Apoptotic markers can be used to forecast the freezeability of stallion spermatozoa

Abstract

In an attempt to identify valuable markers for potential freezeability of the equine spermatozoa, three ejaculates were collected from five Andalusian stallions and frozen using a standard protocol. Before freezing, three apoptotic cell markers were studied by flowcytometry (early changes in sperm membranes, mitochondrial membrane potential and caspase activity). Post-thaw, spermatozoa were again evaluated for these parameters. Sperm kinematics using CASAwere also studied before and after freezing and thawing. Receiving operating system curves were used to evaluate the relative value of the apoptotic markers herein studied, as forecast for potential freezeability. Fromall parameters studied, the outcome of JC-1 (as proportion of spermatozoa showing simultaneously orange and green fluorescence) had the highest diagnostic power. For potentially bad freezers (less than 25% of intact spermatozoa postthaw), the significant area under the ROC-curve was 0.985, with a 100% sensitivity and 99.8% specificity for a cut off value of 55.7.

En un intento por identificar marcadores valiosos para la posible congelación de los espermatozés equinos, se recogieron tres eyaculatas de cinco sementales andaluces y se congelaron mediante un protocolo estándar. Antes de la congelación, se estudiaron tres marcadores de células apoptóticas por citometría de flujo (cambios tempranos en las membranas de espermatozamiento, potencial de membrana mitocondrial y actividad de la caspasa). Después de la descongelación, se volvió a evaluar los espermatozzos para estos parámetros. También se estudiaron cinemáticas con CASA antes y después de congelarse y descongelar. Las curvas del sistema operativo Recibido se utilizaron para evaluar el valor relativo de los marcadores apoptoticos aquí en estudio, como pronóstico para la congelación potencial. De todos los parámetros estudiados, el resultado de JC-1 (como proporción de espermatozá que muestra simultáneamente fluorescencia naranja y verde) tuvo la máxima potencia diagnóstica. Para los congeladores potencialmente malos (menos del 25% de los espermatozadores intactos post-cecho), el área significativa bajo la curva ROC fue de 0.985, con una sensibilidad 100% y 99,8% de especificidad para un valor cortado de 55.7.