Técnica de sobreexpresión génica

Abstract

Para la introducción de proteínas exógenas marcadas (plásmidos bacterianos en ocasiones marcados) se realiza una transfección, que consiste en la introducción de ADN o ARN de un virus o bacteriófago procariota en el interior celular. Después, se realiza una transfección química. Finalmente, se observan las células al microscopio de fluorescencia y si la transfección presenta una buena eficiencia. 24 horas más tarde, se realiza el tratamiento en medio completo, se fijan (placa de 24 o 96 pocillos) y se montan las lamelas (placa 24 pocillos) para su observación si se va a realizar la técnica de inmunofluorescencia o se lisan (placa 6 pocillos) si se va a realizar análisis de la sobreexpresión por Western blotting.

For the introduction of tagged exogenous proteins (sometimes tagged bacterial plasmids), a transfection is performed, which involves the introduction of DNA or RNA from a prokaryotic virus or bacteriophage into the cell interior. This is followed by chemical transfection. Finally, the cells are observed under a fluorescence microscope to determine whether the transfection is efficient. 24 hours later, the cells are treated in complete medium, fixed (24- or 96-well plate) and lamellae are mounted (24-well plate) for observation if immunofluorescence is to be performed or lysed (6-well plate) if overexpression analysis by Western blotting is to be performed.