Identificación de la especie de origen en productos lácteos comerciales: comparación de dos métodos de extracción de ADN

Abstract

La identificación de las especies de origen en productos lácteos mediante métodos analíticos es necesaria tanto para la industria alimentaria como para los organismos de control oficiales. Además de la creciente preocupación de los consumidores por la alimentación, hacen necesario desarrollar protocolos de extracción e identificación del ADN para verificar la trazabilidad de los productos de origen animal. En este estudio se ha realizado la extracción de ADN mediante dos métodos diferentes con el fin de elegir el más adecuado. Uno de ellos es la técnica de HotSHOT y el otro método empleado es el kit comercial G-SpinTM. Se determinó la calidad y la cantidad de ADN obtenido con los dos métodos mediante electroforesis en gel de agarosa y espectrofotometría respectivamente. Con el método HotSHOT se obtuvo mayor concentración de ADN mientras que con el kit comercial G-SpinTM se obtuvo mejor calidad, por lo que se seleccionó éste último para el desarrollo del estudio. Por último se realizó la amplificación del ADN mitocondrial (genes 12S y 16S de ARNr) mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y se visualizaron los resultados mediante electroforesis en gel de agarosa. Con una sola PCR múltiple se ha podido identificar la especie de origen (vaca, cabra, oveja y búfala) en derivados lácteos. Se han analizado 33 muestras de productos lácteos comerciales (queso, leche y yogur) con el objetivo de determinar si se cometen fraudes alimentarios referentes al etiquetado. En el 12% de los quesos analizados, los resultados obtenidos con la PCR no coinciden con la información del etiquetado. La PCR que se ha desarrollado en este estudio ha demostrado ser una técnica rápida, sensible y específica, siempre que se disponga de ADN de calidad, con capacidad para ser amplificado. Se ha demostrado una sensibilidad del método del 0’5%.

The identification of species of origin in dairy products with analytical methods is necessary not only for the food industry, but also for the official control organizations. In addition to the growing concern of consumers by the food, making it necessary to develop extraction and identification protocols of DNA to verify the traceability of animal products. In this study DNA extraction has been performed using two different methods in order to choose the most appropriate one. One of them is the HotSHOT technique and the other method used is the commercial G-SpinTM kit. The quality and quantity of DNA obtained with the two methods were determined by agarose gel electrophoresis and spectrophotometry respectively. With the HotSHOT method, the main DNA concentration was obtained while the commercial G-SpinTM kit obtained the best quality, so the last one was selected for the development of this study. Finally mitochondrial DNA amplification (12S and 16S rRNA genes) was performed by the polymerase chain reaction (PCR) and the results were visualized by agarose gel electrophoresis. With a single multiple PCR, it has been possible to identify the species of origin (cow, goat, sheep and buffalo) in dairy products. Thirty-three samples of commercial dairy products (cheese, milk and yogurt) have been analysed in order to detect food fraud referent to labelling. In 12% of the cheeses analysed, the results obtained with the PCR do not correspond with the labelling information. The PCR developed in this study has proved to be a fast, sensitive and specific technique, provided that quality DNA is available, with capacity to be amplified. A sensitivity of the 0.5% method has been demonstrated.