Estudio de microRNAs (miRNAs) vehiculados en vesículas extracelulares de orina, mediante secuenciación masiva, como posibles biomarcadores de riesgo tumoral en sujetos con pólipos colónicos y familiares de pacientes con cáncer colorrectal

Abstract

Introducción: Detectar biomarcadores diagnósticos precoces de CCR por métodos no invasivos puede mejorar la incidencia y la mortalidad. Los microRNAs y las microvesículas urinarias (MVU) pueden ser útiles como biomarcadores de patología colónica neoplásica (CCR) o preneoplásica. Material y método: Estudio observacional analítico y prospectivo de muestras de orina de sujetos familiares de primer grado de pacientes con CCR (AF CCR) y un grupo control. Mediante citometría de flujo y secuenciación masiva con RT-PCR se estudiaron el perfil de las tetraspaninas y los microRNAs vehiculados por las MVU. Resultados: Se incluyeron 46 sujetos (edad media 53,52 ±7,71 años). El 69,39% presentaban AF CCR (grupo 1: 20 con pólipos hiperplásicos o sin pólipos y grupo 2: 11 con adenomas). Quince sujetos (grupo 3: controles) carecían de AF CCR ni presentaron pólipos. Se analizaron 18 muestras urinarias. Tres microRNA (miR-92a-3p, miR-141-3p y miR-30d-5p ) se expresaron diferencialmente (p<0,05) en los sujetos con AF CCR comparados con controles. El perfil de tetraspaninas CD9, CD63 y CD81 de sujetos AF CCR fue diferente al perfil de controles. Conclusiones: 1. Tres miRNAs se expresan diferencialmente en las MVU de los sujetos AF CCR comparados con los controles. 2. La amplificación masiva RT-PCR es un método válido para el estudio de los microRNAs vehiculados por MVU. La orina puede ser un líquido biológico excelente para el análisis de biomarcadores. 3. El perfil de las tetraspaninas de los sujetos AF CCR es diferente a los controles. Esto permite hipotetizar que podrían servir de biomarcador de biomarcadores.

Introduction: Detecting early diagnostic biomarkers of CRC by non-invasive methods can improve incidence and mortality. MicroRNAs and urinary microvesicles (UMV) may be useful as biomarkers of colonic neoplastic (CRC) or preneoplastic pathology. Material and Methods: Analytical and prospective observational study of urine samples from first-degree relatives of patients with CRC (FDR CRC) and a control group. Using flow cytometry and NSG RT-PCR, the profile of tetraspanins and microRNAs carried by the UMVs were studied. Results: Forty-six subjects (mean age 53.52 ±7.71 years) were included. 69.39% were FDR CRC (group 1: 20 with hyperplastic polyps or without polyps and group 2: 11 with adenomas). Fifteen subjects (group 3: controls) were not FDR CRC and had no polyps. Eighteen urinary samples were analyzed. Three microRNAs (miR-92a-3p, miR-141-3p and miR-30d-5p ) were differentially expressed (p<0.05) in FDR CRC subjects compared to controls. The CD9, CD63 and CD81 tetraspanin profile of FDR CRC subjects was different from the profile of controls. Conclusions: 1. Three miRNAs are differentially expressed in the MVUs of FDR CRC subjects compared to controls. 2. NGS RT-PCR is a valid method for the study of microRNAs carried by MVU. Urine can be an excellent biological fluid for biomarker analysis. 3. The tetraspanin profile of FDR CRC cases is different from controls. This allows us to hypothesize that they could be used as a biomarker of biomarkers.