analysis and Two Dimensional agarose gel electrophoresis have been critical methods employed to reveal that initiation events and the degradation of the oriC region occur during thymine starvation. The relationships between these events and TLD have established them to be the main underlying causes of the lethality under thymine starvation. Furthermore, we summarize additional important findings from the study of different mutant strains, which support the idea that the initiation of chromosomal replication and TLD are connected.
2017-03-14T13:41:27Z
2017-03-14T13:41:27Z
2015
article
1664-302X
http://hdl.handle.net/10662/5444
Guzmán Cabañas, M. E. y Mata Martín, M. C. (2015). Thymineless death, at the origin. Frontiers in microbiology, 6, 499, May 19 2015. ESSN 1664-302X
10.3389/fmicb.2015.00499
Frontiers in microbiology
499, 1
499, 7
6
eng
http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fmicb.2015.00499/full
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/es/
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Atribución-NoComercial-CompartirIgual 3.0 España
Frontiers Media
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Sorcin Activates the Brain PMCA and Blocks the Inhibitory Effects of Molecular Markers of Alzheimer’s Disease on the Pump Activity
Berrocal Carrillo, María
Saez Mansilla, Lucía
Mata Durán, Ana María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Sorcina
Ca2+-ATPasa de membrana plasmática (PMCA)
Amiloide-β pétido
Tau
Modulación funcional
Neurodegeneración
Sorcin
Plasma membrane Ca2+-ATPase (PMCA)
Amyloid-β
Peptide
Functional modulation
Neurodegeneration
Dado que la desregulación de los niveles de calcio (Ca2+) intracelular es un fenómeno común en enfermedades neurodegenerativas, incluida la enfermedad de Alzheimer (EA), el estudio de proteínas que puedan corregir la desregulación neuronal de Ca2+ es de gran interés. En trabajos anteriores, hemos demostrado que membrana plasmática Ca2+-ATPasa (PMCA), una bomba de Ca2+ de alta afinidad, está funcionalmente alterada en la péptido amiloide β (Aβ) y tau, dos componentes clave de las características patológicas de la EA. patológicos de la EA. Por otra parte, la sorcina es una proteína de unión al Ca2+ altamente expresada en el cerebro, aunque su mecanismo de acción dista mucho de estar claro. Se ha demostrado que la sorcina interactúa con el sarco(endo)plasmic reticulum Ca2+-ATPase (SERCA) y otros moduladores de la señalización intracelular del Ca2 intracelular, como el receptor de rianodina o la presenilina 2, estrechamente asociada a la EA. El presente trabajo se centra en la sorcina en busca de nuevos reguladores de la PMCA y antagonistas de la toxicidad de A y tau toxicidad. Los resultados muestran a la sorcina como un activador de la PMCA, que además previene los efectos inhibidores de Aβ y tau sobre la bomba, y contrarresta la neurotoxicidad de Aβ y tau interactuando con ellos.
Since dysregulation of intracellular calcium (Ca2+) levels is a common occurrence in neurodegenerative diseases, including Alzheimer’s disease (AD), the study of proteins that can correct neuronal Ca2+ dysregulation is of great interest. In previous work, we have shown that plasma membrane Ca2+-ATPase (PMCA), a high-affinity Ca2+ pump, is functionally impaired in AD and is inhibited by amyloid-β peptide (Aβ) and tau, two key components of pathological AD hallmarks. On the other hand, sorcin is a Ca2+-binding protein highly expressed in the brain, although its mechanism of action is far from being clear. Sorcin has been shown to interact with the intracellular sarco(endo)plasmic reticulum Ca2+-ATPase (SERCA), and other modulators of intracellular Ca2+ signaling, such as the ryanodine receptor or presenilin 2, which is closely associated with AD. The present work focuses on sorcin in search of new regulators of PMCA and antagonists of A and tau toxicity. Results show sorcin as an activator of PMCA, which also prevents the inhibitory effects of Aβ and tau on the pump, and counteracts the neurotoxicity of Aβ and tau by interacting with them.
2023-12-21T13:48:44Z
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2021
article
http://hdl.handle.net/10662/19053
Berrocal M, Saez L, Mata AM. (2021). Sorcin Activates the Brain PMCA and Blocks the Inhibitory Effects of Molecular Markers of Alzheimer’s Disease on the Pump Activity. International Journal of Molecular Sciences; 22(11):6055. https://doi.org/10.3390/ijms22116055
10.3390/ijms22116055
International Journal of Molecular Sciences
11
6055-1
6055-22
22
1422-0067
0000-0002-2887-7854
0000-0003-0684-3853
eng
https://doi.org/10.3390/ijms22116055
https://www.mdpi.com/1422-0067/22/11/6055
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Attribution 4.0 International
MDPI
oai:dehesa.unex.es:10662/71432024-03-20T12:08:37Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
PiRNA-associated proteins and retrotransposons are differentially expressed in murine testis and ovary of aryl hydrocarbon receptor deficient mice
Rico Leo, Eva María
Moreno Marín, Nuria
González Rico, Francisco Javier
Barrasa Ardila, Eva María
Ortega Ferrusola, Cristina
Martín Muñoz, Patricia
Sánchez Guardado, Luis Óscar
Llano Cuadro, Elena
Álvarez Barrientos, Alberto
Infante Campos, Ascensión
Catalina Fernández, Inmaculada
Hidalgo Sánchez, Matías
Rooij, Dirk G. de
Pendás, Alberto M.
Peña Vega, Fernando Juan
Merino Fernández, Jaime María
Fernández Salguero, Pedro María
Universidad de Extremadura. Hospital Clínico Veterinario
Universidad de Extremadura. Departamento de Anatomía, Biología Celular y Zoología
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Universidad de Salamanca
Hospital Universitario Infanta Cristina. Badajoz
Rijksuniversiteit te Utrecht. The Netherlands
Receptor de hidrocarburos aril
Proteínas de Nuage
Espermatogénesis
Ovario
Fertilidad
Elementos repetitivos
Aryl hydrocarbon receptor
Nuage proteins
Spermatogenesis
Ovary
Fertility
Repetitive elements
Previous studies suggested that the aryl hydrocarbon receptor (AhR) contributes to mice reproduction and fertility. However, the mechanisms involved remain mostly unknown. Retrotransposon silencing by Piwi-interacting RNAs (piRNAs) is essential for germ cell maturation and, remarkably, AhR has been identified as a regulator of murine B1-SINE retrotransposons. Here, using littermate AhR+/+ and AhR-/- mice, we report that AhR regulates the general course of spermatogenesis and oogenesis by a mechanism likely to be associated with piRNA-associated proteins, piRNAs and retrotransposons. piRNA-associated proteins MVH and Miwi are upregulated in leptotene to pachytene spermatocytes with a more precocious timing in AhR-/- than in AhR+/+ testes. piRNAs and transcripts from B1-SINE, LINE-1 and IAP retrotransposons increased at these meiotic stages in AhR-null testes. Moreover, B1-SINE transcripts colocalize with MVH and Miwi in leptonema and pachynema spermatocytes. Unexpectedly, AhR-/- males have increased sperm counts, higher sperm functionality and enhanced fertility than AhR+/+ mice. In contrast, piRNA-associated proteins and B1-SINE and IAP-derived transcripts are reduced in adult AhR-/- ovaries. Accordingly, AhR-null female mice have lower numbers of follicles when compared with AhR+/+ mice. Thus, AhR deficiency differentially affects testis and ovary development possibly by a process involving piRNA-associated proteins, piRNAs and transposable elements.
2018-03-12T13:19:57Z
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2016
article
2046-2441
http://hdl.handle.net/10662/7143
Rico Leo, E. M.; Moreno Marín, N.; González Rico, F. J.; Barrasa Ardila, E. M.; Ortega Ferrusola, C.; Martín Muñoz, P.; Sánchez Guardado, L. O. [et al.]. (2016). PiRNA-associated proteins and retrotransposons are differentially expressed in murine testis and ovary of aryl hydrocarbon receptor deficient mice. Open biology, 6, 12, 160186. ESSN 2046-2441
10.1098/rsob.160186
Open biology
12
1
20
6, 160186
eng
http://rsob.royalsocietypublishing.org/content/6/12/160186
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
The Royal Society
oai:dehesa.unex.es:10662/121722023-10-30T10:23:03Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Bacterial consortiums able to use metal-cyanide complexes as a nitrogen source
Igeño González, María Isabel
Macías Granados, Daniel
Guijo Sánchez, María Isabel
Sánchez Clemente, Rubén
Gómez Población, Ana Belén
Merchán Sorio, Faustino
Blasco Pla, Rafael
Universidad de Extremadura. Instituto de investigación de carne y productos cárnicos(IProCar)
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Cianuro
Biodegradación
Pseudomonas
Consorcios bacterianos
Cyanide
Biodegradation
Bacterial consortiums
La mayoría de los efluentes industriales que contienen cianuro también contienen otros ciano-derivados y elevadas cantidades de metales y compuestos metal-cianuro. Por esta razón, el biotratamiento de estos residuos requiere el uso de microorganismos capaces de degradar todos estos diferentes cano-compuestos y de tolerar los metales. Pseudomonas pseudoalcaligenes CECT 5344 es una bacteria cianotrófica capaz de metabolizar el cianuro en su forma libre, pero no es muy eficiente en la degradación de complejos metal-cianuro. Por lo tanto, para la optimización del proceso de biodegradación del cianuro es esencial encontrar y caracterizar nuevas cepas bacterianas, capaces de asimilar complejos metal-cianuro, para complementar las capacidades de P. pseudoalcaligenes CECT 5344.
Most cyanide-containing industrial effluents also contain other cyano-derivatives and high amounts of metals and metal-cyanide compounds. For this reason, the biotreatment of these wastes requires the use of microorganisms capable to degrade all these different cyano-compounds and to tolerate metals. Pseudomonas pseudoalcaligenes CECT 5344 is a cyanotrophic bacterium capable of metabolize cyanide in its free form, but it is not very efficient at degrading metal-cyanide complexes. Therefore, for the optimization of the cyanide biodegradation process it is essential to find and characterize new bacterial strains, capable of assimilating metal cyanide-complexes, to complement the capacities of P. pseudoalcaligenes CECT 5344.
2021-06-08T09:37:01Z
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2018
article
2504-3900
http://hdl.handle.net/10662/12172
IGEÑO, María Isabel, MACÍAS, Daniel, GUIJO, María Isabel, SÁNCHEZ-CLEMENTE, Rubén, POBLACIÓN, Ana G., MERCHÁN, Faustino and BLASCO, Rafael. Bacterial Consortiums Able to Use Metal-Cyanide Complexes as a Nitrogen Source. Proceedings [online]. 22 October 2018. Vol. 2, no. 20, p. 1284. DOI 10.3390/proceedings2201284.
10.3390/proceedings2201284
Proceedings
20
1
4
2, 1284
eng
https://www.mdpi.com/2504-3900/2/20/1284
https://doi.org/10.3390/proceedings2201284
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
openAccess
Attribution 4.0 International
MDPI
oai:dehesa.unex.es:10662/190512023-12-22T01:31:20Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_158
Store-Operated Calcium Entry Inhibition and Plasma Membrane Calcium Pump Upregulation Contribute to the Maintenance of Resting Cytosolic Calcium Concentration in A1-like Astrocytes
Poejo, Joana Margarida de Andrade
Berrocal Carrillo, María
Sáez Mansilla, Lucía
Gutiérrez Merino, Carlos
Mata Durán, Ana María
N/A
Universidad de Extremadura. Departamento de Biología Vegetal, Ecología y Ciencias de la Tierra
A1 astrocitos
Componente del complemento C3
Amiloide β
Calcio citosólico
Homeostasis del calcio intracelular
Entrada de calcio operada por almacén
Bomba de calcio de la membrana plasmática
A1 astrocytes
Complement component C3
Amyloid
Cytosolic calcium
Intracellular calcium homeostasis
Store-operated calcium entry
Plasma membrane calcium pump
Homeostasis del calcio intracelular
Los astrocitos A1 reactivos altamente neurotóxicos se han asociado a varias enfermedades neurodegenerativas humanas. neurodegenerativas humanas. La expresión de la proteína del complemento C3 está fuertemente regulada al alza en los astrocitos A1 y se ha demostrado que esta proteína es un biomarcador específico de estos astrocitos. Varias citoquinas liberadas en las enfermedades neurodegenerativas aumentan la producción del precursor de la proteína amiloide (APP) y péptidos amiloides β neurotóxicos (A β) en astrocitos reactivos. Además, se ha propuesto que las señales de Ca2+ se han propuesto como un sello distintivo de la remodelación funcional de los astrocitos en modelos de ratón de la enfermedad de Alzheimer. En este trabajo, indujimos la generación de astrocitos reactivos de tipo A1 tras el astroglioma humano U251 con un cóctel de citoquinas TNF-, IL1- y C1q. Estos astrocitos A1-like muestran una mayor producción de APP y péptidos A en comparación con las células U251 no tratadas. Además, los astrocitos A1-like muestran una disminución del (75 10)% del Ca2+ almacenado en el retículo endoplásmico (RE), una atenuación del (85 10)% de la entrada de Ca2+ tras el agotamiento completo de Ca2+ del RE, y un aumento del triple de los péptidos APP y A en comparación con las células U251 no tratadas del retículo endoplásmico, y una expresión tres veces mayor de la bomba de calcio de la membrana plasmática, con respecto a los astrocitos de control no tratados. Esta alteración de la dinámica del Ca2+ intracelular permite a los astrocitos tipo A1 contrarrestar eficazmente la mayor liberación de Ca2+ en la membrana plasmática. contrarrestar eficazmente la mayor liberación de Ca2+ del RE, evitando un aumento de la concentración de Ca2 citosólica de Ca2+ en reposo.
Highly neurotoxic A1-reactive astrocytes have been associated with several human neurodegenerative diseases. Complement protein C3 expression is strongly upregulated in A1 astrocytes, and this protein has been shown to be a specific biomarker of these astrocytes. Several cytokines released in neurodegenerative diseases have been shown to upregulate the production of amyloid protein precursor (APP) and neurotoxic amyloid β (A β) peptides in reactive astrocytes. Also, aberrant Ca2+ signals have been proposed as a hallmark of astrocyte functional remodeling in Alzheimer’s disease mouse models. In this work, we induced the generation of A1-like reactive astrocytes after the co-treatment of U251 human astroglioma cells with a cocktail of the cytokines TNF-, IL1- and C1q. These A1-like astrocytes show increased production of APP and A peptides compared to untreated U251 cells. Additionally, A1-like astrocytes show a (75 10)% decrease in the Ca2+ stored in the endoplasmic reticulum (ER), (85 10)% attenuation of Ca2+ entry after complete Ca2+ depletion of
the ER, and three-fold upregulation of plasma membrane calcium pump expression, with respect to non-treated Control astrocytes. These altered intracellular Ca2+ dynamics allow A1-like astrocytes to efficiently counterbalance the enhanced release of Ca2+ from the ER, preventing a rise in the resting cytosolic Ca2+ concentration.
2023-12-21T13:01:21Z
2023-12-21T13:01:21Z
2023
article
http://hdl.handle.net/10662/19051
Poejo J, Berrocal M, Saez L, Gutierrez-Merino C, Mata AM. (2023). Store-Operated Calcium Entry Inhibition and Plasma Membrane Calcium Pump Upregulation Contribute to the Maintenance of Resting Cytosolic Calcium Concentration in A1-like Astrocytes. Molecules; 28(14):5363. https://doi.org/10.3390/molecules28145363
10.3390/molecules28145363
Molecules
14
5363-1
5363-16
28
1420-3049
0000-0003-3673-7007
0000-0002-2887-7854
eng
https://www.mdpi.com/1420-3049/28/14/5363
https://doi.org/10.3390/molecules28145363
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
openAccess
Attribution 4.0 International
MDPI