Phospho-STIM1 is a downstream effector that mediates the signaling triggered by IGF-1 in HEK293 cells.

Abstract

STIM1 es un sensor de Ca(2+) del retículo endoplásmico (RE) que activa los canales de Ca(2+) de la membrana plasmática cuando se agotan los niveles de Ca(2+) en el RE. Durante la deprivación de las reservas de Ca(2+) provocada por el tratamiento con tapsigargina, ERK1/2 fosforila STIM1 en la Ser575, Ser608 y Ser621. Esta fosforilación desempeña un papel en la regulación de la disociación de STIM1, del extremo positivo de la proteína de unión a los microtúbulos EB1, un paso esencial para la activación de STIM1 por la tapsigargina. Sin embargo, poco se sabe sobre el papel fisiológico de esta fosforilación. Dado que el IGF-1 desencadena la activación de las vías RAF-MEK-ERK y fosfoinositol, se estudió el papel de la fosforilación de STIM1 en la estimulación por IGF-1. Se observó que la fosforilación de STIM1 se producía en una fase temprana de la activación. Se observó fosforilación de ERK1/2 tanto en presencia como en ausencia de Ca(2+) extracelular, lo que demuestra que el influjo de Ca(2+) no es esencial para la activación de ERK1/2. Paralelamente, IGF-1 desencadenó la fosforilación de STIM1 en la vía RAF-MEK-ERK y en la vía de fosfoinositol. Paralelamente, el IGF-1 desencadenó la fosforilación de STIM1 en los sitios mencionados, un efecto que fue bloqueado por el PD0325901, un inhibidor de MEK1/2 utilizado para bloquear la activación de ERK1/2. Además, STIM1-GFP se activó en presencia de Ca(2+) extracelular. Además, STIM1-GFP se encontró en agrupaciones tras la estimulación con IGF-1, y STIM1-S575A/S608A/S621A-GFP redujo fuertemente esta multimerización. Curiosamente, fosfo-STIM1 se encontró principalmente en los grupos cuando las células fueron tratadas con IGF-1, y el IGF-1 desencadenó la disociación de STIM1 de EB1, de forma similar a lo observado para el tratamiento con tapsigargina, lo que sugiere que STIM1 media la vía de señalización IGF-1. Por lo tanto, se realizó un estudio de la translocación de NFAT estimulada por IGF-1, encontrando que STIM1-S575A/S608A/S621A bloqueaba esta translocación, al igual que la proteína de fusión STIM1-EB1, confirmando que tanto la fosforilación de STIM1 como la disociación de STIM1-EB1 son necesarias para la señalización dependiente de Ca(2+) desencadenada por IGF-1, y demostrando que la fosforilación de STIM1 desempeña un papel como efector descendente de la vía RAF-MEK-ERK y como activador ascendente de la entrada de Ca(2+).