2024-03-29T06:21:58Zhttps://dehesa.unex.es:8443/oai/requestoai:dehesa.unex.es:10662/3132021-05-14T13:12:17Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Inducción térmica del inicio de la replicación cromosómica en "Escherichia coli"
Botello Cambero, Emilia Carmen
Jiménez Sánchez, Alfonso
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Replicación inducida por calor
Heat-induced replication
Escherichia Coli
2407 Biología Celular
La replicación cromosómica es la etapa más importante del ciclo celular bacteriano. El aumento de la temperatura de incubación a un cultivo de una estirpe silvestre de E. Coli induce de forma instantánea y transitoria replicaciones cromosómicas suplementarias. En este trabajo se ha analizado este tipo de replicación. Se ha determinado que los inicios de esta replicación no requieren las actividades de la RNA polimerasa, ni la síntesis de proteínas y no es regulada por el ppGpp, a diferencia de las replicaciones que inician en situaciones normales. Sin embargo, los inicios de esta replicación se han localizado en este trabajo en oriC y dependen estrictamente de su funcionalidad. El mecanismo de inducción de esta replicación es parcialmente dependiente de sigma-32, que es el factor que regula la respuesta de choque térmico, de RNasa hi y de RecA. El periodo de elongación de estas replicaciones es mayor que el de las fisiológicas.
Las alteraciones de DNA/masa encontradas en este trabajo permiten proponer un nuevo modelo para el control de la replicación cromosómica en E. Coli.
Un aumento de diez o más grados en la temperatura de incubación de un cultivo de Escherichia coli induce ciclos de replicación extras. Esta replicación inducida por calor (HIR) inicia en oriC, es transitoria, requiere Rnase H1 y RecA y no requiere la actividad de la RNA polimerasa ni síntesis de proteínas de novo. HIR no está relacionada con SDR ni con la respuesta de choque térmico. Una alteración termodinámica de la estructura de oriC o de la fluidez de membrana podría justificar HIR.
A shift-up of ten or more degrees in the growth temperature of an Escherichia coli culture causes induction of extra rounds of chromosome replication. This heat-induced replication (HIR) initiates at oriC, is transitory, requires RNase H1 and RecA and requires neither RNA polymerase activity nor de novo protein synthesis. HIR is neither related to SDR nor induced by the heat shock response. A thermodynamic alteration of oriC structure or of membrane fluidity could explain the observed HIR.
Ministerio de Educación y Ciencia (PB87-0975; PB91-0559; Beca predoctoral del Programa General)
2012-10-24T12:39:45Z
2012-10-24T12:39:45Z
2006
1994-01-01
doctoralThesis
publishedVersion
84-7723-725-5
http://hdl.handle.net/10662/313
0000-0003-1570-7896
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Estimación de la prevalencia de la enfermedad de Parkinson en Extremadura
Alvarado Pacheco, Aurora
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Casado Naranjo, Ignacio
González Polo, Rosa Ana
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Enfermedad de Parkinson
Estudios de prevalencia
Farmacoepidemiología
Dosis diaria definida
Parkinson´s disease
Prevalence studies
Pharmacoepidemiology
Defined daily dose
3205.07 Neurología
3202 Epidemiología
3207.11 Neuropatología
La enfermedad de Parkinson es la segunda enfermedad neurodegenerativa más frecuente después de la enfermedad de Alzehimer. En epidemiología, los estudios de prevalencia de una enfermedad proporcionan información muy útil para identificar los factores de riesgo y mejorar la planificación sanitaria. Actualmente, los países están experimentando un aumento en la esperanza de vida de su población. Debido a que la enfermedad de Parkinson es una enfermedad con mayor prevalencia en edades avanzadas, estos países se enfrentan a problemas con sus recursos sanitarios. El objetivo de la presente tesis doctoral es estimar la prevalencia en Extremadura a través del consumo de fármacos antiparkinsonianos, y así conocer su impacto como problema de salud pública en nuestra comunidad. La tesis se ha estructurado en seis bloques: 1) introducción; 2) objetivos planteados; 3) descripción del método; 4) resultados obtenidos; 5) discusión de los datos dentro del entorno científico; y 6) conclusiones extraídas.
Parkinson´s disease is the second most frequent neurodegenerative disease after Alzehimer’s disease. Epidemiological data regarding the prevalence of Parkinson´s disease are of interest to identify risk factors and improve effective planning of medical services. Nowadays, countries are experiencing marked demographic shifts, with progressively larger proportions of their populations entering old age. Because Parkinson´s disease affects predominantly older persons, many countries around the world are facing a future of unsustainable demands on healthcare resources. The purpose of this thesis is to estimate the Parkinson’s disease prevalence in Extremadura from the consumption of antiparkinson drugs to determine its true impact on public health in our community. The thesis has been structured in six blocks: 1) introduction; 2) enumeration of the objectives; 3) description of the methodology; 4) results obtained; 5) discussion of the data inside the scientific environment; and 6) conclusions.
2016-06-16T11:29:03Z
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2016-06-16
2016-04-08
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/4304
0000-0002-0163-2953
0000-0001-6910-2089
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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207 p.
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Expresión y función de la proteína quinasa activada por AMP, AMPK, en la célula germinal masculina de cerdo
Hurtado de Llera, Ana
Bragado González, María Julia
Gil Anaya, María Cruz
García Marín, Luis Jesús
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Quinasa
AMPK
Espermatozoide
Kinase
Spermatozoa
2403 Bioquímica
3109.09 Fisiología
2401.13 Fisiología Animal
2302.27 Proteínas
Tesis doctoral con la Mención de "Doctor Internacional"
El espermatozoide es una célula germinal altamente especializada que debe experimentar unos procesos funcionales característicos para lograr su función primordial: la fecundación del ovocito. Estos procesos funcionales son por un lado dependientes del estado energético, y por otro están regulados por mecanismos bioquímicos como la fosforilación de proteínas. La proteína quinasa activada por AMP, AMPK, actúa como una molécula sensora de la carga energética celular, y su activación provoca una regulación del metabolismo. Los resultados de la presente Tesis nos permiten elaborar las siguientes conclusiones: 1- AMPK, se expresa en el espermatozoide de cerdo y se encuentra enzimáticamente activa en condiciones fisiológicas. 2- AMPK se localiza principalmente en el acrosoma y en la pieza intermedia del flagelo. 3- La ruta de señalización que provoca la activación de AMPK está regulada por calcio, cAMP, por la proteína quinasa A (PKA), proteína quinasa C (PKC) y las proteínas quinasas α y/o β de la CAMKK. 4- AMPK está involucrada en la regulación de la movilidad del espermatozoide. 5- AMPK desempeña una importante función en las membranas del espermatozoide. 6- AMPK está implicada en la regulación del potencial de membrana mitocondrial. 7- AMPK se activa por fosforilación en repuesta a determinados tipos de estrés celular. En resumen, consideramos que los resultados de esta Tesis Doctoral permiten proponer a la AMPK como una quinasa esencial que regula la capacidad de la célula germinal masculina para adaptarse a las fluctuantes condiciones externas, como ocurre durante el tránsito a través del tracto reproductor femenino.
Spermatozoon is a very specialized germ cell that undergoes characteristic functional processes prior accomplishing its essential function: fertilization of the oocyte. These processes depend on the energy charge of this germ cell and are also controlled by biochemical mechanisms, such as protein phosphorylation. AMP-activated kinase AMPK is a protein kinase that detects cell energy state and upon activation regulates metabolism. Results of the Thesis allow us to establish the following conclusions: 1- AMP-activated protein kinase AMPK is expressed in boar spermatozoa and is active under physiological conditions. 2- AMPK protein is mainly localized in the acrosome and in the middle piece of boar spermatozoa flagellum. 3- Intracellular mechanisms leading to AMPK activation by phosphorylation in boar spermatozoa involved calcium and cAMP, as well as signalling pathways of the protein kinase A (PKA), protein kinase C (PKC), protein kinase α and/or β of CaMKK. 4- AMPK protein Kinase is involved in the regulation of motility in boar spermatozoa. 5-AMPK protein plays a relevant function in spermatozoa membranes. 6- AMPK protein kinase is involved in the control of mitochondrial membrane potential in boar spermatozoa.7- AMPK protein kinase becomes activated by phosphorylation in boar spermatozoa in response to several germ cell stresses. In summary, we consider that results elaborated in this Thesis allows our proposal that AMPK acts as an essential kinase in the regulation of male germ cells ability for adapting to the changing conditions of the extracellular medium, as it occurs during their transit though the female reproductive tract for fertilization.
Esta Tesis Doctoral ha sido financiada con cargo a los siguientes proyectos:
- Ministerio de Ciencia e Innovación (AGL 2010-15188): “Función de la proteína quinasa activada por AMP, AMPK, en la célula germinal masculina: posible aplicación biotecnológica a la conservación de semen porcino”.
- Gobierno de Extremadura (PRI 09A077): “Función de la proteína quinasa AMPK en la célula germinal masculina: aplicación a la optimización del protocolo de criopreservación de semen de cerdo ibérico”.
- Gobierno de Extremadura (PDT 08A057): “Aplicación de nuevas tecnologías de contrastación seminal a la valoración de la calidad de dosis seminales comerciales de cerdo ibérico”.
- Gobierno de Extremadura, Ayudas a Grupos (GR10156).
- Universidad de Extremadura (Convenio 102/09): “Estudios de nuevos indicadores de calidad del semen del cerdo ibérico”.
- Universidad de Extremadura, Ayudas a Grupos (GRU-09019/GRU-06116).
2014-05-06T12:13:01Z
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2014-05-06
2014-03-20
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/1357
0000-0002-6782-9783
0000-0002-1795-7381
0000-0001-7041-9673
0000-0001-7770-0775
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243 p.
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Papel dual del receptor de dioxina en el crecimiento y metástasis del melanoma
Contador Troca, María
Fernández Salguero, Pedro María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Melanoma
Metastasis
Transición epitelio-mesenquima
Cancer stern cell
Aryl hydrocarbon receptor
Microenviroment
3207.13 Oncología
2302.21 Biología Molecular
3207.03 Carcinogénesis
AhR es un factor de transcripción altamente conservado en la filogenia y con un papel clave en la toxicidad y la carcinogénesis inducidas por xenobióticos. Evidencias experimentales recientes demuestran que AhR regula procesos fisiológicos ya que está implicado en proliferación y diferenciación celular, en migración celular y en el desarrollo de los sistemas cardiovascular y hepático. Nuestro laboratorio y otros grupos han demostrado que AhR regula adhesión y migración celular en función del fenotipo mesenquimal, epitelial o endotelial de la célula diana y que, de hecho, AhR es un nuevo intermediario en la transición epitelio-mesénquima (EMT) que favorece el fenotipo “stem-like” (CSC) y la metástasis de células tumorales. El objetivo global de esta Tesis Doctoral era analizar el papel de AhR en el crecimiento y la metástasis del melanoma, el tumor epitelial más prevalente y de peor pronóstico. Para ello hemos producido un modelo celular con niveles variables de actividad AhR que permita investigar su contribución al desarrollo y la metástasis del melanoma in vivo en un entorno inmunocompetente. En dicho modelo hemos determinado la contribución de AhR estromal a la progresión del melanoma y hemos definido los mecanismos moleculares implicados, con énfasis en rutas de señalización que controlan migración celular. Hemos analizado el papel de AhR en el mantenimiento de un fenotipo “cancer stem-like” en células de melanoma y, finalmente, validados el papel de AhR como potencial marcador en melanoma humano. Hemos demostrado que AhR actúa como promotor tumoral en el estroma pero como oncogén en la célula tumoral de melanoma.
The dioxin receptor (AhR) is a transcription factor highly conserved in the phylogeny and with a critical role in xenobiotic-induced toxicity and carcinogenesis. An increasing number of experimental evidences demonstrate that AhR regulates physiology since it is involved in cell proliferation and differentiation, migration and in the development of the cardiovascular and hepatic systems. Ours and other laboratories have shown that AhR modulates cell adhesion and migration upon the mesenchymal, epithelial or endothelial phenotype of the target cell and that, in fact, AhR is a novel player in the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) that favors a cancer stem-like phenotype and the metastatic potential of tumor cells. El general goal of this PhD Thesis is to analyze the role of AhR in melanoma growth and metastasis, the most prevalent and malignant epithelial cancer. To do that, we have produce a cellular model with different AhR expression/activation levels to investigate its contribution to melanoma progression in vivo in an immunocompetent microenvironment. In such model, we have analyced the impact of stromal AhR expression in melanoma progression and we define the molecular mechanisms involved, with special attention to signaling pathways controlling cell migration. We study the role of AhR in the maintenance of a cancer stem cell phenotype in melanoma cells and, finally, we havel validate the role of AhR as a potential marker in human melanoma. We have demostrated that AhR contributed to the cell-stroma interaction blocking melanoma growth and metastasis when expressed in the tumor cell but supporting melanoma when expressed in the stroma
Trabajo financiado con proyectos del Ministerio de Ciencia y Tecnología (SAF2005-00130), de la Red Temática de Investigación Cooperativa en Cáncer RTICC (RD06/0020/1016) y del Plan de Ayuda a grupos de investigación de la Vicepresidenta Segunda y Consejería de Economía, Comercio e Innovación de la Junta de EXtremadura (GRU07/007 y GRU08/012).
2014-03-13T11:51:19Z
2014-03-13T11:51:19Z
2014-03-13
2014-02-07
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/1163
0000-0003-2839-5027
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Implicaciones funcionales de la fosforilación de STIM1 mediada por ERK1/2: control de rutas de señalización y migración celular
Tomás Martín, Patricia
Martín Romero, Francisco Javier
Pozo Guisado, Eulalia
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
STIM1
Calcio
Migración
SOCE
Calcium
Migration
Migración celular
Cell migration
2302 Bioquímica
STIM1 es una proteína del retículo endoplasmático (RE) que funciona como sensor de la concentración de calcio (Ca2+) dentro del RE. Tras la depleción de los depósitos intracelulares, STIM1 se transloca a regiones cercanas a la membrana plasmática (MP), donde activa entrada de Ca2+ operada por depósitos (SOCE, storeoperated Ca2+ entry). Para la completa activación de STIM1 es necesaria su fosforilación en sitios dianas de ERK1/2 (Ser575, Ser608 y Ser621). Esta fosforilación de la proteína determina su cinética de multimerización y es necesaria para la disociación entre STIM1 y EB1. Además, IGF-1 induce la fosforilación de STIM1en los residuos citados y su multimerización y la sobre-expresión de STIM1-S575A/S608A/S621A-GFP reduce esta multimerización significativamente. IGF-1 induce además la disociación de STIM1-EB1 y activa la translocación nuclear de NFAT, que se bloquea con la sobre-expresión de STIM1-3A y de la proteína de fusión STIM1-EB1, confirmando que tanto la fosforilación de STIM1 como su disociación de EB1 son necesarias para la activación de la proteína. SOCE regula la migración celular y la fosforilación de STIM1 es determinante en este proceso. Hemos visto además que fosfo-STIM1 se localiza en ruffles de membrana y modula la dinámica de los ruffles de MP, de manera que STIM-3A reduce la migración, incrementando el número y tamaño de adhesiones cocales y ralentizando la dinámica de los ruffles de membrana. Estos resultados sugieren que la entrada de Ca2+ a través de canales SOC regula la cinética de cortactina y que en este proceso es determinante la fosforilación de STIM1 en sitios diana de ERK1/2.
STIM1 is an endoplasmic reticulum protein that serves as a Ca2+ sensor within the endoplasmic reticulum (ER). Under activation of Ca2+ release from the ER, STIM1 translocates to plasma membrane-ER junctions where it activates plasma membrane Ca2+ channels and the Ca2+ influx pathway termed store-operated Ca2+ entry (SOCE). To become fully activated STIM1 is phosphorylated at ERK1/2 target sites (Ser575, Ser608, and Ser621). This phosphorylation is related with STIM1 activation and is required for the dissociation from the end-binding protein 1 (EB1). Furthemore, IGF-1 triggers STIM1 phosphorylation in the aforementioned residues. IGF-1 activates also STIM1-EB1 dissociation and induces NFAT translocation, that is delayed with STIM1- 3A or STIM1-EB1 tandem protein over-expression, confirming that both STIM1 phosphorylation and STIM1-EB1 dissociation are required for fully STIM1 activation. SOCE regulates cell migration and STIM1 phosphorylation is related to this process. We show here that intracellular distribution of phospho-STIM1 is mainly localized in membrane ruffles and STIM1-3A delays cell migration, increases the number and size of focal adhesions and slows down membrane ruffling dynamics. These results suggest that Ca2+ entry through SOC channels regulates cortactin dynamics and that STIM1 phosphorylation at ERK1/2 target sites is necessary for this process.
• Proyectos del Ministerio de Economía y competitividad (BFU2011-22798, BFU2014-52401-P) y de la Junta de Extremadura-Fondo Social Europeo (PDT08A027).
• Beca de Colaboración del Ministerio de Educación,
• Ayuda de Iniciación en I+D+I de la Universidad de Extremadura (código A-02 de 2010),
• Beca Predoctoral de la Junta de Extremadura (código PD10081).
2016-12-05T12:18:14Z
2016-12-05T12:18:14Z
2016-12-05
2016-11-04
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/4995
0000-0003-3486-6411
0000-0001-6796-7396
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Hispana
TEXT
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/4995
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Estudio de las propiedades antioxidantes de flavonoides alimentarios y su efecto sobre la biosíntesis de eicosanoides mediada por lipoxigenasa hepática
Duque Macías, Antonio Luis
Pinto Corraliza, María del Carmen
Macías Laso, Pedro
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Flavonoides alimentarios
Lipoxigenasa hepática
Antioxidantes
Eicosanoides
2302.90 Bioquímica de Alimentos
3309.03 Antioxidantes en Los Alimentos
Las lipoxigenasas son una familia de enzimas prooxidantes que se encuentran tanto en animales como en plantas, y catalizan la hidroperoxidación de ácidos grasos poliinsaturados. En mamíferos son responsables de la síntesis de eicosanoides, derivados del ácido araquidónico, con gran relevancia por el papel fisiopatológico que juegan. Estos compuestos incluyen los leucotrienos, hepoxilinas e hidroperoxidos; implicados en procesos de broncoconstricción, en patologías asmáticas, en procesos inflamatorios, en procesos cancerígenos y en alteraciones vasculares relacionadas con la agregación plaquetaria y la permeabilidad vascular. En vegetales no se encuentra bien conocido el papel fisiológico que juega esta enzima, pero desde un punto de vista de tecnología alimentaria conveine resaltar la implicación de la lipoxigenasa en la generación de compuestos no deseables desde un punto de vista organoléptico.
Por otra parte, es conocido el efecto beneficioso que ejercen sobre la salud los compuestos polifenólicos presentes en productos alimentarios de origen vegetal. Estos compuestos se encuentran presentes en productos de gran difusión como son el té, el café o el vino, a los que se han atribuido propiedades saludables debido a la presencia de polifenoles antioxidantes, flavonoides principalmente. Muchos de los efectos saludables descritos están referidos a patologías cancerígenas, inflamatorias o cardiovasculares, en las cuales también se encuentra implicada la enzima lipoxigenasa, sin embargo existen pocos estudios que evalúen el efecto de antioxidantes naturales alimentarios sobre la citada enzima. El presente trabajo contempla el estudio del efecto de los polifenoles alimentarios, sobre la actividad lipoxigenasa hepática. El estudio se realizó a tres niveles: a) Por evaluación in vitro del efecto de antioxidantes naturales fenolicos sobre la enzima lipoxigenasa. b) Mediante estudios in vivo introduciendo los antioxidantes naturales en la dieta y determinando posteriormente le efecto sobre la actividad lipoxigenasa hepática, y el efecto protector de los antioxidantes naturales introducidos en la dieta sobre ratas sometidas a estrés oxidativo. c) Y onociendo a nivel molecular los efectos inhibidores de la actividad lipoxigenasa por parte de polifenoles antioxidantes, atendiendo a la interacción entre enzima y polifenol. El estudio permite evaluar desde un punto de vista comparativo, a nivel molecular, metabólico y nutricional, el efecto de los polifenoles antioxidantes alimentarios sobre la actividad lipoxigenasa.
Junta de Extremadura. Consejería de Infra estructura y Desarrollo Tecnológico: Beca predoctoral del Programa III PRI+D+I (Resolución 1 de Noviembre de 2005) con nº de Proyecto 2PR04A050.
2014-04-02T10:27:13Z
2014-04-02T10:27:13Z
2012
2011-12-14
doctoralThesis
publishedVersion
978-84-695-6242-0
http://hdl.handle.net/10662/1226
0000-0001-8717-3518
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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172 p.
application/pdf
Universidad de Extremadura. Servicio de Publicaciones
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/1226
oai:dehesa.unex.es:10662/17822021-05-14T13:26:23Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Papel del inicio de replicación en la letalidad causada por la carencia de timina
Role of DNA replication initiation on the lethality caused by thymine starvation
Mata Martín, María del Carmen
Guzmán Cabañas, María Elena
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Muerte por carencia de timina
oriC
Replicación
Thymineless death
Replication
2409 Genética
2414.02 Fisiología Bacteriana
2414.04 Bacteriología
2414.07 Metabolismo Microbiano
2415.01 Biología Molecular de Microorganismos
Tesis doctoral con la Mención de "Doctor Internacional"
El fenómeno muerte por carencia de timina, (thymineless death,TLD) es la perdida de viabilidad que tiene lugar cuando células se mantienen en carencia de timina. Esta letalidad se manifiesta desde bacterias hasta células eucariotas.
En este trabajo se han desarrollado diferentes aproximaciones experimentales para determinar y explicar los procesos moleculares o mecanismos desencadenantes de TLD. A partir de nuestros resultados se ponen de manifiesto importantes ideas: (i) existe una correlación entre la magnitud de TLD y numero de horquillas de replicación, (ii) el daño en el DNA y la formación de estructuras complejas están asociadas a TLD, pero no son suficientes para explicarla (iii) la inhibición de nuevos inicios de replicación durante carencia de timina suprime TLD. Entre estas condiciones están: la adición de rifampicina, inactivación de la proteína DnaA, delecciones parciales alrededor de oriC o del propio oriC; indicando que el inicio de replicación es un punto critico para desencadenar letalidad en carencia de timina, (iv) bajo carencia de timina se generan intermediarios de replicación en el origen de replicación, oriC asociadas a la letalidad (v) la carencia de timina acelera el proceso de división celular en células que han terminado un ciclo de replicación, lo que supone el establecimiento de un nuevo mecanismo de control entre la replicación cromosómica y la división celular no descrito hasta el momento. Los resultados presentados aquí muestran un papel esencial de los nuevos inicios de replicación en TLD, abriendo nuevas vías de desarrollo para quimioterapias o tratamientos antifúngicos y antibacterianos.
The thymineless death (TLD) is the loss of viability that take place when growing cells are maintained in a growth medium lacking of thymine but other wise sufficient for continued growth. This lethality is observed from bacteria to eukaryotic cells.
We have developed different approaches to study the mechanism underlying TLD. From the results presented in this work we can conclude: (i) that the magnitude of TLD correlates with the number of the replication forks (ii) DNA damage and complex DNA structures are associated to TLD but they alone can not explain TLD (iii) TLD was prevented under conditions in which new initiation events are inhibited such a rifampicin addition, inactivation of DnaA protein, abolishing or increasing the required transcription level of genes surrounding oriC or even partially deleted oriC sequence (iv) occurrence of abortive initiations of chromosome replication occurred at oriC under thymine starvation being associated to lethality; supporting initiation events are critical targets for the lethal injuries under thymine starvation concluding in TLD (v) were determined a very precisely study cell dimensions and nucleoid morphology under thymine starvation and recovery conditions. Surprisingly we observed instant cell division in short-term thymine-starved cells. This effect has important implications for the relationship between DNA replication and cell division, as results presented here establish a new mechanism never described until now.
The relationship between cell death and the initiation of replication events in thymine-starved cells may provide new avenues for the development of improved either chemotherapies or antibacterial or antifungal treatments based on thymine starvation.
Junta de Extremadura por la concesión de la beca y contrato
en práctica para la formación predoctoral del personal investigador. Ayuda de ACCIÓN I para la Iniciación a la Investigación, Desarrollo Tecnológico e Innovación del Vicerrectorado de Investigación e Infraestructura Científica de la Universidad de Extremadura; ayuda a grupos de investigación de el proyecto del MEC BFU2007-63942, Fellowship short-term EMBO, Ayudas para estancias cortas de la Universidad de Extremadura y ayuda a estancias de la SEG.
2014-07-31T11:40:55Z
2014-07-31T11:40:55Z
2014-07-31
2014-07-25
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/1782
0000-0003-3644-2604
eng
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oai:dehesa.unex.es:10662/3212021-12-16T11:31:10Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Estudio de los microdominios de sistemas redox y de transporte de calcio en la membrana plasmática de neuronas
Marques da Silva, Dorinda
Guitérrez Merino, Carlos
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Rafts lipídicos
Sistemas redox
Homeostasis del calcio
Lipid rafts
Redox systems
Calcium homeostasis
2403 Bioquímica
2490 Genética
3205.07 Neurología
Evidencias experimentales recientes sugieren que los sistemas transportadores de calcio más relevantes en neuronas están compartimentados en microdominios focalizados funcionalmente en la membrana plasmática. Por otra parte, estos sistemas son dianas para especies reactivas de oxígeno (ROS) y el estrés oxidativo y la alteración sostenida de la homeostasis del calcio intracelular en neuronas son características comunes en las enfermedades neurodegenerativas de mayor prevalencia. En trabajos previos de nuestro laboratorio se ha demostrado que el sistema redox, cuya desregulación produce sobreproducción de ROS en etapas tempranas de la apoptosis en neuronas granulares de cerebelo (CGN), forma una red de centros redox asociados a rafts lipídicos en la membrana plasmática.
En esta Tesis Doctoral se ha estudiado la composición y estructura de estos microdominios y se ha evaluado su importancia en la modulación recíproca entre los sistemas de señalización redox y los de señalización del calcio en neuronas. Se ha demostrado la presencia de L-VOCC, NMDAr, PMCA, NCX, nNOS y Cb5R en los sub-microdominios asociados a rafts lipídicos, se ha determinado la proximidad o intervalo de la distancia de separación entre ellos, así como la estabilidad de estos microdominios. Se ha verificado el efecto de la disrupción de los rafts lipídicos por depleción de colesterol en la homeostasis de calcio intracelular y se han identificado las proteínas quinasas de mayor relevancia para la regulación de la homeostasis del calcio citosólico por los sistemas de transporte de calcio identificados en los sub-microdominios asociados a rafts lipídicos de la membrana plasmática en las CGN.
Recent experimental evidences suggest that the major calcium transport systems of the neuronal plasma membrane are compartmented in functional and focalized microdomains. On the other hand, these transport systems are targets for reactive oxygen species (ROS) and oxidative stress and a sustained alteration of the intracellular calcium homeostasis in neurons are common features in the neurodegenerative diseases of high social incidence. Previous works of our laboratory have shown that the redox system whose deregulation leads to an overshot of ROS in the early stages of cerebellar granule neurons (CGN) apoptosis forms a large network of redox centres associated with lipid rafts of the plasma membrane.
In this Ph.D. work the composition and structure of these microdomains has been studied, and their relevance for the cross-modulation of redox and calcium cellular signalling in neurons has been evaluated. It has been demonstrated the presence of L-VOCC, NMDAR, the PMCA of NCX, nNOS and Cb5R on these sub-microdomains associated with lipid rafts, the proximity or distance interval of separation between them has been measured and the stability of these microdomains has been studied. In addition, the effect of lipid rafts disruption by cholesterol depletion in intracellular calcium homeostasis has been experimentally assessed and the most relevant kinase pathways that regulates cytosolic calcium homeostasis by calcium transport systems present in submicrodomains associated with lipid rafts in the plasma membrane of CGN in culture have been identified.
Ministerio de Ciencia e Innovación (BFU2007-67740); (BFU2011-30178)
Junta de Extremadura (GRU09119); (GR10092)
2012-11-14T11:50:36Z
2012-11-14T11:50:36Z
2012-11-14
2012-11-05
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/321
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oai:dehesa.unex.es:10662/24622023-08-24T09:19:26Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Catabolismo de furfurales y compuestos aromáticos en "Pseudomonas pseudoalcaligenes" CECT 5344. Aislamiento de nuevas cepas asimiladoras de cianuro y sus complejos metálicos
Macías Granados, Daniel
Blasco Pla, Rafael
Igeño González, María Isabel
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Pseudomonas pseudoalcaligenes CECT5344
Furfural
Cianuro
Cyanide
2302.04 Genética Bioquímica
2414.03 Metabolismo Bacteriano
2415.01 Biología Molecular de Microorganismos
El trabajo que se presenta en esta memoria de Tesis Doctoral se ha realizado en el
Grupo de Biotecnología de Microorganismos (BIOMIC) del Departamento de Bioquímica
y Biología Molecular y Genética de la Facultad de Veterinaria de la Universidad de
Extremadura.
“Pseudomonas pseudoalcaligenes” CECT 5344, una bacteria cianotrofa capaz de metabolizar eficientemente cianuro en su forma libre, resulta poco eficiente en la degradación de complejos metálicos. Debido a ello, se buscaron otras cepas bacterianas capaces de asimilar eficientemente estos complejos, centralizándose el estudio en “Achromobacter sp”. y “Microbacterium kitamiense”. El conjunto de ellas permitió una mayor detoxificación de los residuos cianurados procedentes de la industria joyera. Puesto que “P. pseudoalcaligenes” CECT 5344 únicamente podía asimilar cianuro como fuente de nitrógeno, se buscaron fuentes de carbono que permitieran una rápida asimilación de éste, siendo el octanoato y el DL-malato las más eficientes en la asimilación de cianuro. La secuenciación del genoma de “P. pseudoalcaligene”s CECT 5344 permitió identificar operones implicados en la asimilación de compuestos aromáticos, entre ellos los furfurales, compuestos inhibidores presentes en hidrolizados lignocelulósicos que posteriormente fermentan para dar bioetanol. La mutación en el gen edd permitió a la bacteria no asimilar glucosa, manteniendo intacta su capacidad metabólica en compuestos furánicos, resultando útil en la detoxificación de hidrolizados lignocelulósicos. El análisis transcriptómico de “P. pseudoalcaligenes” CECT 5344 cultivada en alcohol furfurílico permitieron ratificar la implicación del operón “hmf”, previamente descrito en “Cupriavidus basilensis” HMF14, en la asimilación de los compuestos furánicos, donde también está implicado el transportador de benzoato BenE1. Una mutación en este gen influyó negativamente en el crecimiento de la bacteria con compuestos furánicos. Además se observó la sobreexpresión del operón “liu”, cuya implicación en el metabolismo de éstos fue confirmada por mutagénesis en uno de sus genes.
“Pseudomonas pseudoalcaligenes” CECT 5344 is a bacterium able to assimilate free cyanide, although it is not effective at degrading metal-cyanide complexes. Other bacteria able to assimilate these complexes efficiently have been isolated, and the study has been focused on “Achromobacter sp.” and “Microbacterium kitamiense” that, apart from using metal-cyanide complexes as nitrogen sources, they also use jewelry residues efficiently in mixed cultures together with the CECT 5344 strain. In as much as “P. Pseudoalcaligenes” CECT 5344 only assimilates cyanide as a nitrogen source, carbon sources that can quickly assimilate cyanide have been studied, with the octanoate and the DL-malate being the most efficient ones. The “P. Pseudoalcaligenes” CECT 5344 genome sequencing allowed the operons involved in the assimilation of aromatic complexes to be identified, amongst others furfurals: inhibitor compounds present in lignocellulosic hydrolysates that later ferment to obtain bioethanol. The edd gene mutation prevented the bacterium assimilating glucose, leaving the furfural catabolism intact. Consequently, it could be useful for lignocellulosic hydrolysates pretreatment. The transcriptional profile (RNA-seq) of “P. Pseudoalcaligenes” CECT 5344 growing with furfuryl alcohol allowed to identify the expression of a lot of genes. This includes the “hmf” operon which is homologous to the one described in “Cupriavidus basilensis“ HMF14 but that includes a new gene, “benE1”, in which a new mutant was generated. A mutation in this gene negatively affected the growth of the bacterium with furan compounds. Furthermore, another mutant was created in another overexpressed operon (“liu”), and its involvement in the metabolism of furoate was demonstrated.
• Ministerio de Ciencia e Innovación: BIO2011-30026-C02-01
• Gobierno de Extremadura: PRI07A097 y Ayuda a Grupos-BioMic GR10165-CCV019
• Universidad de Extremadura: Beca de Investigación para licenciados dentro del programa de Captación y Formación de Recursos Humanos de Excelencia en Investigación, Desarrollo e Innovación.
• Fondo Europeo de Desarrollo Regional: FEDER 2007-2013
2015-01-16T12:31:33Z
2015-01-16T12:31:33Z
2015-01-16
2014-06-20
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/2462
0000-0002-9276-7318
0000-0003-4745-3827
0000-0003-3921-1553
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oai:dehesa.unex.es:10662/4432021-05-14T13:24:04Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Contribución al estudio de las funciones ecológicas que pueden desempeñar los compuestos derivados del metabolismo secundario en Cistus Ladanifer L.
Sosa Díaz, Teresa
Chaves Lobón, Natividad
Escudero García, José Carlos
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Estres en plantas
Cistus ladanifer
Actividad alelopática
Actividad Ca2+-ATPasa
Retículo sarcoplasmático
Stress in plants
Allelopathic activity
Ca2+-ATPase activity
Sarcoplasmic reticulum
3101.10 Reguladores del Crecimiento de Plantas
2417.15 Desarrollo Vegetal
Las plantas están sujetas a diferentes tipos de estrés, afectando negativamente a su crecimiento y supervivencia. Como respuesta sintetizan una amplia variedad de compuestos derivados del metabolismo secundario, a los cuales se les atribuyen importantes funciones ecológicas y fisiologicas. Cistus ladanifer secreta por hojas y tallos un abundante exudado constituido por compuestos derivados del metabolismo secundario, y por ello el objetivo principal de esta Tesis Doctoral es conocer qué funciones desempeñan estos compuestos en la planta y cómo contribuyen en esta especie a su capacidad competitiva frente otras.
De las funciones ecológicas atribuidas a estos compuestos, el estudio se ha centrado en la implicación de los mismos como agentes alelopáticos y antiherbívoros, poniéndose de manifiesto que C. ladanifer es una especie alelopática; los compuestos secretados por el exudado inhiben la germinación y desarrollo de plántulas herbáceas que compiten por los mismos recursos. Es de destacar, que los suelos asociados a esta especie también inhiben la genninación de herbáceas y que los aleloquímicos identificados en el exudado se incorporan al suelo. La presencia de estos compuestos en el suelo refuerza el potencial alelopático de C. ladanifer, ya que los compuestos con actividad alelopática se encuentran en el medio dónde van a ejercer su acción.
Por otro lado, la actividad antiherbívoro se ha puesto de manifiesto al demostrar la inhibición, por los constituyentes del exudado, de la actividad Ca2+-ATPasa del Retículo Sarcoplasmático, enzima implicada en la relajación-contracción de las fibras musculares. Por tanto, existiría una barrera antiherbívoro en las hojas y tallos de C. ladanifer, que por otra parte, sería más efectiva durante el verano. Este hecho es de gran relevancia, pues es en verano cuando las plantas están sujetas a mayores condiciones de estrés y el ataque por parte de herbívoros
2013-04-10T12:10:56Z
2013-04-10T12:10:56Z
2004
2004-02-22
doctoralThesis
publishedVersion
84-7723-636-4
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0000-0003-0096-9658
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Implicación de la adición de N-acetilcisteína en los medios de cultivo de gametos y embriones criopreservados
Matilla Pinto, Elvira
Álvarez Miguel, Ignacio Santiago
Macías García, Beatriz
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
N-acetilcisteína
Criopreservación
Germoplasma
N-acetylcisteine
Cryopreservation
Germplasm
2411.16 Fisiología de la Reproducción
3104.11 Reproducción
2407.01 Cultivo Celular
2407.03 Morfología Celular
La capacidad de criopreservar gametos o embriones de mamíferos se ha convertido en una técnica fundamental en las clínicas reproductivas. Se ha demostrado que la criopreservación y los crioprotectores alteran las propiedades físicas y químicas de las células. Además, la tolerancia al proceso varía dependiendo del material genético que se pretenda criopreservar. La congelación de semen epididimario es más dificultosa que la del semen eyaculado debido a que éste no ha tenido contacto con el plasma seminal (fuente principal de antioxidantes y colesterol). Por otro lado, la vitrificación de los ovocitos y los primeros estadios de desarrollo embrionario toleran peor el proceso debido a la baja permeabilidad de la zona pelúcida a los medios; además, los embriones producidos in vitro tienen una calidad inferior que los producidos in vivo, siendo más susceptibles de sufrir daños irreversibles durante la vitrificación. Por lo tanto, en los experimentos realizados en la presente Tesis Doctoral nos centramos en la mejora de los procesos de criopreservación de gametos y embriones en los estadios que presentan peor tolerancia al proceso. Analizamos el efecto de la adición de N-Acetilcisteína a ovocitos, embriones de ratón (2 células) y espermatozoides epididimarios criopreservados de toro de Lidia con el fin de determinar si el uso de este antioxidante mejora la calidad de los embriones y gametos tras la criopreservación. Además, se intentó determinar si tras la refrigeración prolongada a 4ºC (24-96 horas) el uso combinado de glicerol y dimetilformamida (DMF) mejoraba la calidad del semen de toro de Lidia post-descongelación.
Gamete and embryo cryopreservation is a widespread assisted reproductive technique. It has been demonstrated that the cryoprotectants used in the cryopreservation extenders as well as the process itself alter the chemical and physical proprieties of the plasma membrane of gametes/embryos. Furthermore, tolerance for cryopreservation notably varies depending upon the type of genetic material to be cryopreserved. Specifically, epididymal sperm cryopreservation is less successful than ejaculated sperm because it has had no contact with seminal plasma (the main source of spermatozoa antioxidant and cholesterol). On the other hand, oocytes and early embryonic stages exhibit lower tolerance for vitrification; in addition, the quality of the embryos produced in vitro is lower than the quality of those produced in vivo, being more susceptible to irreversible damage during vitrification. Therefore, in the experiments carried out in the present Doctoral Thesis we tried to improve gamete and embryo cryopreservation at the more susceptible stages to cryopreservation-induced damage. To achieve this goal, we analyzed the effect of N-acetylcysteine addition to vitrified murine oocytes and embryos (2-cell stage) at different time points as well as to cryopreserved Lidia bull epididymal spermatozoa in order to determine the effects of this antioxidant on cryopreservation outcome. In addition, the use of dimethylformamide (DMF) was tested on freezing extenders of Lidia bull epididymal sperm after prolonged storage at 4° C (24-96 hours).
2018-01-12T11:16:01Z
2018-01-12T11:16:01Z
2018-01-12
2017-11-24
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/6797
0000-0003-2352-7895
0000-0001-5331-9793
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Tipificación molecular y estudio de clonalidad de "Staphylococcus aureus" resistente a meticilina, productores de infecciones intrahospitalarias y extrahospitalarias en Extremadura
Molecular typing and study clonality of methicillin-resistant “Staphylococcus aureu”s, causing nosocomial and community acquired infections in Extremadura
Aguadero Acera, Vicente
González Velasco, María del Carmen
Merino Fernández, Jaime María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Genotipaje
Resistencia
Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM)
Genotype
Susceptibility
Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA)
Extremadura
2415.01 Biología Molecular de Microorganismos
La correcta vigilancia de la infección por Staphylococcus aureus Resistente a Meticilina(SARM) pasa por el conocimiento actualizado de las propiedades que la caracterizan en cada lugar. Los métodos de genotipaje, son armas valiosas para rastrear y limitar su propagación.
Pretendemos describir las características actuales de la infección por SARM en Extremadura, además de evaluar el método de genotipaje rep-PCR/DiversiLab®(DL), más rápido y sencillo que la técnica de referencia, Electroforesis en Campo Pulsado(PFGE).
Durante 2010 se coleccionan 309 SARM, aislados de muestras clínicas. Para cada uno se realiza un test de sensibilidad de 17 antibióticos, mediante tarjeta AST-588 Vitek 2® y E-test. Se genotipa mediante Electroforesis en Campo Pulsado(PFGE), spa-typing y DL, una muestra de 100 cepas, escogidas por muestreo aleatorio estratificado.
La prevalencia de SARM en Extremadura es 20,2%. La adquisición extrahospitalaria predomina en las áreas de menor población. El patrón de multirresistencia más frecuente es Tobramicina-Levofloxacino-Eritromicina. No se obtienen resistencias a Linezolid, Daptomicina o Tigeciclina, aunque el 42% presentan Sensibilidad Disminuida a Vancomicina. PFGE revela la existencia de 27 genotipos, con predominio de E8 y E7. Mediante DL se obtienen 18 patrones, con 4 mayoritarios. Spa-typing reporta 17 genotipos. Los índices estadísticos de Simpson y Rand, revelan que PFGE es la técnica con mayor poder discriminativo y que existe discorcordancia ente DL y PFGE. No se obtienen diferencias significativas en la distribución de genotipos entre las áreas sanitarias, así como en los ratios de resistencia entre los diferentes clones, pero se observan algunas tendencias que deben tenerse en consideración.
The correct surveillance and control of infeccion caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) needs of update knowledge of its specific properties in each place. Genotyping methods are valuable tools to monitor spread of SARM.
We try to describe the current characteristics of infection caused of MRSA in Extremadura, also evaluate the rep-PCR/DiversiLab ® (DL ) typing method, faster and easier than gold standard technique, pulsed field gel electrophoresis (PFGE).
During 2010 we collected 309 MRSA, isolates from clinical specimens. For each test susceptibility of 17 antibiotics were performed by Vitek 2 AST -588 and E -test ® card. A sample of 100 strains, selected by stratified random sampling, was genotyped by pulsed field gel electrophoresis (PFGE), spa -typing and DL.
The prevalence of MRSA in Extremadura was 20.2%. The community acquired predominated in areas of lower population. The most common multidrug resistance pattern was Tobramycin - Levofloxacin - Erythromycin . No linezolid- , daptomycin- or tigecycline-resistant strains were identified, although 42 % were reduced susceptibility to vancomycin. PFGE revealed the existence of 27 genotypes , predominantly E7 and E8. 18 patterns were obtained by DL, with 4 majority. Spa -typing reported 17 clones. Rand and Simpson´s statistical indices reported respectively that PFGE was the most discriminative technique and existed discordance between DL and PFGE. No significant differences in genotype distribution between health areas and in the resistance ratios between the different clones were obtained, however some trends that should be taken into consideration were observed.
2014-03-13T13:24:09Z
2014-03-13T13:24:09Z
2014-03-13
2014-03-06
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/1165
0000-0002-5316-9200
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251 p.
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Factores de naturaleza vascular y marcadores de inflamación como predictores de progresión a demencia en pacientes con deterioro cognitivo leve
Romero Sevilla, Raúl Mauricio
Casado Naranjo, Ignacio
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Deterioro cognitivo leve
Lesiones de naturaleza vascular
Demencia
Mild cognitive impairment
Vascular lesions
Dementia
3205.07 Neurología
3207.02 Arteriosclerosis
El deterioro cognitivo leve (DCL) es un estado intermedio entre la función cognitiva normal del envejecimiento y la demencia. El interés clínico de este síndrome descansa en su capacidad para predecir el desarrollo posterior de una demencia. Es crucial disponer de herramientas que permitan predecir esta progresión para desarrollar estrategias de prevención y tratamiento precoz. Mientras que parece claro que los factores de riesgo vascular clásicos se asocian con la aparición y progresión de las dos principales formas de demencia e incrementan el riesgo de presentar un DCL es escaso el conocimiento de su influencia sobre la progresión del mismo y apenas nada se sabe de la influencia de otros factores emergentes de naturaleza vascular sobre la aparición y progresión del DCL. El objetivo de la presente tesis doctoral consiste en determinar la tasa de conversión a demencia en una muestra de sujetos con DCL durante tres años de seguimiento. Así mismo analizar la influencia de diversos factores de riesgo implicados en este proceso, entre los cuales destacamos: la ateromatosis carotidea subclínica, la homocisteina, las lesiones de naturaleza vascular y ciertos marcadores inflamatorios. La tesis se ha estructurado en seis bloques: 1) Introducción; 2) Objetivos planteados para este estudio; 3) Descripción de la metodología; 4) Exposición de los resultados obtenidos; 5) Discusión de los datos dentro del entorno científico; y 6)Limitaciones y conclusiones extraídas.
Mild cognitive impairment (MCI) is an intermediate state between normal cognitive function of aging and dementia. The clinical relevance of this syndrome rests in their ability to predict subsequent development of dementia. It is crucial to have tools that can predict this progression to develop strategies for prevention and early treatment. While it seems clear that the traditional cardiovascular risk factors associated with the onset and progression of the two main forms of dementia and increase the risk of developing a DCL there is little knowledge of their influence on the progression of it and almost nothing is known about the influence of other emerging factors of vascular nature about the onset and progression of MCI. The aim of this thesis is to determine the rate of conversion to dementia in a sample of subjects with MCI for three years of monitoring. Also analyze the influence of various risk factors involved in this process, among which we highlight: subclinical carotid atherosclerosis, homocysteine, nature vascular lesions and certain inflammatory markers. The thesis is structured in six sections: 1) Introduction; 2) objectives for this study; 3) description of the methodology; 4) Presentation of the results obtained; 5) Discussion of the data within the scientific environment; limitations, and 6) Conclusions.
2016-06-17T08:43:56Z
2016-06-17T08:43:56Z
2016-06-17
2016-06-06
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/4311
0000-0001-6910-2089
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/4311
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Importancia de los sistemas de reciclaje celular en células procedentes de enfermos de Parkinson
Rodríguez Arribas, Mario
Fuentes Rodríguez, José Manuel
González Polo, Rosa Ana
Niso Santano, Mireia
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Enfermedad de Parkinson
Autofagia
LRRK2
Parkinson's disease
Autophagy
R1441G
Neurodegeneration
Neurodegeneración
2403 Bioquímica
2407 Biología Celular
2410.07 Genética Humana
2490 Neurociencias
El mecanismo de autofagia, por el que las células son capaces de reciclar componentes celulares para mantener la homeostasis celular, está desregulado en un amplio abanico de enfermedades, entre otras, las enfermedades neurodegenerativas. Estas suponen un problema de interés creciente como consecuencia del aumento de la esperanza de vida, y de la frecuencia de exposición a agentes predisponentes. En enfermedades complejas y de origen multifactorial, cualquier información que permita mitigar su sintomatología puede marcar la diferencia y ser considerado un gran avance en la lucha frente a estas patologías. La enfermedad de Parkinson es un proceso multifactorial dado que se caracteriza por tener un componente genético y ambiental, con implicación del envejecimiento. Dentro del componente genético, se conocen 21 genes con relación directa con esta patología, de los cuales, el gen que codifica para la proteína LRRK2 y, concretamente, sus mutaciones autosómicas dominantes, son las mayores responsables del desarrollo de enfermedad de Parkinson de origen genético. En este laboratorio se ha establecido una relación directa entre la presencia de la mutación G2019S de la proteína LRRK2 y una exacerbación de macroautofagia en fibroblastos humanos con repercusiones en la viabilidad celular. La mutación R1441G, cuya prevalencia es elevada en el País Vasco, es, por frecuencia, la segunda más importante. Por ello, la presente tesis doctoral plantea elucidar si esta mutación afecta al mecanismo de autofagia en fibroblastos humanos procedentes de enfermos de Parkinson que presentan esta mutación, tanto a nivel basal, como en presencia de inhibidores e inductores de este mecanismo.
Autophagy, for the greek “self eating”, is a cell mechanism responsible for degradation of cell components in order to maintain their homeostasis, however, it is commonly altered and compromised in several diseases, including neurodegenerative ones. These illnesses are growing importance because of the increase of the life span and time exposure to agents that may influence their progression. Thus, in such diseases with a multifactorial ethiology, any information that may mitigate or reduce their symptoms will be the key in establishing proper ways to face their progression. Parkinson´s disease (PD) can be considered as a multifactorial disease as environment, genetic factors and aging are involved. Within genetic factors, there is 23 gens involved in PD pathiology. Among them, LRRK2 protein and their mutations, inherited in an autosomal dominant manner, are responsible of most of genetic PD cases. In our lab, a relationship between G2019S LRRK2 mutation and an upregulation of macroautophagy that compromises cell viability has already been established. R1441G LRRK2 mutation is highly frequent in Basque Country, and, after G2019S, is the most important in PD pathogenesis. This doctoral dissertation aims to characterize whether this mutation affects autophagy mechanism in R1441G LRRK2 human fibroblasts obtained from PD patients in physiological conditions as well as in inhibition or induction of this mechanism.
Ministerio de Educación, Cultura y Deporte: Ayuda FPU13/01237
2018-09-13T11:18:05Z
2018-09-13T11:18:05Z
2018-09-13
2018-07-06
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/7922
0000-0002-6506-422X
0000-0001-6910-2089
0000-0002-0163-2953
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/7922
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Biogénesis de proteínas mitocondriales: dinámica y cooperaciones moleculares de la translocasa TIM22
Bermejo Vázquez, Jorge Luis
Campo Guinea, María Luisa
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Mitocondria
Translocasa TIM22
Canal aniónico dependiente de voltaje
Mitochondrial
Translocase TIM22
Voltage-dependent anion channel
2403 Bioquímica
En el presente trabajo se ha determinado el efecto que sobre la biogénesis de la translocasa de proteínas de la membrana interna mitocondrial, TIM22, ejerce cada una de las tres proteínas integrales de membrana descritas en este complejo: Tim22p, Tim18p y Tim54p, respectivamente, mediante aproximaciones genéticas y bioquímicas, y se han determinado los efectos estructurales que tienen sobre TIM22 inducidos por la disección molecular de esta translocasa. Se ha establecido la dinámica de las interrelaciones que la translocasa TIM22 y componentes y sistemas mitocondriales, TIM23, TOM y VDAC, considerados relevantes, ya sea por su abundancia o por su implicación en las diferentes rutas de transporte de proteínas mitocondriales. Para ello se han analizado: El grado de interrelación o independencia de la biogénesis de las translocasas de la membrana interna TIM22 y TIM23, mediante el efecto producido por la eliminación de uno o más de sus componentes esenciales. Las interacciones entre las dos membranas mitocondriales, a través de sus respectivas translocasas de proteínas: TOM perteneciente a la externa y TIM22 localizada en la interna, mediante el estudio del efecto producido en TOM por la alteración de la biogénesis de TIM22, y finalmente se ha detectado una novedosa interacción entre las dos membranas mitocondriales, a través de la translocasa TIM22 en la membrana interna y de la proteína más abundante de la membrana externa, la porina mitocondrial, mediante el estudio del efecto recíproco de la alteración de sus respectivas biogénesis.
In the present study, we have determined the effect about the biogenesis of translocase of the inner mitochondrial membrane, TIM22 makes every three integral membrane proteins of this complex: Tim22p, Tim18p and Tim54p, respectively, by genetic and biochemical approximations, and we have determined the structural effects induced about molecular dissection TIM22's. We have established the dynamics of interrelationships that the translocase TIM22 and mitochondrial components or systems, TIM23, TOM and VDAC, considered relevant, either because of their wealth or their involvement in the different transport routes mitochondrial proteins. For this we have been analyzed: The degree of interaction or independence of biogenesis of the inner membrane translocases TIM22 and TIM23, by the effect of removing one or more of its key components. The interactions between the two mitochondrial membranes, through their respective complexes: TOM and TIM22, by the studying of effect produced in TOM complex by the altering biogenesis of the TIM22 complex, and finally, we have detected a novel interaction between two mitochondrial membranes, through TIM22 in the inner membrane and the most abundant protein in the outer membrane, mitochondrial porin, by the studying of the reciprocal effect of altering their biogenesis.
• Junta de Extremadura, AyudasPRI - PRE09. Ref.: PRE09186
• Junta de Extremadura, Consejería de Economía, Comercio e Innovación. Ref.: PRI07A072
• Gobierno de España, Ministerio de Ciencia e Innovación. Ref.: BFU2008-00475/BMC (I+D+i)
• Gobierno de Extremadura y Unión Europea, a través del Fondo Social Europeo. Ref.: GRU0911 y GR10108
2015-10-14T11:34:35Z
2015-10-14T11:34:35Z
2015-10-14
2015-09-28
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/3405
0000-0001-7953-9452
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http://hdl.handle.net/10662/3405
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Relación entre la homeostasis del hierro y el metabolismo del cianuro en "Pseudomonas pseudoalcaligenes" CECT 5344
Becerra León, Gracia
Igeño González, María Isabel
Blasco Pla, Rafael
Merchán Sorio, Faustino
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Pseudomonas pseudoalcaligenes CECT5344
Hierro
Regulación
Iron
Regulation
2302.04 Genética Bioquímica
2302.09 Enzimología
El cianuro es un compuesto altamente tóxico debido a su alta afinidad por metales, como el hierro presente en el centro activo de algunas proteínas. A pH ácido pasa a fase gaseosa, pudiendo ser transportado a largas distancias desde la fuente de emisión. La bacteria “Pseudomonas pseudoalcaligenes” CECT5344, aislada de lodos del río Guadalquivir, asimila altas concentraciones de cianuro en condiciones extremas de alcalinidad. Para que una bacteria pueda crecer en presencia de cianuro requerirá de un sistema de adquisición de hierro muy eficiente, debido a que CN- y Fe3+ forman complejos metálicos muy estables que limitan la disponibilidad de este elemento. En muchas bacterias, la proteína Fur (“Ferric Uptake Regulator”), represor transcripcional, es el regulador global de la homeostasis del hierro. En “P. pseudoalcaligenes” CECT5344, Fur regula la expresión de más de 100 genes, la mayoría de ellos negativamente. Concretamente, la expresión de “fiuA” y “prrF” depende de la concentración de hierro en el medio y está regulada negativamente por Fur. El gen “prrF” codifica el sRNA PrrF, y es a su vez represor de acnA (Aconitasa A). PrrF actúa como sensor de la concentración de hierro intracelular, por ello, la elevada expresión de “prrF” en células cultivadas en medios con cianuro, supone la primera evidencia experimental de que el cianuro genera una señal de escasez de hierro en “P. pseudoalcaligenes” CECT5344. Los resultados obtenidos en esta tesis sugieren que Fur es fundamental en el metabolismo del cianuro en esta bacteria.
Cyanide is a highly toxic compound due to its high affinity for metals, such as iron of active site of some proteins. Cyanide is a gas at acidic pH, and it can be transported over long distances from the emission source.” Pseudomonas pseudoalcaligenes” CECT5344 is a bacterium isolated from the Guadalquivir river by its ability to use cyanide as nitrogen source at very alkaline pH. Since cyanide at high concentrations could cause iron deficiency, bacterial growth in presence of cyanide requires an efficient system of iron uptake. In many bacteria, Fur protein (Ferric Uptake Regulator), a transcriptional repressor, is a global regulator of iron homeostasis. In “P. pseudoalcaligenes” CECT5344 Fur regulates the expression of more than 100 genes, most of them negatively. Concretely, “fiuA” and “prrF” expression depends on the iron concentration in the medium and it is negatively regulated by Fur. “prrF” gene encodes the PrrF sRNA, and it is the repressor of “acnA” (Aconitase A) expression. PrrF is a sensor of intracellular iron concentration, therefore, the high expression of “prrF” gene in cyanide cultured cells brings the first experimental evidence that cyanide causes iron deficiency in the bacterium “P. pseudoalcaligenes” CECT5344. The results obtained in this thesis suggest the Fur is essential for cyanide metabolism in this bacterium.
- Ministerio de Ciencia e Innovación: BIO2008-04542-C02-02
- Ministerio de Ciencia e Innovación: BIO2011-30026-C02-01
- Gobierno de Extremadura: PRI07A097
- Gobierno de Extremadura: Ayuda a Grupos-BioMic GR10165-CCV019 y GRU09078
- Gobierno de Extremadura: Beca predoctoral (Fondo Social Europeo): PRE08041 (Proyecto PRI07A097)
- Fondo Europeo de Desarrollo Regional: FEDER 2007-2013
2013-11-04T10:28:52Z
2013-11-04T10:28:52Z
2013-11-04
2013-09-24
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/602
0000-0003-4745-3827
0000-0003-3921-1553
0000-0003-4540-5725
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http://hdl.handle.net/10662/602
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Interacción funcional del receptor de dioxina con reguladores del proceso de diferenciación celular y la regeneración pulmonar
Morales Hernández, Antonio
Fernández Salguero, Pedro María
Merino Fernández, Jaime María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Receptor de dioxina
Pluripotencia
Diferenciación
Dioxin receptor
Pluripotency
Differentiation
2403 Bioquímica
2407 Biología Celular
2409 Genética
2415 Biología Molecular
La importancia del receptor de dioxina en la regulación de procesos fisiológicos es cada vez más conocida. El correcto funcionamiento de las rutas que permiten a las células diferenciarse en un linaje concreto o conservar su pluripotencia tiene una crucial importancia tanto en el desarrollo normal del organismo como en la aparición de numerosas patologías. A lo largo de este estudio, se ha mostrado como AHR está implicado en el control de la diferenciación celular y el mantenimiento de la pluripotencialidad a través de mecanismos que suponen la transcripción de elementos retrotransponibles Alu y su procesamiento por la maquinaria de microRNAs. Además, está regulación llevaría asociados cambios en la capacidad proliferativa y en los niveles de miRNAs asociados a diferenciación celular que requieren de la interacción con la ruta Hippo. Estas evidencias se ven apoyadas por un modelo in vivo de regeneración pulmonar que confirma que AhR juega un papel notable en la regulación de la pluripotencia celular.
The role of the dioxin receptor in the regulation of physiological processes is increasingly known. The correct operation of the pathways that allow cells to differentiate into a specific lineage or retain their pluripotency is crucial both in normal development of the organism and in the appearance of numerous pathologies. Throughout this study, shown as AHR is involved in the control of cell differentiation and maintenance of pluripotency through mechanisms involving transcription of retrotransponibles Alu elements and processing machinery microRNAs. In addition, this regulation has associated changes in the proliferative capacity and miRNAs levels related with cell differentiation that require interaction with Hippo route. These evidences are supported by a in vivo lung regeneration model, confirming that AhR plays a significant role in the regulation of cell pluripotency.
- Ministerio de Economía y Competitividad (SAF2008-00462 y BFU2011-2267)
- Red Temática de Investigación Cooperativa en Cáncer RTICC (RD06/0020/1016)
- Gobierno de Extremadura: Plan de Ayudas a grupos (GR10008)
- Cofinanciación por programa FEDER
- Gobierno de Extremadura y Fondo Social Europeo: Beca de Formación del Personal Investigador
2015-04-27T08:03:36Z
2015-04-27T08:03:36Z
2015-04-27
2015-03-27
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/2845
0000-0002-5316-9200
0000-0003-2839-5027
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189 p.
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Hispana
TEXT
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Universidad de Extremadura
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Modulación de la señalización celular por fosforilación de STIM1: Implicaciones fisiológicas
Casas Rua, Vanessa
Martín Romero, Francisco Javier
Pozo Guisado, Eulalia
Álvarez Miguel, Ignacio Santiago
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
STIM1
Calcio
Fosforilación
Calcium
Phosphorylation
2407.01 Cultivo Celular
2302 Bioquímica
2415 Biología Molecular
En esta tesis doctoral se ha descrito que la proteína intracelular STIM1 se regula por fosforilación en los aminoácidos Ser575, Ser608 y Ser621. Esta fosforilación es llevada a cabo por las quinasas ERK1/2, y la fosforilación permite la activación de STIM1 para actuar como sensor de los niveles de Ca2+ intraluminales. La ausencia de esta fosforilación conlleva defectos en el nivel de multimerización de la proteína, y la ausencia de unión al canal de Ca2+ ORAI1, responsable de la entrada de Ca2+ extracelular hacia el citosol. Además, este trabajo pone de manifiesto que la fosforilación de STIM1 en los aminoácidos Ser575, Ser608 y Ser621 es necesaria para la disociación de la proteína de microtúbulos EB1, lo que le permite a STIM1 su reorganización hacia yuxtaposiciones del retículo endoplasmático y la membrana plasmática.
Por otro lado el trabajo ha descrito que esta fosforilación de STIM1 es un mediador clave en la señalización celular iniciada por el factor de crecimiento epidérmico (EGF) en células de adenocarcinoma endometrial humano (células Ishikawa), de modo que la desfosforilación de STIM1 reduce significativamente la migración de estas células y la transición epiteliomesénquima estimulada por EGF.
Finalmente el trabajo describe que la inhibición de la entrada de Ca2+ regulada por depósitos intracelulares (SOCE) mediada por la fitoalexina resveratrol es debida principalmente a la inhibición de la fosforilación de STIM1 y no a un efecto de bloqueo de los canales de Ca2+ regulados por STIM1.
In this Doctoral Thesis we have described that STIM1, an endoplasmic reticulum Ca2+ sensor, is regulated by phosphorylation at residues Ser575, Ser608 and Ser621. The upstream kinase for this phosphorylation is ERK1/2. As a result of this phosphorylation STIM1 becomes fully activated to act as a Ca2+ sensor by letting phosphoSTIM1 to multimerize and to bind to the Ca2+ channel ORAI1, which is the channel that mediates the Ca2+ influx to the cytosol in response to Ca2+-store depletion. In this regard, a defective phosphorylation abrogates the multimerization and the binding to ORAI1. Moreover this work demonstrates that phosphorylation of STIM1 at Ser575, Ser608 and Ser621 is required for the dissociation from the microtubule growing end regulator EB1. This dissociation let STIM1 to relocalize in endoplasmic reticulum-plasma membrane juxtapositions.
On the other hand, this Thesis describes that phospho-STIM1 is a key mediator in the signalling pathway triggered by the epidermal growth factor (EGF) in Ishikawa cells (endometrial adenocarcinoma cells), and dephospho- STIM1 inhibits cell migration and epithelial-mesenquimal transition in response to EGF.
Finally, this work describes that the phytoalexin resveratrol inhibits of storeoperated calcium entry by inhibiting the phosphorylation of STIM1 and not by acting as a Ca2+ channel blocker.
Este trabajo ha sido financiado con los proyectos PCJ1008, GR15077, de la consejería de Economía, Comercio e Innovación (Junta de Extremadura), PRIS11028 de Fundesalud, y proyectos BFU2008-0104 y BFU 2011-22798 del Ministerio de Economía y Competitividad.
2016-12-02T13:27:04Z
2016-12-02T13:27:04Z
2016-12-02
2016-07-25
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/4984
0000-0003-2352-7895
0000-0003-3486-6411
0000-0001-6796-7396
spa
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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Hispana
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/4984
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Papel de la proteína PINK1 en la enfermedad de Parkinson: relevancia del daño mitocondrial y/o autofagia
Gómez Sánchez, Rubén
Fuentes Rodríguez, José Manuel
González Polo, Rosa Ana
Niso Santano, Mireia
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Enfermedad de Parkinson
CCCP
PINK1
Parkinson's disease
2403 Bioquímica
2407 Biología Celular
2490 Neurociencias
La enfermedad de Parkinson (EP) se trata de un desorden neurodegenerativo para el que actualmente no hay cura, y se conoce poco sobre su etiopatogénesis, debido a su complejidad, con variables contribuciones de susceptibilidad genética y factores medioambientales. Uno de los factores de riesgo más importante es la edad, y en este sentido, una de las dianas principales son las mitocondrias, orgánulos involucrados en un gran número de funciones esenciales para la vida y la muerte (producción energética, síntesis de metabolitos, regulación apoptótica, homeostasis de calcio...). Entre los factores heredables, hay una serie de genes relacionados con esta enfermedad, cuyas mutaciones están vinculadas con disfunciones mitocondriales, destacando PINK1, parkina o DJ-1. El principal propósito de la presente tesis doctoral es el estudio del papel neuroprotector que desempeña la proteína PINK1 frente al daño mitocondrial. Asimismo, también abordamos la modulación de genes de expresión temprana tras un trastorno en este orgánulo. Los resultados de esta tesis doctoral muestran cómo la localización de PINK1 en mitocondrias dañadas está modulada por los niveles de calcio citosólico, influyendo realmente en la transcripción génica y no tanto en la estabilización de dicha proteína. Además, esta sobrecarga de calcio conduce a la activación de genes de expresión temprana como respuesta a este evento citotóxico. Por tanto, esta tesis doctoral muestra cómo las neuronas impulsan vías neuroprotectoras frente a agentes xenobióticos para reducir su impacto en la aparición y desarrollo de la EP.
Parkinson’s disease (PD) is a neurodegenerative disorder for which there is currently no cure, and little is known about its etiopathogenesis, because of its complexity, with variable contributions of genetic susceptibility and environmental factors. One of the most important risk factor is age, and in this sense, one of the main targets are mitochondria, organelles involved in a large number of functions essential to life and death (energy production, synthesis of metabolites, apoptotic regulation, calcium homeostasis ...). Among heritable factors, there is a number of genes related to this disease, whose mutations are associated to mitochondrial dysfunction, highlighting PINK1, parkin or DJ-1. The main purpose of this thesis is to study the neuroprotective role that PINK1 protein plays against mitochondrial damage. Furthermore, we also tackle the modulation of immediate early genes (IEG) after this organelle disorder. The results of this thesis show how the localization of PINK1 in damaged mitochondria is modulated by cytosolic calcium levels, actually influencing gene transcription rather than stabilizing the protein. Moreover, this calcium overload leads to activation of IEG in response to this cytotoxic event. Therefore, this thesis shows how neurons drive neuroprotective pathways against xenobiotics to reduce its impact on the emergence and development of PD.
- FUNDESALUD (Proyecto de investigación PRIS-11014)
- Gobierno de Extremadura (Proyecto de investigación GR10054)
- Instituto de Salud Carlos III (Proyecto de investigación PI11/00040, PI12/-02280 y CB06/05/0041
- Ministerio de Educación: Beca de Formación para el profesorado Universitario (FPU)
2013-07-15T11:33:43Z
2013-07-15T11:33:43Z
2013-07-15
2013-07-05
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/556
0000-0001-6910-2089
0000-0002-6506-422X
0000-0002-0163-2953
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Hispana
TEXT
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Universidad de Extremadura
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Mecanismos implicados en la protección de la apoptosis neuronal en células granulares de cerebelo por litio y valproato
Mora Corral, Alfonso
Centeno Velázquez, Francisco
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Biología celular
Neurofisiología
Bioquímica molecular
Cultivo celular
Molecular biochemistry
Neurophysiology
Cell biology
Cell culture
2302.21 Biología Molecular
2411.11 Neurofisiología
2407 Biología Celular
2407.01 Cultivo Celular
La apoptosis en los cultivos de neuronas granulares de cerebelo de rata inducida por en medio con bajas concentraciones de potasio se acompaña con una inactivación por desfosforilación de las vias de transduccion proapoptósticas p38 y JNK. De hecho, en condiciones basales ambas vías se encuentran activas. Ademas, estudiando las vías de supervivencia PI3K/PKB y ERK observamos tambien su inactivación, por desfosforilación de las quinasas de dichas vias. A su vez se ha observado que el medio proapoptótico induce la activación de la actividad serina/treonina fosfatasa de tipo 2A, 2B y 2C.
El Litio protege frente a la apoptosis inducida por el medio con bajas concentraciones de potasio, impidiendo la inactivación de la PKB y la activación de la GSK3. Como, además, el litio reduce la activación de las fosfatasas estudiadas planteamos la hipótesis de que el efecto neuroprotector del litio sea debido a que mantiene activa la vía antiapoptótica PI3K/PKB. Apoyando a la anterior hipótesis, hemos descrito que la protección del Litio frente a la ceramida se debe a que impide la desfosforilación de
PKB y GSK3 a traves de su bloqueo de la activación de la PP2A.
Por otro lado, el Valproato protege frente a la apoptosis inducida por el medio bajo en potasio siempre y cuando la via PI3K/PKB se encuentra activa. Su mecanismo protector parece estar relacionado con las reservas de calcio intracelulares, las cuales son necesarias para que el valproato ejerza su efecto neuroprotector.
Ministerio de Educación y Ciencia(PB95-1227; PB98-0992)
Junta de Extremadura (PB98A003; IPR00C009)
Junta de Extremadura. Consejería de Sanidad(00/05)
2013-07-01T10:11:09Z
2013-07-01T10:11:09Z
2002
2001-11-15
doctoralThesis
publishedVersion
84-7723-528-7
http://hdl.handle.net/10662/546
0000-0001-6154-5424
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Estrés osmótico, inflamación y degeneración neuronal en la enfermedad de Alzheirmer: implicación de la proteína asociada a microtúbulos tau
Caballero Bermejo, Montaña
Centeno Velázquez, Francisco
Lorenzo Benayas, María Jesús
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Tau
Citoesqueleto
Inflamación
Estrés hiperosmótico
Fosforilación
Proteólisis
Señalización intracelular
Cytoskeleton
Inflammation
Hyperosmotic stress
Phosphorylation
Proteolysis
Cellular signaling
Alzheimer’s disease
Enfermedad de Alzheimer
2490 Neurociencias
La enfermedad de Alzheimer es un desorden neurodegenerativo que se caracteriza por la presencia de los denominados ovillos neurofibrilares que son depósitos intraneuronales compuestos principalmente por la proteína asociada a microtúbulos Tau hiperfosforilada y proteolizada. En el presente trabajo hemos estudiado los mecanismos que regulan las modificaciones postraduccionales de Tau inducidas por el estrés hiperosmótico e inflamatorio. Nuestros resultados muestran que sólo el estrés hiperosmótico induce la proteólisis de Tau y la apoptosis y que estos efectos están mediados por la activación de las caspasas 6 y 3, través de un mecanismo en el que están implicadas las quinasas JNKs. En este trabajo estudiamos el efecto del estrés hiperosmótico y la neuroinflamación sobre los niveles y la fosforilación de Tau y las vías de señalización intracelular implicadas en este proceso. Nuestros resultados muestran que sólo el tratamiento con TNF-α induce la expresión génica de Tau y que ambos tipos de estreses promueven su fosforilación en los residuos Thr-50, Thr-181 y Thr-205 mediada principalmente las quinasas p38 y las JNKs.
Adicionalmente, analizamos distribución de la proteína Tau fosforilada y sin fosforilar y comprobamos que ambos tipos de estreses promovían la acumulación de Tau en el soma de la célula (citoplasma y núcleo) y que modificaban la localización de las formas fosforiladas de Tau de una manera específica del residuo fosforilado. También comprobamos que las modificaciones en la fosforilación y la localización de Tau en respuesta al estrés hiperosmótico se acompañaban de la desorganización del citoesqueleto y que las promovidas por la inflamación producían una disminución en el transporte axonal.
Por último, el análisis funcional de Tau mutada en los residuos Thr-50 y Thr-69 realizado en las células HEK-293 y PC-12 diferenciadas nos indica que ambos residuos son esenciales para su funcionalidad.
Alzheimer’s disease is a degenerative brain disorder characterized neuropathologically by the presence of neurofibrillary tangles, which are intracellular aggregates of hyperphosphorylated and proteolyzed Tau, a protein associated to microtubules. In this work we studied the mechanisms that regulate the posttranslational modifications of Tau induced by hyperosmotic stress and neuroinflammation. Our results show that only the hyperosmotic stress promotes Tau proteolysis and apoptosis in SH-SY5Y cells. These effects are mediated by the activation of caspases 6 and 3 through a mechanism that involved JNKs.
We also studied the effect of hyperosmotic stress and neuroinflammation on Tau expression and phosphorylation and the signaling pathways involved. Our results show that only TNF-α treatment increases Tau expression and that both stimuli induce Tau phosphorylation at Thr-50, Thr-181 and Thr-205. This last process is regulated mainly by p38s and JNKs.
Additionally, we analyzed Tau distribution (phosphorylated or not) and we observed that both stresses promote Tau accumulation in soma (in cytoplasma and nucleus), and also modify the location of phosphorylated Tau in a site-specific manner. We showed also that modifications of Tau phosphorylation and distribution in response to hyperosmotic stress were associated to cytoskeleton disorganization and that inflammation impairs axonal transport.
- Junta de Extremadura: beca de Formación de Personal Investigador
- Organización Europea de Biología Molecular (EMBO): beca para estancias breves
- Junta de Extremadura: proyectos PRI06A202, GRU08018, PRIS0933, GRU09056, PRIS10018 y GRU10046
- Ministerio de Ciencia e Innovación (actual Ministerio de Economía y Competitividad): proyecto BFU2007-67577-CO2-02/BMC
2016-02-08T11:27:28Z
2016-02-08T11:27:28Z
2016-02-08
2015-12-18
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/3820
0000-0003-4416-0615
0000-0001-6154-5424
spa
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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275 p.
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Hispana
TEXT
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Universidad de Extremadura
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Regulación de la diferenciación celular por retrotransposones Alu: modificaciones estructurales en la cromatina e implicación en la maduración de células germinales
González Rico, Francisco Javier
Fernández Salguero, Pedro María
Román García, Ángel Carlos
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Cáncer
Cromatina
Diferenciación
Dioxin
Transposon
Nuage
2302 Bioquímica
2407 Biología Celular
La accesibilidad de la cromatina define los patrones de expresión espaciales y temporales durante la diferenciación celular. Esta conformación de la cromatina es modulada por retrotransposones, debido a su capacidad de unión a factores de transcripción y otras proteínas asociadas. El proceso a través del cual ocurren estas interacciones a nivel molecular es ampliamente desconocido. Utilizando ensayos de “enhancer blocking”, demostramos que tres retrotransposones “Alu” flanqueantes a los genes de pluripotencia NANOG y OCT4 poseen una elevada actividad aisladora gracias a la unión de AhR (receptor de dioxina) a la secuencia del transposón. Los análisis de marcas de histonas revelaron diferentes patrones de metilación de me3H3K4, me3H3K9 y me3H3K27 dependientes de la expression de AhR, los cuales cambiaban durante la diferenciación por ácido retinoico. Mediante experimentos de captura de la conformación de la cromatina (3C) desvelamos interacciones físicas a larga distancia entre los “Alu(s)” flanqueantes de NANOG. Los resultados obtenidos muestran que la frecuencia de interacción cambia durante la diferenciación, sugiriendo la formación de un bucle de cromatina. Este bucle desaparece con el silenciamiento de AhR, implicando la participación del mismo en el proceso. Para extraer el complejo proteico contenido en el bucle de NANOG, utilizamos una modificación del protocolo CRISPR-Cas9 (enChIP-Cas9), identificando las proteínas asociadas mediante espectrometría de masas. En esta tesis proponemos que los retrotransposones “Alu” regulados por AhR son unos elementos aisladores conservados evolutivamente en el genoma capaces de controlar procesos oncogénicos, de desarrollo y toxicológicos a través de modificaciones de la heterocromatina.
Local chromatin accessibility (CA) defines spatial and temporal gene expression patterns during cell differentiation. This chromatin conformation is modulated by transposable elements (TE), likely because of their ability to bind specific transcription factors (TF) and other associated proteins, becoming insulators and boundaries elements. How these three elements, CA, TEs and TFs are interacting at the molecular level in differentiation processes is largely unknown. By using enhancer blocking assays (EBAs) we report that three “Alu(s)” retrotransposon located in the flanking regions of pluripotency genes NANOG and OCT4 have potent insulation activity conferred by binding the TF dioxin receptor (AhR) to consensus elements present in the transposon sequence. The analyses of histone marks revealed different methylation patterns of me3H3K4, me3H3K9 and me3H3K27 upon AhR expression. Notably, these epigenetic profiles changed during differentiation with retinoic acid (RA). We performed chromosome conformation capture (3C) to address long-range physical interactions between the “Alu(s)” flanking NANOG. The results obtained showed that the interaction frequency changes drastically with RA differentiation, suggesting the formation of a new chromatin loop. Interestingly, such loop disappears by AhR knock-down, implying the involvement of AhR in the process. In addition, to extract the protein complex contained in the NANOG loop without contamination from other regions, we used a modification of CRISPR-Cas9 protocol known as enChIP-Cas9. Then, enChIP-mass spectrometry (enChIP-MS) targeting endogenous loci identified associated proteins. We propose that AhR-regulated “Alu(s)” elements represent evolutionary conserved genome-wide insulators that control developmental, oncogenic or toxicological-dependent processes via physical heterochromatin modifications.
2018-08-21T07:20:33Z
2018-08-21T07:20:33Z
2018-08-21
2018-07-02
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/7793
0000-0003-2839-5027
0000-0002-5868-6768
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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153 p.
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/7793
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Papel del receptor de dioxina en la regulación de la adhesión y migración celular en fibroblastos: interacciones con Integrina β1 y Caveolina 1
Rey Barroso, Javier
Fernández Salguero, Pedro María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Receptor de dioxina
Adhesión celular
Migración celular
Dioxin receptor
Cell adhesion
Cell migration
2407.01 Cultivo Celular
Este trabajo ha sido financiado con proyectos del Ministerio de Economía y Competitividad (SAF2008-00462 y BFU2011-22678), de la Red Temática de Investigación Cooperativa en Cáncer RTICC (RD06/0020/1016) y del Plan de Ayuda a grupos de la Junta de Extremadura (GR10008). Toda la financiación recibida está y co-financiada por el programa FEDER de la Unión Europea. Javier Rey Barroso ha sido beneficiario de mediante una beca de Formación del Profesorado Universitario (FPU, convocatoria de 2008) del Ministerio de Educación y Ciencia, y de una bolsa de viaje para estancias cortas de la RTICC (Convocatoria de 2009).
El receptor de dioxina (AhR) es un factor de transcripción con gran peso tanto en toxicología ambiental como en fisiología. Por otra parte, los procesos de adhesión celular y migración han mostrado su importancia tanto en homeostasis como en patología. Este trabajo se centra en estudiar el papel del receptor de dioxina en ambas funciones celulares utilizando fibroblastos de ratón. Éste se ejerce a través del control de la activación de la integrina β1 y la localización y funcionalidad de caveolina 1. En el primer caso, la regulación se produce a través de la combinación del control de la expresión de fibronectina y de la ruta de señalización Cbp-Csk-Src.y tiene consecuencias en la forma celular, la velocidad de migración y la capacidad de contracción e invasión de matriz celular. Por otra parte, la regulación de caveolina 1 por parte de AhR implica cambios en la localización celular de la proteína, así como la sublocalización en dominios específicos de membrana (rafts) y está implicada en la capacidad de reorientación de la célula así como en la de endocitosis vía caveolas. En este caso, el control no se debe a cambios en el estado de fosforilación de caveolina 1 en su residuo Y14 pero sí a cambios en los niveles de colesterol intracelulares, regidos por el receptor de dioxina. Globalmente los resultados ayudan a comprender la importancia de AhR en la fisiología celular, así como las rutas por las cuales ejerce sus funciones.
The dioxin receptor (AhR) is a transcription factor with an important role in enviromental toxicology and physiology. Apart from that, cell adhesion and migration processes have shown to be crucial both in homeostasis and pathology. The present work focuses in the study of the role of the dioxin receptor in both cellular functions by using mouse fibroblast. This role is done through the control of integrin β1 activation and the location and functionality of caveolin 1. In the first case, the regulation is driven by the combination of fibronectin expression control and the Cbp-Csk-Src pathway and has consequences in cellular shape, migration speed and contraction and matrix invasion capabilities. On the other hand, the caveolina 1 regulation by AhR involves changes in cellular location of the protein, as well as the sublocation in specific membrane domains (rafts) and is involved in cell re-orientation capability and endocytosis via caveolae. In this case, the control is not caused by phosphorylation state changes in Y14 residue of caveolina 1, but it does it in the case of intracellular cholesterol changes, driven by the dioxin receptor. Globaly, th results help us to understand the importance of AhR in cellular physiology as well as the pathways by AhR execute its functions.
2014-01-14T11:54:10Z
2014-01-14T11:54:10Z
2014-01-14
2013-11-22
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/833
0000-0003-2839-5027
spa
Creative Commons Attribution- NonCommercial-NoDerivs 3.0 License
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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173 p.
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Hispana
TEXT
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/833
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Reorganización del citoesqueleto regulada por STIM1 y ORAI1
López Guerrero, Aida María
Martín Romero, Francisco Javier
Pozo Guisado, Eulalia
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
STIM1
ORAI1
Señalización de calcio
Migración
Calcium signaling
Migration
2302 Bioquímica
2407 Biología Celular
2415 Biología Molecular
2411 Fisiología Humana
Tesis doctoral con la Mención de "Doctor Internacional"
En esta Tesis Doctoral se ha descrito el papel de STIM1 y ORAI1, los principales mediadores de la entrada extracelular de Ca2+ (SOCE), en la formación de las ondas y protrusiones de membrana plasmática, conocidas como ruffles, y la remodelación del citoesqueleto necesaria para la migración celular. Previamente al estudio del citoesqueleto hemos abordado el estudio de la interdependencia de ERK1/2, principal activador de STIM1, y SOCE para determinar si existe una contribución real de SOCE sobre la actividad de ERK1/2. Nuestros resultados confirmaron que la activación de ERK1/2 en respuesta a EGF es independiente al influjo de Ca2+ extracelular. En relación al estudio del citoesqueleto nuestros resultados muestran que STIM1 fosforilado se concentra en el frente de células en migración, y también que ORAI1 co-localiza con cortactina (CTTN), un regulador del citoesqueleto en regiones de ruffling de membrana. Mediante la utilización del sistema de edición genómica CRISPR/Cas9 en células U2OS se generaron las líneas celulares STIM1-KO y ORAI1-KO. En ambas líneas se observó una notable reducción de SOCE. Además, estas líneas KO presentan un menor número de ruffles de membrana y una dinámica de citoesqueleto débil y más lenta con respecto a las células U2OS wild-type. Todo ello permite concluir que STIM1 y ORAI1 son los principales mediadores del influjo de Ca2+ extracelular que permite el ruffling de membrana necesario para la migración celular. Además, nuestros datos revelaron que ORAI1 co-precipita con CTTN, y que esta interacción es dinámica y sensible al estado de llenado de depósitos intracelulares.
In this Doctoral Thesis we have described the role of STIM1 and ORAI1, the two major components of SOCE, in the promotion of membrane ruffling required for the reorganization of the cortical cytoskeleton at the leading edge of migrating cells. Previously to the cytoskeletal study we described the interdependence of ERK1/2 and store operated calcium entry (SOCE). In this regard, our results revealed that the activation of ERK1/2 is STIM1- and SOCE-independent. Regarding to the study of the cytoskeleton, in the present work we described that phospho-STIM1 localizes at the leading-edge of cells, and that both phospho-STIM1 and ORAI1 co-localizes with cortactin (CTTN), a regulator of the cytoskeleton at membrane ruffling areas. STIM1-KO and ORAI1-KO cell lines were generated by CRISPR/Cas9 system in U2OS cells. In both cases, KO cells presented a notable reduction of SOCE, together with a striking decrease of the membrane ruffling, compared with U2OS wild-type cells. These results demonstrated that SOCE regulates membrane ruffling at the leading edge of cells. Moreover, we showed that ORA1 co-immunoprecipitated with CTTN. This latter result, in addition to the KO cells phenotype and the preservation of ORAI1-CTTN co-localization during ruffling, further support a functional link between SOCE and membrane ruffling.
• Ministerio de Economía y Competitividad: Proyectos BFU2011-22798 y BFU-51402-P
• Junta de Extremadura-Fondo Social Europeo: Proyecto GR15077
• Ministerio de Economía y Competitividad del Gobierno de España: Beca predoctoral de Formación del Personal Investigador (FPI) BES-2012-052061
• Federación Europea de Sociedades de Bioquímica: Beca de estancia en el extranjero FEBS Summer Felowship
• Universidad de Extremadura: Ayuda puente para becarios predoctorales (Acción III) dentro del Plan de Iniciación a la Investigación.
2017-09-12T10:21:21Z
2017-09-12T10:21:21Z
2017-09-12
2017-07-21
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/6140
0000-0003-0350-2228
0000-0001-6796-7396
0000-0003-3486-6411
spa
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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189 p.
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Hispana
TEXT
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/6140
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Localización y organización de la maquinaria de replicación y de síntesis de nucleótidos en 'Escherichia coli'
Sánchez Romero, María Antonia
Jiménez Sánchez, Alfonso
Molina Rodríguez, Felipe Roberto
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Replicación
Síntesis de nucleótidos
Escherichia coli
Replication
Nucleotide synthesis
2302.21 Biología Molecular
2415.01 Biología Molecular de Microorganismos
El ciclo celular de bacterias creciendo lentamente es bastante similar al de células eucarióticas, en las que la replicación y la segregación cromosómica concluyen antes de la división celular. Sin embargo, en células creciendo rápidamente, los ciclos de replicación se solapan y las células presentan los replisomas, iniciados en un mismo origen, agrupados durante todo el ciclo celular. Se ha comparado la organización de las horquillas de replicación en cultivos con diferentes tipos de ciclos celulares, estirpes y técnicas utilizadas para su determinación. Los resultados muestran que la asociación de las horquillas de replicación es dependiente del tipo de ciclo celular.
El análisis conjunto de los focos de las proteínas del replisoma, horquillas de replicación analizadas por los focos SeqA y proteína RNR indica que la mayoría de las células presentan el mismo número de focos de estas cuatro proteínas. La relación espacial entre ambos complejos, analizada mediante las distancias interfocales, muestra un alto porcentaje de colocalización entre ellos. Estos resultados demuestran una estrecha relación entre el replisoma y el complejo de síntesis de nucleótidos, lo que sugiere la existencia de una estructura superior denominada hiperestructura de replicación.
En un mutante en la ribonucleósidodifosfato reductasa, que tiene comprometida la maquinaria de síntesis de nucleótidos a la temperatura restrictiva, tanto la replicación como la segregación de los cromosomas y la división celular están afectadas. Estos resultados refuerzan la idea de que la RNR juega un papel funcional y estructural importante conectando, a través de la hiperestructura de replicación, la síntesis de nucleótidos con el resto de procesos básicos del ciclo celular.
Junta de Extremadura (Beca Personal Investigador; GRU08032)
Ministerio de Educación y Ciencia (BFU2007-63942)
2013-04-18T09:55:43Z
2013-04-18T09:55:43Z
2009
2009-01-23
doctoralThesis
publishedVersion
9788469263136
http://hdl.handle.net/10662/458
0000-0002-9167-7097
spa
Creative Commons Attribution- NonCommercial-NoDerivs 3.0 License
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openAccess
194 p.
application/pdf
Universidad de Extremadura. Servicio de Publicaciones
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Hispana
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/458
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Diabetes mellitus y su relación con deterioro cognitivo en atención primaria
Risco Solanilla, José Carlos
Suárez González, Félix
Vaz Leal, Francisco J.
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Diabetes
Deterioro cognitivo
Control metabólico
Cognitive impairment
Metabolic control
3201.07 Geriatría
3201.04 Patología Clínica
3205.07 Neurología
3207.04 Patología Cardiovascular
3207.11 Neuropatología
3210 Medicina Preventiva
3212 Salud Publica
El incremento de la expectativa de vida de la población ha originado aumento en la frecuencia de enfermedades que aparecen en edades avanzadas. Es importante investigar el deterioro cognitivo dado que su impacto es de gran alcance. No afecta sólo a la salud y al bienestar del paciente, sino que también está asociado a una pesada carga para el cuidador, un aumento del uso de los servicios sanitarios y necesidades de cuidado a largo plazo, además de una sangría de los recursos sociales y personales. Esta patología se desarrolla durante años antes de hacerse notar los síntomas y deficiencias. Por lo tanto, los estudios deben evaluar los factores de riesgo modificables que actúan en las primeras etapas de la enfermedad. Identificar estos factores pondrán de manifiesto, probablemente, el gran potencial a la hora de reducir de forma eficaz la carga de esta enfermedad en décadas posteriores mediante de esfuerzos de prevención primarios y secundarios. Unos de los factores de riesgo relacionados con esta enfermedad es la diabetes mellitus, debido a: la lesión vascular cerebral, que puede contribuir a la isquemia cerebral; metabolismo alterado de las proteínas ABeta y tau, que lleva a la formación de placas neuríticas y ovillos; aumento de los factores inflamatorios y de las especies de oxígeno reactivas. Por este motivo, este estudio puede contribuir a abrir una nueva era en el campo de la prevención del deterioro cognitivo.
The increase in the life expectancy of the population has caused an increase in the frequency of diseases that appear in advanced ages. It is important to investigate cognitive Impairment as its impact is far-reaching. It does not only affect the health and well-being of the patient, it is also associated with a heavy burden for the caregiver, an increase in the use of health services and long-term care needs, as well as a drain on social and personal information. This pathology develops for years before symptoms and deficiencies become noticeable. Therefore, studies should evaluate the modifiable risk factors that act in the early stages of the disease. Identifying these factors will probably reveal the great potential in effectively reducing the burden of this disease in subsequent decades through primary and secondary prevention efforts. One of the risk factors related to this disease is diabetes mellitus, due to: cerebral vascular injury, which may contribute to cerebral ischemia; altered metabolism of ABeta and tau proteins, leading to the formation of neuritic plaques and tangles; increased inflammatory factors and reactive oxygen species. For this reason, this study can contribute to opening a new era in the field of cognitive impairment prevention.
2018-07-02T09:41:14Z
2018-07-02T09:41:14Z
2018-07-02
2018-02-16
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/7635
0000-0002-4872-3924
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163 p.
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/7635
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Expresión y función de la quinasa activada por AMP, AMPK, en el espermatozoide humano
Expression and function of the AMP-activated kinase, AMPK, in human spermatozoa
Calle Guisado, Violeta
García Marín, Luis Jesús
González Fernández, Lauro
Bragado González, María Julia
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Espermatozoides
Proteína quinasa activada por AMP (AMPK)
Señalización intracelular
Humano
Spermatozoa
AMP - activated protein kinase (AMPK)
Intacellular signaling
Human
2403 Bioquímica
2407 Biología Celular
2411.16 Fisiología de la Reproducción
Tesis por compendio de publicaciones
En la presente Tesis Doctoral nos planteamos la hipótesis de que la proteína AMPK puede representar una nueva vía de señalización intracelular que podría regular las funciones del espermatozoide humano. Los objetivos que nos planteamos fueron los siguientes: 1) Identificar y estudiar la localización intracelular de la proteína AMPK y de su forma activa (fosforilada) en el espermatozoide humano. 2) Investigar la relación entre la actividad de la AMPK y la calidad del espermatozoide humano. 3) Estudiar la implicación de la vía de la AMPK en los principales procesos funcionales del espermatozoide humano. 4) Investigar el efecto del activador indirecto de la AMPK, metformina, en la fisiología del espermatozoide humano, debido a su amplio uso clínico. Los resultados obtenidos nos han permitido concluir que: 1) La proteína AMPK y su forma activa han sido identificadas en el espermatozoide humano y se localiza en el acrosoma, la pieza media y el flagelo mientras que la forma activa se restringe al flagelo y al acrosoma. 2) La AMPK está más activa en la población de espermatozoides humanos de mayor calidad. 3) La proteína AMPK regula la motilidad del espermatozoide humano, aunque no está implicada en el mantenimiento de la viabilidad, del potencial de membrana mitocondrial, de la integridad de la membrana acrosomal y tampoco en la producción mitocondrial de especies reactivas de oxígeno ni en la traslocación de fosfatidilserina hacia la cara externa de la membrana plasmática. 4) El fármaco metformina provoca una disminución de la motilidad en el espermatozoide humano.
The present Doctoral Thesis hypothesized that the AMPK may represent an intracellular signalling pathway that regulates human sperm function. The objectives were: 1) To identify and determine the intracellular location of AMPK and its active form (phosphorylated) in human spermatozoa. 2) To investigate the possible relationship between AMPK activity and human sperm quality. 3) To study the role of the AMPK pathway in the main physiological processes of human spermatozoa. 4) To investigate the effect of the indirect activator of AMPK, metformin, in the physiology of human spermatozoa, due to its current clinical use. The scientific data included in this Doctoral Thesis allowed us to reach the following conclusions: 1) AMPK, as well as its active form, were identified in human spermatozoa and is located in the acrosome, midpiece and flagellum and its phosphorylated whereas her active form is restricted to the flagellum and the acrosome. 2) AMPK is more active in human spermatozoa exhibiting higher quality. 3) AMPK regulates motility in human spermatozoa. Nevertheless, AMPK is not involved in other functional processes of human spermatozoa, such as spermatozoa viability, mitochondrial membrane potential maintenance, acrosomal membrane integrity, mitochondrial reactive oxygen species production or translocation of phosphatidylserine to the outer leaf of the membrane. 4) Metformin causes a decrease in sperm motility.
• Fundación Tatiana Pérez de Guzmán el Bueno: PRE/FT2014-28, en 2014
• Ministerio de Educación, Cultura y Deporte (MECD): Contrato predoctoral , dentro del Programa de Formación del Profesorado Universitario (FPU14/03449) en 2015
• European Molecular Biology Organization (EMBO): estancia predoctoral en el “Laboratorio di Biologia dello spermatozoo di DMSC-Sezione di medicina critica e meidicine specialistiche” en la Universitá degli Studi de Firenze
• Fondo Social Europeo (FSE) y Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER)
2019-09-12T12:31:18Z
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2019-09-12
2019-07-17
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/9706
0000-0002-1795-7381
0000-0001-7770-0775
0000-0001-6399-1081
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164 p.
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/9706
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El factor de transcripción Nrf2 como nueva diana terapéutica para la Enfermedad de Parkinson
Pizarro Estrella, Elisa
Fuentes Rodríguez, José Manuel
González Polo, Rosa Ana
Niso Santano, Mireia
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Enfermedad de Parkinson
Nrf2/Keap1
Estrés oxidativo
Autofagia
Lisosoma
Parkinson's disease
Oxidative stress
Autophagy
Lysosome
2403 Bioquímica
2407 Biología Celular
2490 Neurociencias
Casi doscientos años después de ser descrita por el doctor inglés James Parkinson, la enfermedad de Parkinson (EP) continúa estando rodeada por un halo de misterio, que la hace hasta la fecha una patología incurable. En su enorme complejidad y etiología, radica la falta de éxito para su control, ya que en la EP se ven inmersos múltiples factores internos entre los que se encuentran genes (genes PARK) y sus productos las proteínas, metabolitos, procesos electrofisiológicos… así como agentes externos, influidos por el propio estilo de vida, entre los que destacan la exposición a herbicidas (paraquat, rotenona..) y otros factores medioambientales. A pesar de que el estudio de estos factores parece resultar insuficiente para el conocimiento completo de la enfermedad, todo apunta que es en la interacción entre todos ellos dónde existe la clave para su total conocimiento. Por ejemplo, la interactuación de los factores mencionados anteriormente afecta a la maquinaria antioxidante y a los sistemas de degradación y desintoxicación celular, entre los que se encuentran la autofagia, el sistema ubiquitina-proteasoma y la vía antioxidante Nrf2/Keap1, y éstos a su vez están íntimamente asociados a la EP. De manera que el efecto acumulativo, sinérgico y subyacente del fallo de estos procesos bioquímicos, que abarcan múltiples niveles dentro de la jerarquía biológica, son los que promueven la pérdida neuronal a lo largo del tiempo.
El objeto de la presente tesis doctoral es el estudio del papel neuroprotector que ejerce la vía antioxidante Nrf2/Keap1 así como de su íntima relación con el proceso autofágico, demostrándose una mayor sensibilidad en las células expuestas a agentes medioambientales que presentan una alteración en dicha vía. La tesis se ha estructurado en seis bloques: 1) introducción a la EP; 2) enumeración de los objetivos planteados en este trabajo; 3) descripción de la metodología seguida; 4) exposición de los resultados obtenidos; 5) discusión de los datos dentro del entorno científico; 6) conclusiones extraídas.
Almost two hundred years past after it was fisrt described by the English doctor James Parkinson, Parkinson’s disease (PD) still remains to be mysterious and incurable. Our lack of real success in controlling the disease is in large part due to its enormous complexity. PD involves uncounted internal factors, such as genes (PARK genes) and their products the proteins, metabolites, electrophysiological features and external factors related to lifestyle choices and, presumably, exposures to pesticides (paraquat, rotenone) and other enviromental factors. But it is not enough by a long shot to list the many contributors to the disease. Instead, it is the system of functional interactions among these contributors that makes the disease so complicated. For instance, the factors listed above could affect the machinery of the antioxidant defense system and degradation, detoxication systems as autophagy, ubiqutin-proteasome or the Nrf2/Keap1 pathway, which are critically associated with PD. So the acumulative, synergistic and failure underlying of these biochemical processes, that span multiple levels in the biological hierarchy, promote neuronal loss over time.
The purpose of this thesis is to study the neuroprotective role exerted by Nrf2/Keap1 antioxidant pathway and its intimate relationship with the autophagic process, demonstrating greater sensitivity in cells exposed to environmental agents that have an alteration in this pathway . The thesis is structured in six sections: 1) introduction to PD, 2) a list of the goals outlined in this paper, 3) description of the methodology followed, 4) presentation of the results obtained, 5) discussion of data within the scientific environment, 6) conclusions.
Esta tesis doctoral ha sido subvencionada por los siguientes proyectos:
• GR10054 del Gobierno de Extremadura;
• PI11/00040 del Ministerio de Economia y Competitividad;
• PRIS11014, RIS11019 de FUNDESALUD;
• CB01/11, CB06/05/0041 de CIBERNED--‐Instituto de Salud Carlos III.
2014-12-01T10:35:09Z
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2014-12-01
2014-07-18
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/2280
0000-0001-6910-2089
0000-0002-6506-422X
0000-0002-0163-2953
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/2280
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Muerte celular en cardiomiocitos tras exposición al producto de peroxidación lipídica 4-hidroxi-2-nonenal. Desregulación del transporte de calcio en retículo sarcoplásmico
Hortigón Vinagre, Maria Pura
Henao Dávila, Fernando
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Cardiomiocitos
4-hidroxi-2-nonenal
Calcio
Cardiomyocytes
4-hydroxy-2-nonenal
Calcium
2302.21 Biología Molecular
La asociación entre estrés oxidativo y determinadas enfermedades cardiovasculares (ECVs), es conocida. Como consecuencia del estrés oxidativo, se desencadena la peroxidación lipídica, generándose aldehídos biológicamente activos implicados en procesos patológicos. De ellos cabe destaca a 4-hidroxi-2-nonenal (HNE) por su elevada toxicidad y capacidad para reaccionar con macromoléculas. La implicación de este compuesto en ECVs nos llevó a analizar el efecto ejercido por HNE sobre cardiomiocitos neonatales de rata. En primer lugar se describió que condiciones fisiopatológicas de HNE resultan altamente tóxicas para el cultivo (LC50 = 4.4 µM). A continuación se estudió el mecanismo responsable de tal efecto, concluyendo que la muerte de cardiomiocitos por HNE mediaba por apoptosis, y se desencadenaba por una elevación del calcio citosólico. En el análisis del mecanismo responsable de la alteración de la dinámica de Ca2+, se emplearon vesículas de retículo sarcoplásmico (RS), demostrando que las concentraciones de HNE que causan muerte celular no afectan ni a las proteínas directamente implicadas en el transporte de Ca2+ (SERCA y RyR), ni a los lípidos de membrana. Es la interacción de HNE con proteínas reguladoras de RyR (Sarcalumemina y Proteína de Unión a Ca2+ rica en Histidina) la responsable del eflujo de Ca2+ en RS. Con intención de encontrar terapias capaces de prevenir el efecto tóxico de HNE sobre cardiomiocitos, se vio que el β-bloqueante Carvedilol, los compuestos tiólicos NAC y MPG, el antioxidante Trolox y un compuesto natural (aceite esencial de Thymbra capitata) podrían ser alternativas útiles en la prevención y tratamiento de ECVs.
The connection between oxidative stress and cardiovascular diseases (CVDs) is well known. As consequence of oxidative stress takes place the process of lipid peroxidation, generating biologically active aldehydes, such as 4-hydroxy-2-nonenal (HNE), which stands out by its toxicity and high reactivity towards biomolecules. The implication of HNE in CVDs made us to study the effect of HNE on neonatal rat cardiomyocytes. Firstly, we described that pathophysiological doses of HNE are extremely toxic for the culture (LC50= 4.4 µM). Afterwards, the mechanism responsible of cell death was studied, showing that it took place by apoptosis and was the cytosolic calcium overloading the responsible of triggering it. To analyze the mechanism responsible of the alteration of Ca2+ dynamic, vesicles of sarcoplasmic reticulum (SR) were employed, showing that the low doses of HNE, able to cause the cell death of cardiomyocytes, do not alter the function of proteins directly implicated in Ca2+ transport (SERCA and RyR), neither the membrane lipids. It is the interaction of HNE with two regulatory proteins of RyR (Sarcalumenin and Histidine Rich Calcium Binding Protein) the responsible of Ca2+ efflux observed at low HNE doses. Finally, we demonstrated that the β-blocker Carvedilol, the thiol compounds NAC and MPG, the antioxidant Trolox and the natural compound essential oil of Thymbra capitata, are able to prevent the damage induced by HNE in cardiomyocytes, therefore these compounds are pointed as possible therapies able to prevent or reduced the cardiac damage in pathologic processes mediated by oxidative stress and lipid peroxidation.
2012-10-17T11:08:48Z
2012-10-17T11:08:48Z
2012-10-17
2012-03-30
doctoralThesis
978-84-695-5030-4
84-695-5030-6
http://hdl.handle.net/10662/157
0000-0003-1117-8544
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
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253 p.
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/157
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Evaluación de las propiedades neuroprotectoras de componentes de la jalea real en la enfermedad de Parkinson. Papel de la autofagia
Martínez Chacón, Guadalupe
Fuentes Rodríguez, José Manuel
González Polo, Rosa Ana
Niso Santano, Mireia
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Enfermedad de Parkinson
Jalea real
Autofagia
Neuroprotección
Dieta
Parkinson´s disease
Royal jelly
Autophagy
Neuroprotection
Diet
3205.07 Neurología
2403 Bioquímica
2409 Genética
2415 Biología Molecular
Las enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Parkinson (EP) o la enfermedad de Alzheimer (EA), suponen un conjunto de enfermedades muy frecuentes y de un gran impacto en la población. Estos trastornos presentan un origen multifactorial, caracterizado por una combinación de factores genéticos y medioambientales. Existe una limitada información disponible sobre la fisiopatología exacta, etiología y complejidad de estas enfermedades. La identificación y estudio de los factores de riesgo parece resultar insuficiente para el conocimiento completo de la enfermedad y su control. No hay una evidencia clara asociada a la aparición y progresión de la EP ni de la EA, pero todo apunta a que la interacción de los procesos que afectan a la maquinaria antioxidante y a los sistemas de degradación y detoxificación celular, entre ellos, la autofagia y el sistema ubiquitin-proteasoma (SUP), y su desregulación, están íntimamente asociados a la EP y la pérdida neuronal a lo largo del tiempo. La EP sigue siendo una de las enfermedades neurodegenerativas más frecuentes, el segundo desorden neurodegenerativo en cuanto a prevalencia en la población mayor de 60 años, que en la actualidad, aún carece de un tratamiento efectivo, por lo que es de vital importancia poder encontrar terapias que permitan tratar esta patología tanto en su origen como en su progresión. Por otra parte, la alimentación es uno de los principales factores que influyen en la salud general de la población, por lo que consideramos que potenciar la investigación encaminada a caracterizar la actividad biológica de compuestos de origen natural, en especial, los presentes en ciertos alimentos, como la jalea real, contribuiría a diseñar estrategias preventivas y a promover un envejecimiento más saludable. Además, este tipo de compuestos, por lo general, poseen menos efectos secundarios y se pueden incorporar a una dieta equilibrada de forma más natural que otro tipo de fármacos. Siendo la agregación de proteínas (como α-sinucleína entre otras) uno de los principales factores causales en la patogénesis de esta enfermedad. En los últimos años, son bastante numerosos los estudios tanto in vitro como in vivo que investigan los efectos de diversos compuestos procedentes de sustancias naturales en la dieta para prevenir el daño neuronal en diversas patologías neurodegenerativas. Aunque los mecanismos concretos mediante los que estas moléculas ejercen su acción neuroprotectora aún no están claros, se ha sugerido que éstos podrían estar relacionados con la capacidad para inducir autofagia como mecanismo de aclarado de estos agregados tóxicos. En la presente Tesis estudiamos el mecanismo molecular de autofagia inducido por dos componentes de la fracción lipídica de la jalea real (10-hidroxi-trans-2-decenoico y 10-hidroxidecanoico) así como analizamos su posible efecto neuroprotector.
Neurodegenerative diseases such as Parkinson´s disease (PD) or Alzheimer´s dissease (AD) represent a group of very common illnessess that make a great impact worldwide. These disorders have a multifactorial origin where a mixture of genetic and environmental factors are involved. There is a few avalaible information about exact mechanisms related to pathophysiology, ethiology or the complexity of these diseases. In this sense, identification and research of risk factors result insufficient to establish full knowledge and control of them. Although there is no clear evidence related to PD nor AD onset and progression, growing evidence supports the idea that interaction between mechanisms that affect antioxidant machinery and degradation and detox cell system (autophagy and the ubiquitin-proteosome system), besides its deregulation, are closely related to PD and long-term neuronal loss. PD is the second more prevalent neurodegenerative disease in people aged over 60 years. The most pathological hallmark of this disease is the accumulation of α-synuclein aggregates. To date, there is no effective treatment, therefore, is critical to find therapies that can effectively treat PD onset and progression. On the other hand, food habits are one of the main factors that contribute to general health status in humans, so we truly consider that empowering research focused on characterizing biological activity of natural compounds (especially those available in certain meals, such as royal jelly), would surely contribute to design preventive stragies and promote a healthier aging. Besides, these compounds are usually less harmful than drugs and, because of that, they are more prone to be included in a balanced diet. In the last years, there are several in vitro and in vivo studies that elucidates the role of several natural compounds, that may be included in a diet, in the prevention of neuronal harm in neurodegenerative diseases. Although it is not clear the exact mechanisms involved in neuroprotection associated with these compounds, their ability to induce autophagy to promote clearance of toxic aggregates has been suggested as a possible explanation to their neuroprotective role. Because of that, in this doctoral thesis we study the ability of inducing autophagy as well as the neuroprotective effect of two components avalaible in lipid fraction of royal jelly (10-hydroxy-trans-2-decenoci and 10-hydroxydecanoic).
2018-01-12T09:07:19Z
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2018-01-12
2017-10-19
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/6796
0000-0002-6506-422X
0000-0002-0163-2953
0000-0001-6910-2089
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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209 p.
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/6796
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Estudio del papel de los genes cio en la resistencia al cianuro de “Pseudomonas pseudoalcaligenes” CECT5344
Carmona Gallardo, María Isabel
Quesada Molina, Alberto
Blasco Pla, Rafael
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Cianuro
Biodegradación
Respiración
GntR
Cio
Cyanide
Biodegradation
Respiration
2415.01 Biología Molecular de Microorganismos
3308.07 Eliminación de Residuos
2403 Bioquímica
“Pseudomonas pseudoalcaligenes” CECT5344, es una bacteria que asimila cianuro a pH alcalino. Se ha demostrado que la expresión de la oxidasa terminal cio1 es necesaria para crecer en presencia de cianuro. El análisis y anotación del genoma ha permitido identificar los sistemas génicos que codifican las diferentes oxidasas terminales de la bacteria.
El estudio funcional de cio1 demuestra la co-transcripción de un operón de función mixta que incluye genes, tanto de respiración resistente a cianuro, como genes relacionados con el metabolismo de aminoácidos y de 3-cianoalanina. En la inmediata vecindad de cio1 existe un gen regulador de la familia gntR (mocR), que podría estar regulando la expresión de cio1. De hecho, el cianuro induce tanto la expresión del regulador como la del operón cio1. La secuenciación del genoma reveló la presencia de otras dos posibles oxidasas terminales, denominadas cio2 y cio3. Aunque la expresión de estas dos oxidasas no se regula por cianuro, su expresión en “Pseudomonas putida” confiere a esta cepa resistencia a cianuro, demostrando así su funcionalidad.
Además de las quinol oxidasas citadas anteriormente, en el genoma se detectan tres citocromo oxidasas, dos de la familia cbb3 y una del tipo aa3. La única que responde a cianuro, aunque en menor medida que cio1, es la del tipo aa3, cuya expresión aumenta la respuesta a cianuro, como se ha puesto de manifiesto en experimentos de q-PCR. Por último, el análisis transcriptómico ha permitido comprender la respuesta del organismo al cianuro en un contexto global.
“Pseudomonas pseudoalcaligenes” CECT5344, is a bacterium able to assimilate cyanide at alkaline pH. It has been shown that the terminal oxidase cio1 is required for growing in the presence of this compound.
The analysis and annotation of the “P. pseudoalcaligenes” CECT5344 genome reveals the presence of several terminal oxidases. The functional study of cio1 suggests its possible co-transcription in a mixed function operon including genes related to the resistant respiration to cyanide and to the biosynthesis of amino acids and 3-cianoalanine.
Next to cio1 there exists a regulatory gene belonging to the gntR (mocR) family, which could regulate cio1 expression. As a mater in fact, cyanide induces the expression of both the regulator and the cio1 operon.
The sequencing of the genome shows the presence of two others terminal oxidases, called cio2 and cio3. Although the expression of these two oxidases expression is not regulated by cyanide, their expression in Pseudomonas putida provide to this strain resistance to cyanide, showing their functionality.
There are also gene components that might encode other three terminal oxidases, two of the cbb3 family and one of the aa3 type. Among them, the only oxidase that responses to cyanide is the aa3 type, which expression increases in response to this compound, although in a lesser extent than cio1, as demonstrated by q-PCR experiments. Finally, the transcriptomic analyses contribute to understand the organism response to cyanide in a global context.
- Ministerio de Ciencia e innovación: Proyectos de I+D+i (BIO2008-04542-C02-02 y BIO2011-30026-C02-01) y Ayuda predoctoral FPI BES-2009-027073
- Gobierno de Extremadura: Proyecto PRI07A097 y Ayuda a Grupos-BioMic GR10165-CCV019 y GRU09078
- Fondo Europeo de Desarrollo Regional: FEDER 2007-2013
2016-02-09T10:06:26Z
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2016-02-09
2016-01-19
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/3836
0000-0001-9952-977X
0000-0003-3921-1553
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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281 p.
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/3836
oai:dehesa.unex.es:10662/50942024-03-11T08:21:25Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Desarrollo y estudio del potencial inmunomodulador de tres novedosas estrategias para la aplicación de la terapia celular
Blázquez Durán, Rebeca
García Casado, Javier
Sánchez Margallo, Francisco Miguel
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Células madre
Exomas
inmunomodulación
Stem cells
Exomes
Immunomodulation
2407.01 Cultivo Celular
2412.99 Otras (Terapia celular)
La terapia celular ha emergido en los últimos años como una nueva herramienta terapéutica para el tratamiento de diversas patologías. Sin embargo, la vía y tipo de administración de estas terapias son factores enormemente condicionantes para la correcta implantación del producto terapéutico y, por tanto, para su eficacia. En este sentido, es necesario el desarrollo de métodos y vías de administración alternativos que aseguren viabilidad y la correcta implantación de las células madre para conseguir la optimización de estas terapias.
Esta tesis doctoral plantea estrategias alternativas para favorecer la implantación y aumentar el efecto terapéutico de las células madre adultas. Cada una de estas estrategias constituye un bloque con entidad propia que se desarrolla a lo largo de los diferentes apartados de este trabajo. La primera estrategia se centra en el uso combinado de las células madre mesenquimales (Mesenchymal Stem Cells, MSCs) con materiales quirúrgicos para favorecer la implantación y la actividad biológica de las células. La segunda estrategia aborda una nueva vía de administración en el contexto de la terapia celular para el tratamiento de lesiones de origen cardiovascular. En concreto, las células madre adultas son administradas por vía intrapericárdica, evaluando su biodistribución y actividad inmunomoduladora en un modelo de animal grande. Por último, para la tercera estrategia se evalúa la actividad inmunomoduladora de exosomas derivados de MSCs, y se realiza una comparativa de diferentes metodologías de aislamiento de dichas vesículas para su extrapolación y aplicación en el entorno clínico.
In the recent years, stem cell therapy has emerged as a novel therapeutic tool for the treatment of a wide range of diseases. The administration route has a significant impact on the success of these therapies as it determines the correct implantation of the therapeutic product as well as its effectiveness. In this sense, the evaluation of new approaches, alternative implantation routes and techniques is urgently needed.
This PhD work analyses different strategies to improve the implantation and the therapeutic effect of adult stem cells.
The results of these strategies are discussed along the different sections of this thesis. The first strategy was focused in the combination of mesenchymal stem cells (Mesenchymal Stem Cells (MSCs) and surgical materials to enhance the implantation and biological activity of MSCs. The second strategy addresses an innovative administration route in the context of cardiovascular cell therapy. Concretely, adult stem cells were intrapericardially administered, evaluating their bio-distribution and immunomodulatory activity in a large animal model. Finally, the immunomodulatory activity of MSCs-derived exosomes was evaluated and different isolation methods were assessed for their extrapolation and application in the clinical context.
Este trabajo ha sido financiado en parte por la Junta de Extremadura, el Fondo Social Europeo y los Fondos FEDER a través de las ayudas concedidas a Rebeca Blázquez (TE12066) y Javier García (TA13042 e IBI3123), así como por la ayuda a grupos catalogados de la Junta de Extremadura (GR15175), las ayudas de Redes temáticas de investigación cooperativa en salud (DR12/0042/0025 a Francisco Miguel Sánchez Margallo y Claudia Báez), el Séptimo Programa Marco Europeo (FP7-HEALTH-2009-1.4-3 242038) y por el centro de Cirugía de Mínima Invasión.
2017-01-12T12:55:57Z
2017-01-12T12:55:57Z
2017-01-12
2016-12-16
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/5094
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oai:dehesa.unex.es:10662/76362021-05-14T13:26:15Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Implicación del receptor de dioxina en la transición epitelio-mesénquima, en la pluripotencia y en la reprogramación celular
Rico Leo, Eva María
Fernández Salguero, Pedro María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Aryl hydrocarbon receptor (AHR)
Receptor de dioxina (AHR)
Transición epitelio-mesénquima (EMT)
Pluripotencia
Epithelial to mesenchymal transition (EMT)
Pluripotency
2403 Bioquímica
2407 Biología Celular
2409 Genética
2415 Biología Molecular
AHR es un factor de transcripción muy conservado evolutivamente que media toxicidad y carcinogénesis inducidas por contaminantes ambientales. Evidencias experimentales recientes demuestran que AHR tiene también un papel relevante en la homeostasis celular. Así, se ha observado su implicación en la proliferación y diferenciación celular, en el desarrollo cardiovascular y hepático, y en la regulación de la actividad TGFβ. Además, AHR modula de una forma dependiente del fenotipo de la célula diana, procesos relevantes en cáncer como son la adhesión y migración celular. En esta Tesis Doctoral hemos analizado el papel de AHR en la transición epitelio-mesénquima (EMT), proceso iniciador del desarrollo tumoral y origen de la invasión local durante el cáncer. Para ello, hemos producido modelos celulares epiteliales de ratón y humanos con niveles variables de actividad AHR; demostrando que la ausencia de esta proteína genera cambios fenotípicos indicativos de EMT, probablemente debidos a un incremento en la señalización dependiente de TGFβ. Dado que el cáncer de piel no melanoma es el tumor más frecuente del ser humano, hemos estudiado también la contribución de AHR en la homeostasis y regeneración de la piel; aislando y caracterizando células madre epidérmicas ya que su papel es decisivo en la formación del tumor. Por último, y puesto que la transformación de células malignas está habitualmente ligada a procesos de indiferenciación, hemos analizado el papel de AHR en la reprogramación celular en modelos in vitro e in vivo, demostrando que su ausencia favorece un estado más indiferenciado, y por tanto, de peor pronóstico.
AHR is a highly conserved transcription factor that mediates toxicity and carcinogenesis induced by environmental contaminants. Recent experimental evidence shows that AHR also has a relevant role in cellular homeostasis. Thus, its involvement in cell proliferation and differentiation, in cardiovascular and hepatic development, and in the regulation of TGFβ activity has been observed. In addition, AHR modulates in a manner that depends on the phenotype of the target cell, relevant processes in cancer such as cell adhesion and migration. In this PhD Thesis we have analyzed the role of AHR in the epithelial-mesenchymal transition (EMT), a process that initiates tumor development and is in the origin of local invasion during cancer. To do this, we have produced mouse and human epithelial cell models with different levels of AHR activity; demonstrating that the absence of this protein generates phenotypic changes indicative of EMT, probably due to an increase in TGFβ-dependent signaling. Since non-melanoma skin cancer is the most frequent tumor in humans, we have also studied the contribution of AHR to skin homeostasis and regeneration by isolating and characterizing epidermal stem cells because of their decisive role in the tumor formation. Finally, and since transformation of malignant cells is usually linked to dedifferentiation, we have analyzed the role of AHR in cell reprogramming in both in vitro and in vivo models, demonstrating that its absence favors a more undifferentiated state, and therefore, of worse prognosis.
• Ministerio de Economía y Competitividad y Fondos FEDER: Proyectos (BFU2011-22678 y SAF2014-51813-R)
• Red Temática de Investigación Cooperativa en Cáncer RTICC y Fondos FEDER: Proyecto RD12/036/0032
• Junta de Extremadura, Plan de Ayuda a grupos catalogados ,y Fondos FEDER: Proyecto GR10008
• Red Temática de Investigación Cooperativa en Cáncer (RTICC): Contrato como Técnico Superior de Investigación
• Agencia Extremeña de Cooperación Internacional para el Desarrollo (AEXCID): Contrato de nueve meses como Personal Contratado Investigador (PCI)
2018-07-02T10:10:16Z
2018-07-02T10:10:16Z
2018-07-02
2018-05-23
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/7636
0000-0003-2839-5027
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oai:dehesa.unex.es:10662/40732021-05-14T13:25:35Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Replicación inducida por estrés térmico en bacterias y plásmidos
Mendoza Chamizo, Belén
Botello Cambero, Emilia Carmen
González Soltero, María del Rocío
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Genética bacteriana
Replicación DNA
Estrés térmico
Bacterial genetics
DNA replication
Heat stress
2409.93-1 Genética Molecular. Síntesis de Oligonucleótidos
2415.01 Biología Molecular de Microorganismos
Tesis doctoral con la Mención de "Doctor Europeo"
La duplicación del genoma de una célula antes de su división es un proceso esencial en el ciclo celular. “Escherichia coli” posee un único cromosoma circular que es replicado de forma precisa una vez por ciclo celular. El grupo de investigación donde se ha desarrollado esta Tesis Doctoral ha descrito y caracterizado la replicación inducida por estrés térmico, HIR (Heat Induced Replication), en el cromosoma de E. coli que escapa al control del ciclo celular.
Una vez que HIR ha sido definida en E. coli, en esta Tesis se amplia el estudio de HIR a otros replicones bacterianos. Se ha estudiado HIR en los genomas de otras especies bacterianas modelo (“Salmonella tyhpimurium”, “Bacillus subtilis” y “Vibrio cholerae”) y en varios plásmidos de E. coli con diferente control de la replicación (minicromosomas, F, P1ΔincA, pSC101, R1, p15A y pBR322). El propósito global de este trabajo es el de conocer la generalidad del mecanismo de HIR en el mundo bacteriano y determinar sus requerimientos en los diferentes replicones. Otro aspecto de interés son los efectos de las replicaciones inducidas fuera del control cíclico sobre otros procesos del ciclo celular, tanto en E. coli como en otras especies bacterianas.
Los resultados obtenidos permiten concluir que la replicación termoinducida no es exclusiva de “E. coli” y podemos considerar a HIR como un mecanismo de estrés generalizado en el mundo bacteriano. La medida de GFPmut2 (fluorescencia o dosis génica) es una metodología eficaz para el estudio de HIR en plásmidos; proponemos la espectrofluorimetría y la qPCR como métodos más sencillos, rápidos y precisos que la citometría de flujo y el Southern blot para la cuantificación del número de copias de plásmido.
Genome duplication before cell division is an essential process in the cell cycle. “Escherichia coli” has a single circular chromosome that is precisely replicated once per cell cycle. The research group where this PhD Thesis has been developed has described and characterized the Heat Induced Replication, HIR, for the E. coli chromosome, with different requirements from those of the cyclic replication.
Once HIR has been well defined in “E. coli” chromosome, in this PhD Thesis its study is broadened to other model bacterial species (“Salmonella tyhpimurium”, “Bacillus subtilis” and “Vibrio cholera”) and to “E. coli” plasmids with different replication control (minichromosomes, F, P1ΔincA, pSC101, R1, p15A and pBR322). The global aim of this work is to know the spreading of HIR mechanism in the bacterial world and determining its requirements in the different replicons. Another interesting point is the effect of extra-replications on other cell cycle parameters, both in E. coli and in other species.
With the obtained results we conclude that heat-induced replication is not exclusive of “E. coli” chromosome and HIR can be considered as a stress mechanism widespread in the prokaryotic world. GFPmut2 measurement (fluorescence or gene dose) is an effective method for the study of HIR in plasmids; we propose spectrofluorometry and qPCR as simpler, quicker and more accurate methods than flow cytometry and Southern blot for plasmid copy number quantification.
2016-03-31T11:01:35Z
2016-03-31T11:01:35Z
2016-03-31
2016-02-08
doctoralThesis
978-84-608-9354-7
http://hdl.handle.net/10662/4073
0000-0003-1570-7896
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http://hdl.handle.net/10662/4073
oai:dehesa.unex.es:10662/7002022-02-04T10:46:32Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Estudio de las actividades y los centros activos de las enzimas ADPRibas-Mn y trioquinasa/FMN ciclasa
Rodrigues, Joaquim Rui de Castro
Cameselle Viña, José Carlos
Cabezas Martín, Alicia
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Enzimas
Modelado molecular
Mutagénesis
Enzymes
Molecular modeling
Mutagenesis
2302.19 Procesos Metabólicos
2302.21 Biología Molecular
2302.27 Proteínas
Se han investigado las actividades y centros activos de la ADP-ribosa/CDP-alcohol difosfatasa dependiente de Mn2+ (ADPRibasa-Mn) y la trioquinasa/FMN ciclasa (TKFC), obtenidas como proteínas recombinantes. Respecto a ADPRibasa-Mn se estudiaron las enzimas de rata (“Rattus norvegicus”) y de pez cebra (“Danio rerio”). Por vez primera se ha hecho coincidir información estructural y bioquímica en la misma proteína de la familia “ADPRibase-Mn”. Se han encontrado nuevas actividades de ADPRibasa-Mn, como ADP-ribosa cíclica fosfohidrolasa y fosfodiesterasa de nucleótidos 2´,3´-cíclicos. A partir de la estructura de la ADPRibasa-Mn de “D. rerio”, y por modelado molecular, se han definido los centros activos de ambas enzimas y se identificaron una molécula de agua y un residuo de histidina bien posicionados para la reacción hidrolítica. El papel de dicho residuo se confirmó por mutagénesis. Respecto a TKFC, se estudió la enzima humana (hTKFC), un homodímero de subunidades con dos dominios (L y K). Se construyeron modelos de hTKFC unida a sustratos de quinasa, de ciclasa o sin sustratos. Simulaciones de dinámica molecular desvelaron movimientos de los dominios K necesarios para la actividad quinasa. El modelado molecular permitió identificar interacciones relevantes de diversos aminoácidos. Los estudios bioquímicos hechos con hTKFC incluyeron la demostración de que K y L por separado no tienen actividad quinasa, mientras que K tiene actividad FMN ciclasa. Además se prepararon seis mutantes puntuales que, añadidos a un séptimo anteriormente preparado, dieron información relevante sobre el centro activo y el papel de ambos dominios en la catálisis.
The activities and the active centers of Mn2+-dependent ADP-ribose/CDP-alcohol diphosphatase (ADPRibase-Mn) and triokinase/FMN cyclase (TKFC), both obtaines as recombinant proteins, were investigated. Concerning ADPRibase-Mn, the enzymes from rat (“Rattus norvegicus”) and zebrafish (“Danio rerio”) were studied. For the first time, structural and biochemical information were put together for the same protein of the ADPRibase-Mn family. Novel ADPRibase-Mn activities were found, namely cyclic ADP-ribose phosphohydrolase and 2´,3´-cyclic nucleotide phosphodiesterase. The active centers of both ADPRibase-Mn enzymes were defined from the structure of the “D. rerio” protein and by molecular modeling. A molecule of water and a histidine residue well positioned for the hydrolytic reaction were identified. The role of such residue was confirmed by mutagenesis. The study of TKFC was centered on the human enzyme (hTKFC), a homodimer of two-domain (K and L) subunits. hTKFC models bound to kinase substrates, cyclase substrate, or without substrates, were constructed. Molecular dynamics simulations revealed movements of the K domains necessary for the kinase activity. Molecular modeling led to the identification of relevant interactions of several aminoacids. Biochemical studies performed with hTKFC included the demonstration that individual K and L domains are devoid of kinase activity, while K alone is active as FMN cyclase. In addition, six point mutants were prepared and, together with another previously prepared one, gave relevant information on the active center and the role of both domains in catalysis.
- Ministerio de Educación y Ciencia. Ayudas (BFU2006-510)
- Ministerio de Ciencia e Innovación. Ayudas ( BFU2009-07296)
- Junta de Extremadura con confinanciación de FEDER y FSE. (GRU08043, GRU09135, GR10133)
2013-11-25T13:11:00Z
2013-11-25T13:11:00Z
2013-11-25
2013-09-30
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/700
0000-0002-2908-9147
0000-0003-0005-081X
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http://hdl.handle.net/10662/700
oai:dehesa.unex.es:10662/85652023-02-09T09:10:36Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Resistencia a colistina en enterobacterias zoonóticas
Iglesias Parro, María del Rocío
Píriz Durán, Segundo
Quesada Molina, Alberto
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Resistencia
Colistina
Enterobacterias
Resistance
Colistin
Enterobacteria
2414.01 Antibióticos
2414.04 Bacteriología
2415.01 Biología Molecular de Microorganismos
En España, las infecciones por bacterias resistentes a antimicrobianos causan 30 veces más muertes que los accidentes de tráfico. Se prevé que en 2050 sea la primera causa de muerte a nivel mundial. Para el tratamiento es necesario antibióticos “de último recurso”, como la colistina. En 2015, apareció un determinante de resistencia a colistina transferible horizontalmente (mcr-1). La OMS lo estableció como antibiótico de importancia crítica de máxima prioridad y, EMA y AEMPS establecieron directrices limitando su uso en veterinaria. Por ello, el objetivo de esta tesis es estudiar los mecanismos moleculares que disminuyen la susceptibilidad a colistina en enterobacterias zoonóticas.
Al analizar 108 cepas resistentes a colistina de origen animal (E.coli (n=80) y S.enterica (n= 28)) y un modelo in vitro de resistencia a colistina en E.coli (n=10), observamos que la resistencia a colistina co-expresa resistencia a polimixina B. En los aislados clínicos, el mecanismo prevalente es mcr-1. Además, en E. coli encontramos los genes mcr-3 (combinado con mcr-1) y mcr-4 (combinado con mcr-1 o polimorfismos en pmrAB). Los aislados clínicos con determinantes mcr presentaron fenotipos estables. Las cepas de S.enterica con polimorfismos en pmrAB o sin determinante descrito fueron inestables. En los aislados in vitro se detectaron nuevos polimorfismos en pmrAB: R81S en pmrA y L14Q, Q99P y V133F en pmrB, cuyo papel en la resistencia a la colistina se evidenció mediante mutagénesis dirigida. Solo CR4 no presenta determinantes de resistencia a colistina previamente descritos, su análisis genómico identificó varios polimorfismos, aunque su identificación requiere futuros análisis.
In Spain, infections caused by antimicrobial-resistant bacteria bring out 30 times more deaths than traffic accidents, and it’s expected that in 2050 it will be the first cause of death worldwide. Last resort antibiotics, such as colistin, are necessary for the treatment. In 2015, a horizontally transferable colistin resistance determinant (mcr-1) appeared. The WHO established colistin as a critical antibiotic of great importance and EMA and AEMPS set guidelines that limit the use of colistin in veterinary medicine. Therefore, the main objective of this thesis is to study the mechanisms of colistin resistance in zoonotic enterobacteria.
After analyzing 108 colistin-resistant strains of animal origin (80 E.coli’s strains and 28 S.enterica’s strains); and also, an in vitro model of colistin resistance in E.coli (n=10), we observed that colistin resistance is co-expressed resistance to polymyxin B. In clinical isolates the prevailing mechanism is the mcr-1 gene. In addition, in Escherichia coli we found mcr-3 (in combination with mcr-1) and mcr-4 genes (in combination with mcr-1 or polymorphisms in pmrAB). Escherichia coli and Salmonella enterica clinical isolates with mcr-like determinants presented stable phenotypes, whereas Salmonellas’ with polymorphisms in pmrAB were unstable. When performing the directed mutagenesis experiment, we confirmed that the polymorphisms R81S in pmrA, and L14Q, Q99P and V133F in pmrB confer colistin resistance. On the other hand, one of the mutants selected in vitro, CR4, does not present colistin resistant determinants previously described, although its genomic analysis reveals several polymorphisms that require further studies to be confirmed.
2019-01-22T13:09:37Z
2019-01-22T13:09:37Z
2019-01-22
2018-01-11
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/8565
0000-0001-9952-977X
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http://hdl.handle.net/10662/8565
oai:dehesa.unex.es:10662/33842022-02-04T10:48:51Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
CpdB bacteriana y ADPRibasa-Mn humana: estudios de dos hidrolasas activas sobre nucleótidos cíclicos
López Villamizar, Iralis Mercedes
Costas Vázquez, María Jesús
Cameselle Viña, José Carlos
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Diadenilato cíclico
ADP-ribosa cíclica
Metalofosfoesterasa
Cyclic diadenylate
Cyclic ADP-ribose
Metallophosphoesterase
2302.09 Enzimología
2415.01 Biología Molecular de Microorganismos
2414.08 Procesos Microbianos
CpdB y ADPRibasa-Mn pertenecen a la superfamilia estructural “Metalofosfoesterasas”. Comparten estructura y actividad fosfodiesterasa sobre determinados nucleótidos cíclicos.
CpdB. Durante la clonación y expresión heteróloga de una hidrolasa de c-di-AMP en Escherichia coli, dicha actividad apareció en una proteína del hospedador. C-di-AMP regula bacterias gram positivas. Hay poca información sobre gram negativas. Decidimos purificar e identificar la c-di-AMP fosfodiesterasa de E. coli. Su huella peptídica identificó a CpdB, conocida como fosfodiesterasa de nucleótidos 2´,3´-cíclicos y 3´-nucleotidasa. Por vez primera una “Metalofosfoesterasa” aparece entrelas fosfodiesterasas de dinucleótidos cíclicos. Fue clonada y caracterizada como enzima recombinante por primera vez. Se estudió su especificidad de sustrato e inhibición, y se investigaron las funciones de sus dominios (Ndom y Cdom), mediante su expresión separada y la mutación de dos aminácidos. His117 (Ndom) tiene función catalítica y Tyr544 (Cdom) une y reconoce sustrato o inhibidor. Finalmente se prepararon dos proteínas quiméricas con un dominio de Cpdb y otro de UshA, una 5´-nucleotidasa de E. coli.
ADPRibasa-Mn. Hidroliza ADP-ribosa, CDP-alcoholes y ADP-ribosa cíclica (cADPR). Dentro de un estudio más amplio sobre bases moleculares de catálisis y especificidad, aquí se prepararon y caracterizaron dos mutantes de la ADPRibasa-Mn humana. His111 participa en el mecanismo catalítico, igual que en CpdB y otras “Metalofosfoesterasas”. Combinando tres mutaciones, se consiguió una ADPRibasa-Mn activa preferentemente sobre cADPR.
CpdB and ADPRibase-Mn belong to the ‘Metallophosphoesterases’ structural superfamily. They share structure and phosphodiesterase activity on certain cyclic nucleotides.
CpdB. During the cloning and heterologous expression of a c-di-AMP hydrolase in Escherichia coli, such activity appeared associated with a protein of the host. C-di-AMP regulates gram-positive bacteria. There is little information about gram negatives. We decided to purify and identify the c-di-AMP phosphodiesterase of E. coli. Its peptide fingerprint pointed to CpdB, known as 2´,3´-cyclic nucleotide phosphodiesterase and 3´-nucleotidase. Never before a ‘Metallophosphoesterase’ appeared among cyclic dinucleotide phosphodiesterases. It was cloned and characterized as recombinant enzyme for the first time. Its substrate and inhibitor specificity was studied, and the functions of its domains (Ndom and Cdom) were investigated, through their separate expression and mutagenesis of two amino acids. His117 (Ndom) has catalytic function, and Tyr544 (Cdom) binds and recognizes substrate or inhibitor. Finally, two chimeric proteins were constructed bearing a CpdB domain bound to another from UshA, a 5´-nucleotidase from E. coli.
ADPRibase-Mn. It hydrolyzes ADP-ribose, CDP-alcohols and cyclic ADP-ribose (cADPR). As part of a wider study on the molecular bases of catalysis and specificity, two mutants of Human ADPRibase-Mn were constructed and studied. His111 participates in catalysis, like in CpdB and other ‘Metallophosphoesterases’. By combination of three mutations, an ADPRibase-Mn preferentially active on cADPR was obtained.
- Ayuda concedida por el Gobierno de Extremadura (GR10133) con cofinanciación de FEDER
- Ayuda Básica al Grupo de Enzimología de la Universidad de Extremadura
2015-10-08T09:45:39Z
2015-10-08T09:45:39Z
2015-10-08
2015-09-17
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/3384
0000-0003-0005-081X
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/3384
oai:dehesa.unex.es:10662/69372021-05-14T13:10:20Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
El receptor de dioxina en poliploidía, regeneración y metabolismo hepático: interacción con la vía de señalización PI3K/AKT y WNT/β-Catenina
Moreno Marín, Nuria
Fernández Salguero, Pedro María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Receptor de dioxina
Hepatocarcinoma
Poliploidía
Aryl hydrocarbon receptor
Hepatocarcinoma
Polyploidy
2403 Bioquímica
2407 Biología Celular
2409 Genética
2415 Biología Molecular
Tesis doctoral con la mención de "Doctor Internacional"
La depleción del receptor de dioxina induce indiferenciación y pluripotencia. Hemos comprobado que ratones carentes de AhR producen una regeneración hepática más eficiente a través de la expansión temprana de células stem y la sobreexpresión de los genes de pluripotencia OCT4, NANOG, CK14 y TBX3. Además, estas células en hígados AhR -/- presentaron una sobreactivación de la ruta de β-catenina. Mediante la inducción tumoral con Dietilnitrosamina (DEN) observamos que la mayoría de ratones AhR-/- produjeron grandes carcinomas mientras que menos de la mitad de los ratones silvestres desarrollaron adenomas pre-malignos. EL análisis del tejido tumoral AhR-/- reveló una sobreexpresión nuclear de β-Catenina y Axin2. La poliploidización hepática es fundamental para el crecimiento celular, la competencia metabólica y el desarrollo de tumores. Comprobamos que AhR regula la transición diploidía-poliploidía en el proceso de maduración hepática que tiene lugar en el hígado de ratón en torno a la edad del destete. Observamos que los hígados AhR-/- tenían hepatocitos más pequeños, hipercelularidad y un mayor potencial proliferativo. Además el proceso de poliploidía estuvo comprometido y observamos centrosomas hiperamplificados. Apuntamos a las vías de señalización de PI3K/AKT y Wnt/β-catenina, que se encontraron persistentemente sobreactivadas en hígados AhR-/-, como potenciales candidatos en la regulación del proceso. Adicionalmente obtuvimos mayores niveles de los intermediarios de la fosforilación oxidativa mitocondrial succinato y fumarato en ratones carentes del receptor de dioxina. Todos estos datos apoyan la implicación AhR en el proceso de regeneración y carcinogénesis hepática. Además, el papel de AhR en la maduración y la función hepática.
Aryl hydrocarbon receptor depletion induces undifferentiation and pluripotency. AhR-null mice were used to explore whether AhR controls liver regeneration and carcinogenesis by restricting stem-like cells expansion and pluripotency genes expression. Short-term CCl4 liver damage was earlier and more efficiently repaired in AhR-/- than in AhR+/+ mice. Stem-like CK14+ and TBX3+ and pluripotency-expressing OCT4+ and NANOG+ cells expanded sooner in AhR-/- regenerating livers. Moreover stem-like side population cells (SP) isolated from AhR-/- livers had increased β-catenin signaling. Liver carcinogenesis induced by DEN produced large carcinomas in all AhR-/- mice but mostly premalignant adenomas in less than half of AhR+/+ mice and AhR-null tumoral tissue had nuclear β-Catenin and Axin2 overexpression. We suggest that AhR may serve to adjust liver repair and to block tumorigenesis in the liver. Importantly, liver polyploidization is fundamental for cell growth, metabolic competence, and tumor development. We report that AhR regulates the diploid to-polyploid conversion taking place during the preweaning-to-adult maturation of mouse liver. AhR-null livers had smaller hepatocytes, hypercellularity and enhanced proliferative potential. AhR-/- livers showed compromised polyploidy and enlarged centrosomes. This phenotype could involve PI3K, ERK, and Wnt/β-Catenin signaling pathways which were persistently upregulated in preweaning and adult AhR-/- liver, likely resulting in their enhanced mTOR activation. Additionally AhR-/- mice had a deregulation of mitochondrial oxidative phosphorylation intermediates succinate and fumarate. Thus, AhR would be required for the diploid to polyploid transition and since polyploidization is essential for adult liver function and tumor progression, selective AhR modulators could be interesting therapeutic tools in the liver.
Proyectos del Ministerio de Economía y Competitividad (SAF2008-00462 y BFU2011-22678), de la Red Temática de Investigación Cooperativa en Cáncer RTICC (RD06/0020/1016) y del Plan de Ayuda a Grupos del Gobierno de Extremadura (GR10008), cofinanciada por el programa FEDER de la Unión Europea. Beca de Iniciación a la investigación de la Universidad de Extremadura, Beca de Verano de la RTICC, Beca FPI (Formación del profesorado investigador del Ministerio de Educación y Ciencia).
2018-02-05T10:37:46Z
2018-02-05T10:37:46Z
2018-02-05
2017-10-06
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/6937
0000-0001-6537-3164
0000-0003-2839-5027
spa
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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238 p.
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/6937
oai:dehesa.unex.es:10662/124802021-09-24T00:11:42Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Fibrilación auricular diagnosticada y no anticoagulada
Turégano Yedro, Miguel
Polo García, José
Espinosa García, Jacinto
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Fibrilación auricular
Anticoagulación
Antiagregación
Atrial fibrillation
Anticoagulation
Antiaggregation
3205.01 Cardiología
3205.04 Hematología
3207.04 Patología Cardiovascular
Programa de Doctorado en Biología Molecular y Celular, Biomedicina y Biotecnología por la Universidad de Extremadura
Introducción: En la fibrilación auricular no valvular (FANV) con riesgo trombótico moderado-alto, las guías recomiendan la anticoagulación, aunque muchos pacientes no la reciben. El objetivo del estudio fue identificar a estos pacientes, analizando las principales causas de no anticoagulación.
Material y métodos: Estudio transversal, observacional y multicéntrico en población diagnosticada de FANV, con riesgo trombótico moderado-alto (CHADS2≥ 2), no tratados con anticoagulantes orales (ACOs). Se determinó la prevalencia de fibrilación auricular (FA), además de variables clínicas y sociodemográficas.
Resultados: La prevalencia de FA fue del 4,5%, presentando el 80,7% de los pacientes FANV y no recibiendo ACOs el 20,0%. Se incluyeron 1.310 pacientes no tratados con ACOs (51,8% varones, edad media 75,95 años). El tiempo medio con FA fue de 58,48 meses. La principal decisión terapéutica fue el tratamiento con antiagregantes (82,4%). Los principales motivos para no anticoagular fueron: negativa del paciente a la monitorización (37,3%), alto riesgo de sangrado (31,3%), e hipertensión no controlada (27,9%). El valor medio de las escalas CHADS2, CHA2DS2-Vasc y HAS-BLED fue de 2,96, 4,58 y 2,70 respectivamente. Los factores tromboembólicos más comunes fueron hipertensión (89,1%) y edad ≥ 75 años (61,5%). Los factores hemorrágicos más frecuentes fueron: fármacos con riesgo de sangrado (41,2%) y presión arterial no controlada (33,7%).
Conclusiones: Un elevado porcentaje de pacientes con FANV con criterios de anticoagulación no la recibían, tratándose principalmente con antiagregantes. Los pacientes incluidos presentaron múltiples factores de riesgo tromboembólicos y hemorrágicos. La mayoría de éstos no presentaba contraindicación clara para la toma de ACOs.
Introduction: In nonvalvular atrial fibrillation (nvaf) with moderate-high thrombotic risk, the guidelines recommend anticoagulation, although many patients do not receive it. The objective of the study was to identify these patients, analyzing the main causes of non-anticoagulation.
Material and methods: Cross-sectional, observational and multicenter study in a population diagnosed with NVAF, with moderate-high thrombotic risk (CHADS2≥ 2), not treated with oral anticoagulants (OACs). The prevalence of atrial fibrillation (AF) was determined, as well as clinical and sociodemographic variables.
Results: The prevalencia of AD vas 4.5%, with 80.7% of patients presenting NVAF and 20.0% not receiving OACs. 1310 patients not treated with OACs were included (51.8% male, mean age 75.95 years). The mean time with AF was 58.48 months. The main therapeutic decision was antiplatelet treatment (82.4%). The main reasons for not anticoagulation were: patient refusal to monitor (37.3%), high risk of bleeding (31.3%) and uncontrolled hypertension (27.9%).
The mean value of the CHADS2, CHA2DS2-Vasc and HAS-BLED scales was 2.96, 4.58 and 2.70 respectively. The most common thromboembolic factors were hypertension (89.1%) and age ≥ 75 years (61.5%). The most frequent bleeding factors werw: drugs with risk of bleeding (41.2%) and uncontrolled blood pressure (33.7%).
Conclusions: A high porcentaje of patients with NVAF with anticoagulation criteria did not receive it, treating mainly with antiplatelet agents. The included patients presented multiple thromboembolic and hemorrhagic risk factors. Most of these did not present a clear contraindication for taking OACs.
2021-09-23T07:56:03Z
2021-09-23T07:56:03Z
2021
2021-07-02
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/12480
spa
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
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226 p.
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/12480
oai:dehesa.unex.es:10662/40272023-06-09T08:39:25Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Acetilación, autofagia y Enfermedad de Parkinson
Diop, Sokhna Maryama Seydina Yakhine
Bravo San Pedro, José Manuel
González Polo, Rosa Ana
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Acetilación
Acetil-coenzima A
Enfermedad de Parkinson
Histonas acetiltransferasas
Histonas desacetilasas
LRRK2
Mitocondria
Acetylation
Acetyl-coenzyme A
Parkinson’s disease
Histone acetyltransferases
Histone deacetylases
LRRK2
Mitochondrion
2302 Bioquímica
3207.04 Patología Cardiovascular
3205.06 Nefrología
3207.11 Neuropatología
2410.07 Genética Humana
La enfermedad de Parkinson (EP) es un desorden neurodegenerativo progresivo y crónico. La mayoría de los casos de Parkinson son idiopáticos debido a una combinación de herencia poligénica, una exposición medioambiental y a una interacción genética-medioambiental. Estos factores ejercen mecanismos epigenéticos que modulan la estructura de la cromatina y la expresión de los genes. Las modificaciones epigéneticas son cambios adquiridos de manera reversible con el tiempo y que modifican el fenotipo celular. Unos de los mecanismos involucrados en la patogénesis de la EP es la acetilación de las histonas que está regulada por las actividades de las histonas acetiltransferasas (HATs) y las histonas deasacetilasas (HDACs). Esta modificación post-traduccional es depediente del metabolismo energético y de los niveles de acetil-coenzima A (acetil-CoA) cuya fuente es la mitocondria, un orgánulo alterado en la EP, produciéndose una desregulación de la homeostasis celular. El propósito de esta tesis doctoral es estudiar los niveles de proteínas acetiladas en un modelo de fibroblastos primarios entre grupos idiopático y genético con la mutación G2019S de la proteína LRRK2. Por lo tanto analizamos las actividades de las enzimas involucradas y los niveles de acetil-CoA. Los resultados muestran que hay un desequilibrio de las actividades HATs/HDACs y que los fenotipos entre individuos idiopático y genético son diferentes.
Parkinson's disease (PD) is a chronic and progressive neurodegenerative disorder. Most of PD cases are idiopathic due to a combination of polygenic inheritance, an environmental exposure and genetic-environmental interaction. These factors promote epigenetic mechanisms that modulate chromatin structure and gene expression. Epigenetic modifications are reversible over time and influence cellular phenotype. One of the mechanisms involved in the pathogenesis of PD is histone acetylation which is regulated by histone acetyltransferases (HATs) and histone deacetylases (HDACs) activities. This post-translational modification depends on the energetic metabolism and the levels of acetyl coenzyme A (acetyl-CoA) whose source is the mitochondrion, an altered organelle in PD, resulting in the dysregulation of cellular homeostasis. The purpose of this thesis is to study the levels of acetylated proteins in a model of primary fibroblasts among idiopathic and genetic groups with the G2019S LRRK2 protein mutation. Therefore, we analyze the activities of involved enzymes and the levels of acetyl-CoA. The results show that there is an imbalance of HATs/HDACs activities and the phenotypes between idiopathic and genetic individuals are different.
2016-03-17T12:24:41Z
2016-03-17T12:24:41Z
2016-03-17
2016-03-11
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/4027
0000-0002-0163-2953
0000-0001-6910-2089
0000-0002-5781-1133
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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146 p.
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Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/4027
oai:dehesa.unex.es:10662/38002021-07-28T11:45:40Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Perfil bioquímico del riesgo cardiovascular en población extremeña y su relación con la asistencia nefrológica
Labrador Gómez, Pedro Jesús
Fuentes Rodríguez, José Manuel
Gómez-Martino Arroyo, Juan Ramón
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Riesgo cardiovascular
Prevalencia
Enfermedad renal crónica
Cardiovascular risk
Prevalence
Chronic kidney disease
3202 Epidemiología
3207.04 Patología Cardiovascular
3205.06 Nefrología
Las enfermedades cardiovasculares son la principal causa de muerte en Extremadura. La elevada presencia de factores de riesgo cardiovascular en la población extremeña podría justificarla.
El objetivo de nuestro trabajo ha sido analizar la prevalencia de los parámetros bioquímicos del riesgo cardiovascular y la estratificación del mismo en la población extremeña.
Material y métodos.- Se han recogido todos los controles bioquímicos solicitados por los médicos de Atención Primaria del Área de Salud de Cáceres durante cinco años. Se ha analizado la prevalencia de diabetes, glucemia basal alterada, trastornos lipídicos, disminución del filtrado glomerular y proteinuria.
Se ha estratificado el riesgo cardiovascular de acuerdo a diferentes funciones. Se ha comparado las diferencias en la estimación del filtrado glomerular entre las ecuaciones CKD-EPI y MDRD. De acuerdo con las guías de tratamiento del colesterol se ha analizado el número de pacientes que precisarían iniciar tratamiento.
Resultados.- Se analizaron 304.523 analíticas de 97.470 pacientes. La prevalencia de diabetes, dislipemia fue del 4.5% y 53.4%. La afectación renal fue del 7.6%. Dependiendo de la función utilizada la prevalencia de riesgo cardiovascular elevado estuvo entre el 5.8% y el 35.7%. La necesidad de iniciar tratamiento con estatinas se situó entre el 5-35%.
Sólo un 1% de los pacientes analizados cumpliría criterios de remisión a nefrología.
Conclusiones.- La prevalencia de factores de riesgo cardiovascular en población extremeña es elevada. Hasta uno de cada tres pacientes puede ser considerado de alto riesgo con un simple control bioquímico. El inicio de tratamiento con estatinas sería recomendado hasta en el 33% de los controles bioquímicos.
Cardiovascular disease remains the leading cause of mortality in Extremadura. High prevalence of cardiovascular risk factors could be the reason.
The aim of our study was to analyse the prevalence of biochemical cardiovascular risk factors and to stratify cardiovascular risk in general population.
Material and Methods.- We collected all laboratory investigations from Primary Care along five years. Prevalence of diabetes, impaired fasting glucose, dyslipidaemia, reduced renal function and/or elevated urinary excretion of albumin.
Cardiovascular risk was stratified according to different functions. Equations to estimate glomerular filtration rate were compared. Need for statins use was determinated according to cholesterol treatment guidelines.
Results.- 304.523 laboratory investigations from 97.470 patients were analysed. Prevalence of diabetes and dyslipidaemia was 4.5 and 53.4%. Renal damage was present in 7.6%. High cardiovascular risk was present in 5.8 to 35.7% depending on cardiovascular function used. Need for statins use was 5 to 35%.
Only 1% of patients required referral to Nephrology.
Conclusions.- There is a high prevalence of cardiovascular risk factors in Extremadura. Until 33% of patients are stratified as high cardiovascular disease after a laboratory investigation. And 33% of patients required statins.
2016-02-05T12:43:47Z
2016-02-05T12:43:47Z
2016-02-05
2015-12-11
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/3800
0000-0001-6910-2089
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España
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Hispana
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/3800
oai:dehesa.unex.es:10662/155402023-02-09T08:41:53Zcom_10662_37com_10662_29com_10662_27col_10662_161col_10662_85
Rutas moleculares que determinan el posicionamiento de los centriolos en células de “Drosophila” y la diferenciación del epitelio respiratorio de vertebrados
Garrido Jiménez, Sergio
Carvajal González, José María
Universidad de Extremadura. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Genética
Polaridad Celular
Células epiteliales
Centriolos
Cell Polarity
Epithelial cells
Centrioles
2407.01 Cultivo Celular
2407.05 Cultivo de Tejidos
2302.21 Biología Molecular
Programa de Doctorado en Biología Molecular y Celular, Biomedicina y Biotecnología por la Universidad de Extremadura
A lo largo del desarrollo de los organismos pluricelulares tienen lugar, de forma simultánea, multitud de procesos que se encuentran estrechamente regulados, y en los que la alteración de esta regulación provoca graves defectos, afectando a la viabilidad de los individuos. Entre estos procesos, el posicionamiento de los orgánulos en el interior celular o un adecuado balance entre las poblaciones celulares que conforman distintos tejidos juegan un papel esencial en el desarrollo y la morfogénesis. Concretamente, el correcto posicionamiento de orgánulos como los centriolos es clave en la división celular orientada o el movimiento coordinado de los cilios. Estudios previos demostraron que la ruta de polaridad celular planar (Fz-PCP) juega un importante papel en el establecimiento de estos patrones posicionales. En el presente trabajo profundizamos en esta regulación a través del estudio del papel de los conocidos como Efectores de PCP, así como el papel del citoesqueleto de actina en la regulación de la polaridad de los centriolos. Además, estudiamos también el papel de otra vía de PCP conocida como Ft/Ds-PCP. Por otro lado, la señalización celular mediada por proteínas como p53 ha demostrado ser clave para el correcto desarrollo de organismos pluricelulares. Miembros de la familia de p53 como p73 y p63 juegan un papel clave en la diferenciación del epitelio respiratorio, sin embargo, la función de p53 en este proceso es ampliamente desconocida. En base a esto, nos proponemos caracterizar el papel de P53 en la diferenciación del epitelio respiratorio.
Throughout the development of multicellular organisms, a multitude of processes that are closely regulated take place simultaneously, and in which the alteration of this regulation causes serious defects, affecting the viability of individuals. Among these processes, the positioning of organelles inside the cell or an adequate balance between the cell populations that make up different tissues play an essential role in development and morphogenesis.
Specifically, the correct positioning of organelles such as centrioles is key in targeted cell division or coordinated movement of cilia. Previous studies demonstrated that the planar cell polarity pathway (Fz-PCP) plays an important role in establishing these positional patterns. In the present work we delve into this regulation through the study of the role of what are known as PCP effectors, as well as the role of the actin cytoskeleton in the regulation of centriole polarity. In addition, we have also studied the role of another PCP pathway known as Ft / Ds-PCP. On the other hand, cell signaling mediated by proteins such as p53 has proven to be key to the correct development of multicellular organisms. Members of the p53 family such as p73 and p63 play a key role in the differentiation of the respiratory epithelium, however, the role of p53 in this process is largely unknown. Based on this, we propose to characterize the role of P53 in the differentiation of the respiratory epithelium.
2022-09-27T11:09:49Z
2022-09-27T11:09:49Z
2022
2022-05-13
doctoralThesis
http://hdl.handle.net/10662/15540
0000-0001-6576-830X
spa
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
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228 p.
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
Universidad de Extremadura
http://hdl.handle.net/10662/15540