Cleavage of focal adhesion proteins and PKCδ during lovastatin-induced apoptosis in spontaneously immortalized rat brain neuroblasts

Abstract

We have previously shown that lovastatin induces apoptosis in spontaneously immortalized rat brain neuroblasts. Focal adhesion proteins and protein kinase Cdelta (PKCdelta) have been implicated in the regulation of apoptosis. We found that lovastatin exposure induced focal adhesion kinase, Crk-associated substrate (p130(Cas)), PKCdelta cleavage and caspase-3 activation in a concentration-dependent manner. Lovastatin effects were fully prevented by mevalonate. The cleavage of p130(Cas) was almost completely inhibited by z-DEVD-fmk, a specific caspase-3 inhibitor, and z-VAD-fmk, a broad spectrum caspase inhibitor, indicating that cleavage is mediated by caspase-3. In contrast, the lovastatin-induced cleavage of PKCdelta was only blocked by z-VAD-fmk suggesting that PKCdelta cleavage is caspase-dependent but caspase-3-independent. Additionally, z-VAD-fmk partially prevented lovastatin-induced neuroblast apoptosis. The present data show that lovastatin may induce neuroblast apoptosis by both caspase-dependent and independent pathways. These findings may suggest that the caspase-dependent component leading to the neuroblast cell death is likely to involve the cleavage of focal adhesion proteins and PKCdelta, which may be partially responsible for some biochemical features of neuroblast apoptosis induced by lovastatin.

Anteriormente hemos demostrado que la lovastatina induce la apoptosis en neuroblastos de cerebro de rata espontáneamente inmortalizados. Las proteínas de adhesión focal y la proteína quinasa Cdelta (PKCdelta) han sido implicadas en la regulación de la apoptosis. Descubrimos que la exposición a lovastatina inducía la quinasa de adhesión focal, el sustrato asociado a Crk (p130(Cas)), la escisión de PKCdelta y la activación de la caspasa-3 de forma dependiente de la concentración. Los efectos de la lovastatina fueron totalmente prevenidos por el mevalonato. El clivaje de p130(Cas) fue inhibido casi por completo por z-DEVD-fmk, un inhibidor específico de la caspasa-3, y z-VAD-fmk, un inhibidor de caspasas de amplio espectro, lo que indica que el clivaje está mediado por la caspasa-3. Por el contrario, los efectos de la lovastatina fueron evitados por completo por el mevalonato. Por el contrario, la escisión de PKCdelta inducida por lovastatina sólo fue bloqueada por z-VAD-fmk, lo que sugiere que la escisión de PKCdelta es dependiente de la caspasa pero independiente de la caspasa-3. Además, z-VAD-fmk previno parcialmente la apoptosis de neuroblastos inducida por lovastatina. Los presentes datos muestran que la lovastatina puede inducir la apoptosis de neuroblastos por vías tanto dependientes como independientes de la caspasa. Estos hallazgos pueden sugerir que el componente dependiente de la caspasa que conduce a la muerte celular de los neuroblastos es probable que implique la escisión de las proteínas de adhesión focal y PKCdelta, que puede ser parcialmente responsable de algunas características bioquímicas de la apoptosis de neuroblastos inducida por lovastatina.