Análisis Pulse-Chase

Abstract

Se siembran células en placas de 6 pocillos (130184, Biolite) a la densidad adecuada. Dejar un pocillo más de control. Se procede al Marcaje con L-[14C]-Valina. Se aplica Pre-Chase por espacio de una hora, mientras se preparan los distintos tratamientos a realizar en el experimento, utilizando el medio con L-Valina. Tras ese tiempo, se cogen las placas, se resuspende muy bien el contenido de los pocillos y se recoge el volumen que haya en los eppendorfs rotulados como Rc. Las muestras en los eppendorfs pueden quedarse a temperatura ambiente hasta su análisis. Se dejan rotulados los tubos de centelleo, como ha sucedido con los eppendorfs.

Seed cells in 6-well plates (130184, Biolite) at the appropriate density. Leave an extra control well. Proceed to L-[14C]-Valine labelling. Pre-Chase is applied for one hour, while the different treatments to be carried out in the experiment are prepared, using the medium with L-Valine. After this time, take the plates, resuspend the contents of the wells very well and collect the volume in the eppendorfs labelled Rc. The samples in the eppendorfs can remain at room temperature until analysis. The scintillation tubes are left labelled, as with the eppendorfs.