2024-03-28T20:41:31Zhttps://dehesa.unex.es:8443/oai/requestoai:dehesa.unex.es:10662/124132021-07-29T00:11:43Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27com_10662_12094com_10662_2434com_10662_28col_10662_160col_10662_12097col_10662_4707
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Martínez Chacón, Guadalupe
Fuentes Rodríguez, José Manuel
2021
Este libro es una recopilación de todos los protocolos de laboratorio que el grupo de investigación PARK (grupo adscrito a la Universidad de Extremadura, Facultad de Enfermería y Terapia Ocupacional, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Genética, perteneciente a CIBERNED y a INUBE) tiene puesto a punto. La obra pretende ser una herramienta de consulta, que se irá actualizando e implementando a lo largo del tiempo. En primer término, se realiza una descripción de los diferentes tampones y reactivos que se emplearán en cada uno de los capítulos, posteriormente se desarrollarán los protocolos de realización y mantenimiento de cultivos celulares que son la base de la experimentación que se llevará a cabo en los distintos procedimientos. Además, para llevar a cabo nuestra investigación, explicaremos de manera detallada el procedimiento a seguir en diferentes metodologías, tanto para la extracción de proteínas y RNA, así como el análisis mediante las técnicas de “Western Blotting”, citometría de flujo, inmunofluorescencia y microscopía electrónica. Se detallarán técnicas más complejas como la inmunoprecipitación, silenciamiento y sobreexpresión génica. Y otras más actuales y novedosas como “Seahorse y Filter Tap”.
Todos estos análisis y técnicas son independientes unas de otras, pero a la vez complementarias.
http://hdl.handle.net/10662/12413
spa
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Protocolos de laboratorio
Reactivos
Tampones
Cultivos celulares
Extracción de proteínas
Extracción de RNA
Técnicas de análisis
Laboratory protocols
Reagents
Buffers
Cell cultures
Protein extraction
RNA extraction
Analytical techniques
Procedimientos, experimentación e investigación en enfermedades neurodegenerativas. Protocolos para un laboratorio de neurociencias
book
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Dehesa
Hispana
oai:dehesa.unex.es:10662/153202022-08-20T00:12:57Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_160
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Paredes Barquero, Marta
Alegre Cortés, Eva
Niso Santano, Mireia
2021
Para medir el metabolismo celular a partir de análisis Seahorse, hay que resuspender las células antes de contarlas y sembrarlas, y determinar la concentración ideal de siembra. Si las células no son adherentes, se puede pre-tratar la placa con polilisina o colágeno. Preparar más volumen de medio + células para utilizar la pipeta multicanal y no utilizar volúmenes demasiado pequeños y así, evitar errores. Después de 2 horas, dejar con 80 μl de medio para evitar mover las células. Éstas no estarán pegadas y se pueden ir a los bordes. Si se hidrata con H2O miliQ hay que cambiarlo, al menos una hora antes de realizar el experimento. Si se hidrata directamente con el tampón de calibrado, no debe estar más de 24 horas. Si las células no estuvieran el día 2, se cambia el agua y se rehidrata con el tampón 1 hora antes del experimento. El volumen del tratamiento es de 100 μl/pocillo. Preparar el medio Seahorse adicionando glutamina 1X, glucosa 10 mM y sodio piruvato 1X. Antes de añadir ningún inhibidor, meter y sacar varias veces el cartucho del líquido de calibrado para eliminar cualquier burbuja que se haya podido generar. Añadir de izquierda a derecha apoyando la punta de la pipeta multicanal en la pared y de forma muy lenta para que resbale poco a poco. Luego, meter las placas en el aparato sin las tapas. Al finalizar el calibrado, el aparato pide la placa de las células y devuelve la placa con el líquido de calibrado. La placa de las células estará no menos de 45 minutos en la estufa. Comenzará con una etapa de equilibrado. Tras 13 minutos, ofrecerá las medidas basales y las inyecciones. Al terminar todo el proceso, cuya duración dependerá del kit utilizado y de las modificaciones hechas, pedirá que se finalice el programa y la máquina devolverá el cartucho y la placa de las células.
To measure cell metabolism from Seahorse assays, resuspend the cells before counting and seeding, and determine the ideal seeding concentration. If the cells are not adherent, the plate can be pre-treated with poly-L-lysine or collagen. Prepare more volume of medium + cells to use the multichannel pipette and do not use too small volumes to avoid errors. After 2 hours, leave with 80 μl of medium to avoid moving the cells. The cells will not be stuck together and may go to the edges. If hydrated with H2O miliQ, change the medium at least one hour before the experiment. If hydrated directly with the calibration buffer, it should not be more than 24 hours. If the cells were not present on day 2, the water is changed and rehydrated with the buffer 1 hour before the experiment. The treatment volume is 100 μl/well. Prepare Seahorse medium by adding 1X glutamine, 10 mM glucose and 1X sodium pyruvate. Before adding any inhibitor, dip the cartridge in and out of the calibration liquid several times to remove any bubbles that may have been generated. Add from left to right with the tip of the multichannel pipette resting on the wall and very slowly so that it slides off little by little. Then place the plates in the apparatus without the lids. At the end of the calibration, the apparatus asks for the cell plate and returns the plate with the calibration liquid. The cell plate shall remain in the oven for at least 45 minutes. It will start with a balancing step. After 13 minutes, it will provide the basal measurements and injections. At the end of the whole process, the duration of which will depend on the kit used and the modifications made, it will ask for the programme to be terminated and the machine will return the cartridge and the cell plate.
http://hdl.handle.net/10662/15320
spa
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Análisis Seahorse
Metabolismo celular
Seahorse analysis
Cell metabolism
Análisis Seahorse
bookPart
TEXT
Dehesa
Hispana
oai:dehesa.unex.es:10662/153132023-08-28T11:27:44Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_160
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Martínez Chacón, Guadalupe
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Yakhine-Diop, Sokhna M. S.
Rodríguez Arribas, Mario
Paredes Barquero, Marta
Alegre Cortés, Eva
Canales Cortés, Saray
Duque González, Gema
Giménez Bejarano, Alberto
Delgado Luceño, María Pura
Uribe Carretero, Elisabet
Niso Santano, Mireia
González Polo, Rosa Ana
2021
El estudio sobre la extracción de proteínas consiste en que, antes de usar, el reactivo A y reactivo B se complementaron con cóctel inhibidor de proteasa 10X (Sigma-Aldrich, P2714), ortovanadato de sodio al 0,5 M al 20 % (S6508, Sigma) y fluoruro de sodio al 0,1 M al 1 % (131675, Panreac). Las mitocondrias aisladas se lisaron en CHAPS al 2 % (C3023, Sigma). Las extracciones citosólicas y mitocondriales se analizaron mediante transferencia Western blotting. El protocolo B debe ser rápido, intentando no sobrepasar 30 segundos. Por otro lado, la adición de 1 μg/ml Leupeptina. 1 μg/ml Pepstatina. 1 μg/ml Aprotinina. 1 μg/ml Benzamidina. El PMSF se diluye en 1 ml de etanol absoluto filtrado. Si hay problemas con el método, probar modificando la concentración de digitonina.
The protein extraction study consists of reagent A and reagent B supplemented with 10X protease inhibitor cocktail (Sigma-Aldrich, P2714), 0,5 M 20 % sodium orthovanadate (S6508, Sigma) and 0,1 M 1 % sodium fluoride (131675, Panreac) before use. Isolated mitochondria were lysed in 2 % CHAPS (C3023, Sigma). Cytosolic and mitochondrial extractions were analysed by Western blotting. Protocol B should be fast, trying not to exceed 30 seconds. On the other hand, the addition of 1 μg/ml Leupeptin. 1 μg/ml Pepstatin. 1 μg/ml Aprotinin. 1 μg/ml Benzamidine. PMSF is diluted in 1 ml of filtered absolute ethanol. If there are problems with the method, try modifying the digitonin concentration.
http://hdl.handle.net/10662/15313
spa
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Proteínas
Bioquímica
Aislamiento de proteínas
Proteins
Biochemistry
Protein isolation
Extracción de proteínas
bookPart
TEXT
Dehesa
Hispana
oai:dehesa.unex.es:10662/153182022-08-20T00:12:55Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_160
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Paredes Barquero, Marta
Uribe Carretero, Elisabet
Niso Santano, Mireia
2021
Se siembran células en placas de 6 pocillos (130184, Biolite) a la densidad adecuada. Dejar un pocillo más de control. Se procede al Marcaje con L-[14C]-Valina. Se aplica Pre-Chase por espacio de una hora, mientras se preparan los distintos tratamientos a realizar en el experimento, utilizando el medio con L-Valina. Tras ese tiempo, se cogen las placas, se resuspende muy bien el contenido de los pocillos y se recoge el volumen que haya en los eppendorfs rotulados como Rc. Las muestras en los eppendorfs pueden quedarse a temperatura ambiente hasta su análisis. Se dejan rotulados los tubos de centelleo, como ha sucedido con los eppendorfs.
Seed cells in 6-well plates (130184, Biolite) at the appropriate density. Leave an extra control well. Proceed to L-[14C]-Valine labelling. Pre-Chase is applied for one hour, while the different treatments to be carried out in the experiment are prepared, using the medium with L-Valine. After this time, take the plates, resuspend the contents of the wells very well and collect the volume in the eppendorfs labelled Rc. The samples in the eppendorfs can remain at room temperature until analysis. The scintillation tubes are left labelled, as with the eppendorfs.
http://hdl.handle.net/10662/15318
spa
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Análisis Pulse-chase
Enfermedades neurodegenerativas
L-[14C]-Valina
Pulse-chase analysis
Neurodegenerative diseases
Análisis Pulse-Chase
bookPart
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Dehesa
Hispana
oai:dehesa.unex.es:10662/153192023-08-28T11:26:50Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_160
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Yakhine-Diop, Sokhna M. S.
Canales Cortés, Saray
González Polo, Rosa Ana
2021
La siembra celular se hace en placas de 6 pocillos (130184, Biolite) o de 24 pocillos (3524,Corning). A continuación, se aplican los tratamientos según corresponda en tiempo y concentración. El marcaje y análisis permiten recuperar las células con tripsina y se añaden junto a las que se encuentran en suspensión a tubos de citometría (1 por pocillo). Después, se centrifugan a 1.230 xg durante 5 min y se elimina el sobrenadante. Según el análisis a realizar, resuspender el pellet en diferentes tampones.
Cell seeding is done in 6-well plates (130184, Biolite) or 24-well plates (3524, Corning). Treatments are then applied according to time and concentration. Cells are trypsin labelled and analysed and recovered and added together with the cells in suspension to cytometry tubes (1 per well). They are then centrifuged at 1230 xg for 5 min and the supernatant is removed. Depending on the analysis to be performed, resuspend the pellet in different buffers.
http://hdl.handle.net/10662/15319
spa
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Citometría de flujo
Enfermedades neurodegenerativas
Flow cytometry
Neurodegenerative diseases
Citometría de flujo
bookPart
TEXT
Dehesa
Hispana
oai:dehesa.unex.es:10662/153142023-08-28T11:26:29Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_160
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Martínez Chacón, Guadalupe
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Yakhine-Diop, Sokhna M. S.
Rodríguez Arribas, Mario
Paredes Barquero, Marta
Alegre Cortés, Eva
Canales Cortés, Saray
Duque González, Gema
Giménez Bejarano, Alberto
Delgado Luceño, María Pura
Uribe Carretero, Elisabet
Niso Santano, Mireia
González Polo, Rosa Ana
2021
Se estudia cómo hacer el extracto proteico a partir de Western blotting. Para ello, se prepara para la transferencia de cada gel, dos papeles Whatman (Extra Thick Blod PAPER Bio-Rad), el uso de dos esponjillas y una membrana de PVDF. Todo deberá estar equilibrado en su tampón de transferencia antes de proceder a realizar el proceso de transferencia. Estas piezas deben estar embebidas durante al menos 10 minutos en tampón de trasferencia. Se aplicará una tensión de 75 V y migrar durante 45 minutos en agitación continua y refrigeración en el caso de los geles de 18 pocillos (Criterion TGX). El tampón utilizado en la transferencia de geles de 18 pocillos es el tampón Tris Glicina Metanol. El anticuerpo secundario se diluye de 1:5.000 a 1:10.000 en 10 % de leche desnatada en una solución de TTBS. La elección del anticuerpo secundario entre monoclonal o policlonal depende siempre del anticuerpo primario. Finalmente, la membrana estará lista para ser reutilizada (al menos en dos o tres ocasiones más). Hay que tener en cuenta que antes del primer borrado, hay que incubar la membrana con los anticuerpos fosforilados de interés. Después se puede proceder al borrado de la membrana e incubar con los anticuerpos totales, específicos de los anticuerpos fosforilados.
We study how to make the protein extract from Western blotting. To do this, two Whatman papers (Extra Thick Blod PAPER Bio-Rad), the use of two sponges and a PVDF membrane are prepared for the transfer of each gel. Everything must be balanced in its transfer buffer before proceeding with the transfer process. These parts shall be soaked for at least 10 minutes in transfer buffer. A voltage of 75 V shall be applied and migrate for 45 minutes under continuous agitation and cooling in the case of 18-well gels (Criterion TGX). The buffer used in the transfer of 18-well gels is Tris Glycine Methanol buffer. The secondary antibody is diluted 1:5,000 to 1:10,000 in 10 % skimmed milk in TTBS solution. The choice of monoclonal or polyclonal secondary antibody always depends on the primary antibody. Finally, the membrane is ready to be reused (at least two or three more times). Before the first blotting, the membrane must be incubated with the phosphorylated antibodies of interest. The membrane can then be blotted and incubated with the total antibodies specific to the phosphorylated antibodies.
http://hdl.handle.net/10662/15314
spa
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Aislamiento de proteínas
Western blot
Enfermedades neurodegenerativas
Protein isolation
Neurodegenerative diseases
Análisis de extracto proteico por Western blotting
bookPart
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Dehesa
Hispana
oai:dehesa.unex.es:10662/153152023-08-28T11:28:04Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_160
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Yakhine-Diop, Sokhna M. S.
Martínez Chacón, Guadalupe
Canales Cortés, Saray
Paredes Barquero, Marta
Niso Santano, Mireia
González Polo, Rosa Ana
2021
Protocolo de procesamiento de muestras de cultivos celulares en microscopia electrónica. Se aplica a la investigación de enfermedades neurodegenerativas en un laboratorio de neurociencias.
Protocol for processing cell culture samples in electron microscopy. Applied to the investigation of neurodegenerative diseases in a neuroscience laboratory.
http://hdl.handle.net/10662/15315
spa
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Aislamiento de proteínas
Microscopia electrónica
Enfermedades neurodegenerativas
Protein isolation
Electron microscopy
Neurodegenerative diseases
Microscopia electrónica
bookPart
TEXT
Dehesa
Hispana
oai:dehesa.unex.es:10662/153172023-08-28T11:28:59Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_160
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Martínez Chacón, Guadalupe
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Yakhine-Diop, Sokhna M. S.
Rodríguez Arribas, Mario
Paredes Barquero, Marta
Alegre Cortés, Eva
Canales Cortés, Saray
Duque González, Gema
Giménez Bejarano, Alberto
Delgado Luceño, María Pura
Uribe Carretero, Elisabet
Niso Santano, Mireia
González Polo, Rosa Ana
2021
Para la introducción de proteínas exógenas marcadas (plásmidos bacterianos en ocasiones marcados) se realiza una transfección, que consiste en la introducción de ADN o ARN de un virus o bacteriófago procariota en el interior celular. Después, se realiza una transfección química. Finalmente, se observan las células al microscopio de fluorescencia y si la transfección presenta una buena eficiencia. 24 horas más tarde, se realiza el tratamiento en medio completo, se fijan (placa de 24 o 96 pocillos) y se montan las lamelas (placa 24 pocillos) para su observación si se va a realizar la técnica de inmunofluorescencia o se lisan (placa 6 pocillos) si se va a realizar análisis de la sobreexpresión por Western blotting.
For the introduction of tagged exogenous proteins (sometimes tagged bacterial plasmids), a transfection is performed, which involves the introduction of DNA or RNA from a prokaryotic virus or bacteriophage into the cell interior. This is followed by chemical transfection. Finally, the cells are observed under a fluorescence microscope to determine whether the transfection is efficient. 24 hours later, the cells are treated in complete medium, fixed (24- or 96-well plate) and lamellae are mounted (24-well plate) for observation if immunofluorescence is to be performed or lysed (6-well plate) if overexpression analysis by Western blotting is to be performed.
http://hdl.handle.net/10662/15317
spa
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Sobreexpresión génica
Enfermedades neurodegenerativas
Proteínas exógenas marcadas
Transfección química
Gene overexpression
Neurodegenerative diseases
Exogenously labelled proteins
Chemical transfection
Western bolt
Técnica de sobreexpresión génica
bookPart
TEXT
Dehesa
Hispana
oai:dehesa.unex.es:10662/153162023-08-28T11:28:36Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_160
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Martínez Chacón, Guadalupe
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Yakhine-Diop, Sokhna M. S.
Rodríguez Arribas, Mario
Rodríguez Barquero, Marta
Alegre Cortés, Eva
Canales Cortés, Saray
Duque González, Gema
Giménez Bejarano, Alberto
Delgado Luceño, María Pura
Uribe Carretero, Elisabet
Niso Santano, Mireia
González Polo, Rosa Ana
2021
Para realizar silenciamiento génico en placas de 6 pocillos (130184, Biolite) se emplean el reactivo HiPerfect Transfection Reagent (509301704, Qiagen); el reactivo Lipofectamine RNAiMAX Transfection (13778150, Invitrogen) y el reactivo Lipofectamine 2000 Reagent (11668-019, Invitrogen). En los tres procesos se elabora la misma mezcla con siRNA para el control negativo (scrambled) en paralelo. A las 24 horas de incubación con cualquiera de los reactivos se cambia el medio a la placa y se añade medio normal con antibiótico. Con el primer reactivo, pasadas otras 24 horas se añade el tratamiento de interés y se procede al lisado para realizar la técnica de Western blotting. Con el segundo reactivo, tras las 24 horas y el tratamiento adecuado, se procede a fijar la placa con PFA. Con el tercer reactivo, se dejan pasar 24 horas, se aplica el tratamiento previsto y se pasa a la recogida de células y posterior lisado.
For gene silencing in 6-well plates (130184, Biolite), HiPerfect Transfection Reagent (509301704, Qiagen); Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent (13778150, Invitrogen) and Lipofectamine 2000 Reagent (11668-019, Invitrogen) are used. In all three processes, the same mixture with siRNA for the negative control (scrambled) is prepared in parallel. After 24 hours of incubation with any of the reagents, the medium is changed to the plate and normal medium with antibiotic is added. With the first reagent, after another 24 hours, the treatment of interest is added and the lysate is lysed for Western blotting. With the second reagent, after 24 hours and the appropriate treatment, the plate is fixed with PFA. With the third reagent, 24 hours are allowed to elapse, the expected treatment is applied and the cells are collected and subsequently lysed.
http://hdl.handle.net/10662/15316
spa
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Silenciamiento génico
Enfermedades neurodegenerativas
HiPerfect Transfection Reagent (509301704, Qiagen)
Lipofectamine RNAiMAX Transfection (13778150, Invitrogen)
Lipofectamine 2000 Reagent (11668-019, Invitrogen)
Western blot
Gene silencing
Técnica de silenciamiento génico
bookPart
TEXT
Dehesa
Hispana
oai:dehesa.unex.es:10662/48682023-08-24T09:20:39Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_160
Universidad de Córdoba
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Martínez Luque-Romero, Manuel
Blasco Pla, Rafael
Castillo Rodríguez, Francisco
2012
La biogénesis es, quizás, el tema más complejo de la Biología y, sin duda, una de las cuestiones pendientes de la ciencia. Este libro aborda el asunto desde los cuatro enfoques epistemológicos posibles: ascendente, descendente, sintético y analítico. El libro se divide en 11 capítulos con gran profusión de dibujos, tablas y cuadros explicativos.
En la introducción se comenta la naturaleza física y química de la vida y los límites del conocimiento. En los nueve siguientes se hace uso, por razones didácticas, de las aitia del empirismo lógico.
En el capítulo 2 (qué) se plantea el núcleo duro de la biogénesis, compatibilizándolo con el principio de continuidad y analizando las dificultades conceptuales suscitadas a lo largo de la historia.
En los capítulos 3 y 4 (dónde y cuándo) se estudian los aspectos cosmológicos, astrofísicos y geológicos. Se habla de habitabilidad, exobiología, planetología y paleobiología.
El capítulo 5 trata del cómo. Se exponen los principios científicos para la compresión de la biogénesis: información, cinética química, termodinámica, autoensamblaje, evolución y análisis filogénico.
Los capítulos 6-9 abordan aspectos prácticos del cómo, tanto los modelos ascendentes (simulación prebiótica de micro y macromoléculas y sistemas biopoyéticos) como los descendentes (“mundos”, bioquímica comparada y biología sintética).
El capítulo 10 trata brevemente el aitia más compleja de todas, el porqué. En él se vierten reflexiones filosóficas y opiniones personales.
En el último capítulo, pese a la enorme dificultad del tema y al exiguo número de investigadores que le han dedicado sus esfuerzos, se recogen algunas conclusiones.
The origin of life on Earth is probably the most complex problem in Biology and one of the main pending problems to be solved in science. This book poses the problem from the four epistemological approaches: bottom-up, top-down, synthetic and analytics. The book is divided into 11 chapters including many explanatory drawings and tables.
The introduction addresses the physicochemical nature of living beings and the limits of knowledge. In the following 9 chapters the authors, for didactic reasons, make use of the different aitia of logical empiricism.
In Chapter 2 (What) the hard core of the biogenesis is exposed in the context of the continuity principle analyzing some conceptual problems faced along the history.
In Chapters 3 and 4 (Where and When) the cosmological, geological and astrophysical aspects of the biogenesis are treated. Habitability, exobiology and paleontology are also treated in these chapters.
Chapters 5 treat the question, How? In this chapter the scientific principles to understand the biogenesis are exposed: Information, chemical kinetics, thermodynamics, auto-assembly, evolution and phylogenetic analysis. In chapters 6-9 the practical aspect of the same question (how) are addressed, using either “bottom-up” (prebiotic simulation of micro- and macromolecules and biopoyetic systems) and “top-down” (different “worlds”, comparative biochemistry and synthetic biology) models.
In Chapter 10 the most difficult aitia of the biogenesis is treated: Why? Here some philosophical and personal opinion of the authors are exposed.
In the last chapter some provisional conclusions are extracted from the relatively scarce bibliography, if compared to complexity of the problem.
http://hdl.handle.net/10662/4868
spa
Ediciones Don Folio
Biogénesis
Vida
Biogenesis
Life
Sobre el origen de la vida
book
TEXT
Dehesa
Hispana
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Universidad de Extremadura. Departamento de Biología Vegetal, Ecología y Ciencias de la Tierra
Alegre Cortés, Eva
Martínez Chacón, Guadalupe
Yakhine-Diop, Sokhna M. S.
Rodríguez Arribas, Mario
Paredes Barquero, Marta
Canales Cortés, Saray
Duque González, Gema
Giménez Bejarano, Alberto
Delgado Luceño, María Pura
Uribe Carretero, Elisabet
Niso Santano, Mireia
González Polo, Rosa Ana
Fuentes Rodríguez, José Manuel
2021
Se utilizan diferentes modelos celulares para validar los resultados en todas las líneas según la procedencia de la línea celular. Los siguientes protocolos se realizan en células de neuroblastoma humano (SH-SY5Y), fibroblastos embrionarios de ratón (MEF), células de astrocitoma (U251), células de neuroglioma (H4), fibroblastos humanos (FH) y células de osteosarcoma (U2OS). El modelo celular basado SH-SY5Y nos permitirá realizar una buena aproximación a los mecanismos que medían la muerte celular en células nerviosas. Estas células son ampliamente utilizadas en estudios de neurodegeneración, incluyendo estudios de modelos in vitro de la Enfermedad de Parkinson. Así también el modelo de las células U251 nos permitirán realizar el estudio en unas condicionas más fisiológicas de las células de la glía y así aproximarnos a la interacción de estas células con las células nerviosas
Different cell models are used to validate the results in all lines depending on the origin of the cell line. The following protocols are performed on human neuroblastoma cells (SH-SY5Y), mouse embryonic fibroblasts (MEF), astrocytoma cells (U251), neuroglioma cells (H4), human fibroblasts (FH) and osteosarcoma cells (U2OS). The SH-SY5Y-based cell model will allow us to make a good approximation of the mechanisms that mediate cell death in nerve cells. These cells are widely used in neurodegeneration studies, including studies of in vitro models of Parkinson's disease. The U251 cell model will also allow us to study glial cells under more physiological conditions and thus approach the interaction of these cells with nerve cells.
http://hdl.handle.net/10662/15312
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Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Neuroblastoma humano (SH-SY5Y)
Fibroblastos embrionarios de ratón (MEF)
Células de astrocitoma (U251)
Células de neuroglioma (H4)
Fibroblastos humanos (FH)
Células de osteosarcoma (U2OS)
Human neuroblastoma cells (SH-SY5Y)
Mouse embryonic fibroblasts (MEF)
Astrocytoma cells (U251)
Neuroglioma cells (H4)
Human fibroblasts (FH)
Osteosarcoma cells (U2OS)
Cultivos celulares
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Dehesa
Hispana
oai:dehesa.unex.es:10662/153212022-08-20T00:12:58Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_160
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Paredes Barquero, Marta
2021
Para realizar el lisado celular o de tejido pueden usarse dos fracciones: soluble e insoluble. En las fracciones solubles, se alisan las muestras con el volumen que corresponda de NP40 0,5 x; se incuban 10-15 minutos en hielo; se centrifuga a 13.000 rpm entre 15-60 minutos; se recoge el sobrenadante en eppendorfs rotulados con la palabra “Soluble”. En las fracciones insolubles, los pasos son: resuspender el pellet con un volumen adecuado de SB1x; sonicar; calentar 10 minutos en el termobloque y dar un spin. Por último, mantener en el mismo eppendorf rotulado con el término “Insoluble”.
Two fractions can be used for cell or tissue lysate: soluble and insoluble. For soluble fractions, samples are lysed with an appropriate volume of NP40 0.5 x; incubated 10-15 minutes on ice; centrifuged at 13,000 rpm for 15-60 minutes; the supernatant is collected in eppendorfs labelled 'Soluble'. For insoluble fractions, the steps are: resuspend the pellet with an appropriate volume of SB1x; sonicate; heat for 10 minutes in the thermoblock and spin. Finally, keep in the same eppendorf labelled "Insoluble".
http://hdl.handle.net/10662/15321
spa
Universidad de Extremadura, Servicio de Publicaciones
Análisis Filter trap
Lisado celular
Fracción soluble
Fracción insoluble
Filter trap analysis
Cell lysate
Soluble fraction
Insoluble fraction
Análisis: Filter trap
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Hispana